孕马血清促性腺激素的生物学测定

实验五孕马血清促性腺激素的生物学测定一.实验特点实验类型：设计型实验实验类别：专业基础课计划学时：4学时每组人数：4～5人二．实验目的要求生物学测定法是根据一些动物的靶器官和靶组织对激素反应程度来测定激素含量的方法，是最早应用于激素测定的经典方法，能够直接反应激素的生物活性，也称作激素的生物学效价，其它的测定方法往往以此种方法加以验证。要求学生通过孕马血清促性腺激素的活性测定，掌握激素的生物学测定方法。三．实验原理PMSG的生物学测定法是以即将达到性成熟或摘除垂体的小鼠或大鼠，注射含有待测激素样品后，观察其子宫或卵巢增重及卵泡发育等变化。凡是引起确定的生理变化的最低有效剂量，即相当于一个效价单位（如小鼠单位或大鼠单位）。母马在妊娠的40天，PMSG开始出现，增长至70天达到顶峰，持续到120天，每升血液中可达7万国际单位以上，然后开始下降，大约在170天时降到几乎测不出的程度。PMSG能促进动物卵巢机能，进而引起子宫增生和生长的变化。以性未成熟的小白鼠子宫增大程度为测定活性的根据，来测定该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低浓度，来进行计算预测定的PMSG样品的活性。即为能引起未成熟的小白鼠子宫增大一倍PMSG的量称之一个小白鼠单位。四．实验动物和器材1.同品系20～21日龄，体重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一实验教学组）。2.含PMSG血清样品或稀释的PMSG和灭菌生理盐水。3.5ml注射器5只，5号小针头5只，试管架1个，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸耳球一个，10ml试管5支，20ml试管二支，剪子，镊子。五．实验内容步骤1.将25只小白鼠随机分为5组，每组5只，其中4组为实验组，另一组做为对照组。2.取灭菌后的试管4支，分别加人生理盐水11、2、4、6ml，吸取1ml样品血清或PMSG稀释液加人到第一支试管中，充分混匀。再取此试管的稀释血清在其他三支试管中各加入2ml，混匀后其血清浓度分别为1/12，1/24，1/36和1/48。3.用4种浓度的稀释血清各注射小白鼠5只，每只小白鼠腹部皮下注射0.2ml。要求注射部位准确，不得外漏，各组小鼠不得混串。4.另外5只小白鼠按相同剂量注射生理盐水，作为对照组。5.注射后按常规饲养，待72小时后剖检，并与对照组相比较观察子宫增大情况，每组若有3只或3只以上的小白鼠子宫呈阳性反应（增大一倍以上），则认为该组浓度为阳性组。6.将最低的有效浓度血清分母乘5，所得的数值即为每ml血清样品中含有促性腺激素的小白鼠单位。六．实验结果1．所有实验组均为阴性2．所有实验组均为阳性第一种情况说明稀释倍数低了，第二种情况稀释倍数高了。剖检后小白鼠子宫变化记录1/12浓度1/24浓度1/36浓度1/48浓度阳性（只）阴性（只）阳性（只）阴性（只）阳性（只）阴性（只）阳性（只）阴性（只）七．实验报告要求认真完成实验报告，写出实验过程和所测得的实验结果并加以分析。