实验十细菌生化实验-微生物实验

实验十细菌生化实验一、实验目的1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。二、实验原理1、微生物对生物大分子的分解利用淀粉水解：淀粉酶油脂水解：脂肪酶明胶液化：蛋白酶石蕊牛乳试验：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。2、糖发酵试验产酸：溴甲酚紫指示剂大肠杆菌：产气肠杆菌：产气：杜氏小管检测大肠杆菌：产气肠杆菌：3、IMViC试验IMViC试验吲哚试验：甲基红试验（M.R.试验）：伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验）：柠檬酸盐试验：色氨酸酶：色氨酸→吲哚＋对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚（红色）大肠杆菌：产气肠杆菌：产酸能力：强，甲基红变红；弱：甲基红不变色大肠杆菌：阳性产气肠杆菌：阴性葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→2,3-丁二醇乙酰甲基甲醇→OH－→二乙酰＋精氨酸的胍基→红色化合物大肠杆菌：阳性产气肠杆菌：阴性能否利用柠檬酸作为碳源大肠杆菌：阴性产气肠杆菌：阳性三、实验材料1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa），普通变形杆菌（Proteusvularis），产气肠杆菌。2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支，普通变形杆菌（内装有倒置的德汉氏小管），蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugol’siodinesolution），甲基红指示剂，40%KOH，5%α-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。四、实验步骤1、细菌水解大分子物质试验淀粉水解试验培养基：淀粉培养基平板菌种：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌方法：平板上划“十”字接种注意：接种前在平板底部作记号；“十”字不要太大油脂水解试验培养基：油脂培养基平板菌种：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌方法：平板上划折线接种注意：接种前在平板底部作记号明胶液化试验培养基：试管明胶培养基菌种：大肠杆菌或产气肠杆菌方法：穿刺接种注意：20℃培养石蕊牛乳试验培养基：试管石蕊牛乳培养基（2支）菌种：粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌方法：斜面划线接种注意：观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。四、实验步骤1、细菌水解大分子物质试验2、糖发酵试验培养基：葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基（内装杜氏小管）（各3支）菌种：大肠杆菌和产气肠杆菌方法：分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基四、实验步骤1、细菌水解大分子物质试验2、糖发酵试验3、IMViC试验IMViC试验试验名称培养基名称菌种名称接种方式接种管数吲哚试验蛋白胨水培养基大肠杆菌和产气肠杆菌液体1甲基红试验葡萄糖蛋白胨培养基液体1伏普试验葡萄糖蛋白胨培养基液体1柠檬酸盐试验柠檬酸盐培养基斜面1五、实验报告1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“＋”表示阳性，“－”表示阴性。2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“－”表示不产酸或不产气。3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，以“+”表示阳性反应。“－”表示阴性反应。4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？五、实验报告5、假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？6、为什么大肠杆菌的甲基红反应阳性，而产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏－普试验最初底物与最终产物有何异同之处？7、说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用，可以用哪种化合物代替醋酸铅？