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血清总甲状腺素(TT4)诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程医院文件编号编写者审核者批准者医院：科：室：血清总甲状腺素(TT4)诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第1页1.原理本试剂盒采用包被抗原的竞争免疫分析法。T4-蛋白复合物包被于96孔荧免板，校准品或样品中的T4与固相表面T4竞争结合限量的Eu3+标记抗T4单克隆抗体。洗涤分离后,微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的TT4浓度呈负相关，通过校准曲线可得出样品中TT4浓度。2.样本处理静脉取血，待血凝结后离心取血清，血清样本可于2～8℃保存一周。不要使用血浆或有严重溶血的血清。3.试剂本科室使用苏州新波生物技术有限公司血清总甲状腺素(TT4)时间分辨荧光免疫法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：a.包被有T4-蛋白复合物的96孔板：一块（12孔×8）b.铕（Eu3+）标记的抗T4单克隆抗体（铕标记）：一瓶,1.0mlc.校准品（A、B、C、D、E、F）：一套,1.0ml/瓶d.浓缩洗液：一瓶,40mle.荧光增强液：一瓶,30mlf.分析缓冲液：一瓶,40mlg.吸头：20支h.说明书：一份医院：科：室血清总甲状腺素(TT4)诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第2页4.仪器（用户自备）4.1时间分辨荧光分析仪；4.2微孔洗涤机；4.3微孔振荡器；5.操作步骤5.1.试剂的准备⑴洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合作为工作洗涤液备用。⑵将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20～25℃）。⑶使用前一小时内，按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记（1:50）（详见操作流程图）。5.2．吸取25μl校准品和待测样品，加入反应板微孔内。5.3．在各微孔内加入150μl已稀释的铕标记溶液，在室温（20～25℃）下慢速振动1小时。5.4．洗板6次。将板条在洁净无尘的吸水纸上拍干。5.5．在每个微孔内加入150μl增强液，于慢档振板5分钟。5.6.确定微孔反应板已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。6.计算结果测定：用新波公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420,等）测量7．临床意义血清TT4测定是评价甲状腺机能状态的一项常规试验。甲亢时血清TT4浓度一般升高。甲亢治疗过程中，TT4反应非常灵敏，当病情尚未达到临床控制标准，TT4可能已降至正常或偏低。对于甲低患者，血清TT4浓度一般下降，并且TT4下降较TT3下降更灵敏可靠，可作为亚临床甲低的诊断指标之一。单项TT4测定不能诊断T3型甲亢和低T3综合征。过量摄入碘时，TT4可升高，但无甲亢。对于这些情况应结合T3及TSH等联合测定，才能准确判断甲状腺功能。医院：科：室血清总甲状腺素(TT4)诊断试剂盒时间分辨荧光免疫分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第3页8．参考值本试剂盒TT4浓度正常值范围为50.0～124.0μg/L。建议各实验室建立自己的正常值范围。9．注意事项9.1理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。9.2尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。9.3试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。9.4振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。9.5微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。9.6吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。9.7使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。9.8宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。9.9封片不能重复使用。9.10如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.11所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程操作。9.12如对实验结果有疑问，应重复试验。9.13为保证实验的准确性，处理后得到的血样应不含纤维蛋白、红细胞、血脂等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。9.14本试剂盒应置2—8℃保存，有效期参考瓶上所贴标签。