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1基本技术实验电子教案适用生物科学、动物科学专业主讲：彭友林，郭春秋，熊大胜，刘良国湖南文理学院生物学基础实验教学中心2008年4月2课程名称基本技术实验授课专业生物科学、动物科学（本科）授课教师彭友林，郭春秋，熊大胜，刘良国主要参考文献：刘凌云，郑光美主编.普通动物学实验指导.北京：高等教育出版社，1997.解景田，赵静主编.生理学实验（第二版）.北京：高等教育出版社，2002.杨秀平主编.动物生理学实验.北京：高等教育出版社，2004.杨芳炬主编.机能学实验.成都：四川大学出版社，2002.樊继云，冯逵，刘燕编.生理学实验与科研训练.北京：中国协和医科大学出版社，2003.王竹立，林明栋主编.实验生理科学.广州：中山医科大学实验生理科学教研室，2000.北京微信斯达科技发展有限责任公司编.Pclab生物医学信号采集处理系统使用说明书.2004.马恒东主编.动物生理学实验指导.成都：四川科学技术出版社，2003.韩秋生，徐国成，邹卫东等主编.组织胚胎学彩色图谱（第三版）.沈阳：辽宁科学技术出版社，2003.学时分配表序号实验名称时数备注实验1光学显微镜及体视镜构造和使用3实验2生物信号采集与分析技术实验3培养基制作以及灭菌消毒技术实验4细胞组织培养技术实验5生物切片技术实验6光谱分析技术*实验29称量、离心及微量移液技术6必开实验30图像采集与分析技术（CAI课件）实验31PCR技术（CAI课件）实验32电泳层析技术介绍（CAI课件）实验43分子生物学实验技术介绍（CAI课件）实验1光学显微镜及体视镜的构造和使用方法一、实验目的31、了解光学显微镜及体视镜的一般构造和性能；2、学会正确地使用光学显微镜及体视镜，熟练地掌握对光，低高倍物镜的使用技术，以及显微镜的维护；3、学会临时装片的制作和徒手切片。二、重点与难点正确地使用光学显微镜及体视镜，熟练地掌握对光，低高倍物镜的使用技术。三、教学方法与手段本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。四、实验内容1、光学显微镜的构造、使用方法及维护；2、临时装片的制作及徒手切片的练习；3、体视镜的一般结构及使用方法。五、实验材料洋葱（Alliumcepa）根尖永久装片；洋葱（Alliumcepa）鳞片叶；油菜（Brassicacampestris）或水稻（Oryzasativa）花粉。六、实验用品普通光学显微镜、体视显微镜；镊子、载玻片、盖玻片、培养皿、纱布、吸水纸、擦镜纸、滴瓶、毛笔；碘液、水。七、实验方法（一）普通光学显微镜的构造、使用方法及维护1、显微镜的构造显微镜的基本结构可以分两部分，即光学部分与机械部分。（1）光学部分①物镜、②目镜、③聚光器、④虹彩光圈、⑤反光镜、⑥镜筒（2）机械部分①镜座、②镜柱、③镜臂、④载物台、⑤物镜转换器、⑥调焦螺旋2、显微镜的使用方法（1）正确安置显微镜、（2）对光、（3）低倍物镜的使用、（4）高倍物镜的使用（5）浸油物镜的使用、（6）显微镜的使用练习、（7）用毕复原3、显微镜的放大倍数4、光学显微镜的显微测微法（1）显微测微计①镜台测微计、②目镜测微计（2）测量方法用目镜测微计测量细胞的大小时，先要用镜台测微计校正目镜测微计中每一格相当于多少微米，然后用目镜测微尺测量细胞的实际大小。具体方法如下：①将镜台测微计放在载物台上，调节好显微镜，使其刻度清晰可见。②再把目镜测微计放在目镜内的视野光阑上。③调节台尺，使镜台测微计上的零点与目镜测微计上的零点相重叠，再找出这两个测微计的刻度第二次重叠的地方，并计算目镜测微计上的每一刻度相当多少微米。如目镜测微计第15格正对镜台测微计上的24小格时：目镜测微计每小格的长度=目镜测微计格数10镜台测微计的格数μm=151024=16μm④移去台尺，换上玻片标本观察，用目镜测微计测量视野中物体的大小（标本所占目镜的4小格数×目镜测微计每小格的长度）。在进行测量时如变换显微镜，或改变目镜与物镜的倍数时，都必须进行换算校正，其次为了测量的准确性，在换算及测量时，至少要测量三次，并求其平均值，得到精确的数值。5、显微镜的维护（1）显微镜是精密的光学仪器，使用时一定要严格地按规程进行操作。（2）在使用过程中，如发生故障，应及时报告老师，以防损坏。（3）要保持显微镜各部件的清洁，尤其是光学部分，切不可让镜头沾水或化学药剂，用后必须用干净柔软的绸布或镜头纸擦净。（4）显微镜的存放要做到四防：防潮、防腐、防热、防撞击。（二）临时装片的制作及徒手切片的练习1、临时装片的制作（1）准备、（2）取材、（3）盖上盖玻片、（4）染色、（5）观察2、徒手切片的练习（1）材料的选择①材料不宜太硬或太软，一般选择发育正常、健康的幼茎、幼根或植物的叶片，所取材料应放入水中，防止徒手切片时萎蔫。②若实验材料过于柔嫩，可用胡萝卜、土豆或塑料泡沫块等作支持物，把材料夹在其中切片；叶片可卷成筒状切片。③材料大小：一般直径不超过5mm，长度以1.5-2.5cm为宜。（2）徒手切片操作练习（以陆英（Sambucuschinensis）幼茎的横切为例）①切片、②选片、③制作临时装片、④观察（三）体视显微镜的一般结构及使用方法1、体视镜的一般构造2、体视镜的使用方法3、体视镜的使用练习八、作业与思考（一）作业l、简述光学显微镜的组成。2、低、高倍物镜的使用各应注意哪些事项？（二）思考题1、在显微镜下用手移动标本，为什么前后、左右的方向与显微镜中见到的恰恰相反？2、在制作临时装片时，应如何避免产生气泡？5实验2计算机生物信号采集处理系统的认识及使用计算机是一种现代化、高科技的自动信息分析、处理设备。随着电子计算机技术在生物、医学领域的广泛应用，使原先不易进行的某些生物信息的检测，变得简易可行。利用计算机采集、处理生物信息，让计算机进入机能学实验室已成为必然趋势。计算机生物信号采集处理系统就是以计算机为核心，结合可扩展的软件技术，集成生物放大器与电刺激器，并且具备图形显示、数据存储、数据处理与分析等功能的电生理学实验设备。对生物信号采集系统的了解和熟练使用，是今后对完成生理学实验的数据和图形采集、储存和处理所必须具备的基本技能之一。图1－1Pclab生物医学信号采集处理系统一、实验目的1、熟悉计算机生物信号采集处理系统的基本原理及组成；2、熟悉并掌握计算机生物信号采集处理系统的基本操作与使用方法。二、实验原理现代生物机能实验系统的基本原理是：首先将原始的生物机能信号，包括生物电信号和通过传感器引入的生物非电信号进行放大（有些生物电信号非常微弱，比如减压神经放电，其信号为微伏级信号，如果不进行信号的前置放大，根本无法观察）、滤波（由于在生物信号中夹杂有众多声、光、电等干扰信号，这些干扰信号的幅度往往比生物电信号本身的强度还要大，如果不将这些干扰信号滤除掉，那么可能会因为过大的干扰信号致使有用的生物机能信号本身无法观察）等处理，然后对处理的信号通过模数转换进行数字化并将数字化后的生物机能信号传输到计算机内部，计算机则通过专用的生物机能实验系统软件接收从生物信号放大、采集硬件传入的数字信号，然后对这些收到的信号进行实时处理，一方面进行生物机能波形的显示，另一方面进行生物机能信号的实时存贮，另外，它还可根据操作者的命令对数据进行指定的处理和分析，比如平滑滤波，微积分、频谱分析等。对于存贮在计算机内部的实验数据，生物机能实验系统软件可以随时将其调出进行观察和分析，还可以将重要的实验波形和分析数据进行打6印。图1－2Pclab系统工作原理模式图计算机生物信号采集处理系统由硬件和软件两大部分组成。硬件主要完成对各种生物电信号（如心电、肌电、脑电）与非生物电信号（如血压、张力、呼吸）的采集。并对采集到的信号进行调整、放大，进而对信号进行模/数（A/D）转换，使之进入计算机。软件主要用来对已经数字化了的生物信号进行显示、记录、存储、处理及打印输出，同时对系统各部分进行控制，与操作者进行对话。计算机生物信号采集处理系统在功能上基本可替代原来的刺激器、放大器、记录仪、示波器等。此外，引进模拟实验系统软件还可以演示简单重复的印证性实验，在动手前预习实验，甚至代替部分实验。微机生理系统已成为生理实验教学与研究的一个发展方向。1、传感器和放大器生物所产生的信息，其形式多种多样，除生物电信号可直接检取外，其他形式的生物信号必须先转换成电信号，对微弱的电信号还需经过放大，才能作进一步的处理。生物信号采集处理系统中的刺激和放大器都是由计算机程控的，其工作原理和一般的刺激器、放大器完全一样。主要的区别在于一般仪器是机械触点式切换，而生物信号采集处理系统是电子模拟开关，由电压高低的变化控制，是程序化管理，提高了仪器的可靠性，延长了仪器的寿命。2、生物信号的采集计算机在采集生物信号时，通常按照一定的时间间隔对生物信号取样，并将其转换成数字信号后放入内存，这个进程称为采样。(1)Ａ/D转换器生物信号通常是一种连续的时间函数，必需转换为离散函数，再将这个离散的函数按照计算机的“标准尺度”数字化，以二进制表达，才能被计算机所接受。Ａ/Ｄ转换设备能提供多路模/数转化和数/模转换。Ａ/Ｄ转换需要一定时间，这个时间的长短决定着系统的最高采样速度。Ａ/Ｄ转换的结果是以一定精度的数字量表示，精度愈高，（曲线的）幅度的连续性愈好。对一般的生物信号采样精度不应低于12位数字。转换速度和转换精度是衡量Ａ/Ｄ转换器性能的重要指标。(2)采样与采样有关的参数包括通道选择、采样间隔、触发方式和采样长度等方面。①通道选择一个实验往往要记录多路信号，如心电、心音、血压等。计算机对多路信号进行同步采样，是通过一个“多选一”的模拟开关完成的。在一个很短暂的时间内，计算机通7过模拟开关对各路信号分别选通、采样。这样，尽管对各路信号的采样有先有后，但由于“时间差”极短暂，因此，仍可以认为对各路信号的采样是“同步”的。②采样间隔原始信号是连续的，而采样是间断进行的。对某一路信号而言，两个相邻采样之间的时间间隔称为采样间隔。间隔愈短，单位时间内的采样次数愈多。采样间隔的选取与生理信号的频率也有关，采样速率过低，就会使信号的高频成分丢失。但采样速率过高会产生大量不必要的数据，给处理、存储带来麻烦。根据采样定律，采样频率应大于信号最高频率的2倍。实际应用时，常取信号最高频率的3～5倍来作为采样速率。③采样方式采样通常有连续采样和触发采样两种方式。在记录自发生理信号（如心电、血压）时，采用连续采样的方式。而在记录诱发生理信号（如皮层诱发电位）时，常采用触发采样的方式。后者又根据触发信号的来源分为外触发和内触发。④采样长度在触发采样方式中，启动采样后，采样持续的时间称为采样长度。它一般应略长于一次生理反应所持续的时间。这样既记录到了有用的波形，又不会采集太多无用的数据造成内存的浪费。3、生物信号的处理计算机生物信号采集处理系统因其强大的计算机功能，可起到滤波器的功能，而且性能远远超过模拟电路，恢复被噪音所淹没的重复性生理信号。人们可以测量信号的大小、数量、变化程度和变化规律，如波形的宽度、幅度、斜率和零交点数等参数。做进一步的分类统计、分析给出各频率分能量（如脑电、肌电及心率变异信号）在信号总能量中所占的比重，从而对信号源进行定位。对实验结果可以用计数或图形方式输出。对来自摄像机或扫描仪的图像信息经转换后，也可输入计算机进行分析。所以计算机生物信号采集处理系统，不仅具备了刺激器、放大器、示波器、记录仪和照相机等仪器的记录功能外，而且还兼有微分仪、积分仪、触发积分仪、频谱分析仪等信号分析器的信息处理功能。为节省存储空间，计算机可对其获得的数据按一定的算法进行压缩。4、动态模拟通过建立一定的数学模型，计算机可以仿真模拟一些生理过程，例如激素或药物在体内的分布过程、心脏的起搏过程、动作电位的产生过程等均可用计算机进行模拟。除过程模拟外，利用计算机动画技术还可在荧光屏上模拟心脏泵血、胃肠蠕动、尿液生成及兴奋的传导等生理过程。三、实验内容1、学习计算机生物信号采集处理系统的组成及原理。2、计算机生物信号采集处理系统的基