实验室生物安全手册

实验室生物安全手册原州区动物疾病预防控制中心郭建平2010-11-14第一部分生物安全指南九、废弃物处理1概念：废弃物是指将要丢弃的所有物品。2废弃物被丢弃前应考虑的主要问题：2.1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？2.2、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？2.3、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害十、清除污染1高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。。2高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。废弃物可以分成以下几类：⑴、可重复或再使用，或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染（非感染性）废弃物。⑵、污染（感染性）锐器——皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理。⑶、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料。⑷、高压灭菌后丢弃的污染材料。⑸、直接焚烧的污染材料。十一、锐器1概念:皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。当达到容量的四分之三时，应将其放入“感染性废弃物”的容器中进行焚烧，如果实验室规程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。第6章实验室安全检查一、实验室安检工作的作用：1、采用正确的工程控制并能按设计正常运行。2、适当的现场和规章的专门管理控制到位。3、个体防护装备能满足所进行工作的要求。4、充分考虑对废弃物和已用过材料的清除污染，适当的废弃物管理程序到位。5、包括物理、电和化学安全的常规实验室安全程序到位。二、实验室安检工作的内容：实验室设计化学品仪器、冰箱∕冰柜∕冷库个体防护装备废弃物处理有职业保健和安全方案一般工程控制一般操作及规程普通实验室维护防火第二部分实验室设备及安全使用第7章生物安全柜（BSC）一、实验室中生物安全柜的分类：Ⅰ级生物安全柜Ⅱ级生物安全柜Ⅱ级A1型生物安全柜内置风机将房间空气（供给空气）经前面的开口引入安全柜内并进入前面的进风格栅。在正面开口处的空气流入速度至少应该达0.38m/s。然后，供气先通过供风HEPA过滤器，再向下流动通过工作台面。空气在向下流动到距工作台面大约6～18cm处分开，其中的一半会通过前面的排风格栅，而另一半则通过后面的排风格栅排出。所有在工作台面形成的气溶胶立刻被这样向下的气流带走，并经两组排风格栅排出，从而为实验对象提供最好的保护。二、实验室中生物安全柜的使用位置生物安全柜应位于远离人员活动、物品流动以及可能会扰乱气流的地方。操作者生物安全柜如果使用不当，其防护作用就可能大大受到影响。操作者在移动双臂进出安全柜时，需要小心维持前面开口处气流的完整性，双臂应该垂直地缓慢进出前面的开口。手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕并且让里面的空气“扫过”手和双臂的表面以后，才可以开始对物品进行处理。要在开始实验之前将所有必需的物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口的次数。物品放置Ⅱ级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻挡。放入安全柜内的物品应采用70%酒精来清除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上进行实验，以吸收可能溅出的液滴。所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台后缘的位置，并使其在操作中不会阻挡后部格栅。可产生气溶胶的设备（例如混匀器、离心机等）应靠近安全柜的后部放置。像有生物危害性的废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品，应该放在安全柜内的某一侧。在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及吸管盛放盘不应放在安全柜的外面，否则在使用这些物品时双臂就必须频繁进出安全柜，这样会干扰安全柜空气屏障的完整性，从而影响对人员和物品的防护二、实验室中生物安全柜的使用清除污染生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。最常用的方法是采用甲醛蒸气熏蒸。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。。个体防护装备在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。在进行一级和二级生物安全水平的操作时，可穿着普通实验服。警报器补充资料实验室中生物安全柜的第8章安全设备一、移液辅助器二、一次性接种环三、微型加热器四、个体防护装备和防护服五、实验服、隔离衣、连体衣、围裙六、护目镜、安全眼镜和面罩七、防毒面具八、手套第三部分微生物学操作技术规范第9章实验室技术一、实验室中标本的安全操作：1、标本容器2、标本在设施内的传递3、标本接收4、打开包装二、移液管和移液辅助器的使用1、应使用移液辅助器，严禁用口吸取。2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。5、不能将液体从移液管内用力吹出。6、刻度对应（Mark-to-mark）移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。7、污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。8、盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。9、有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。10、在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射针头和注射器。11、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。三、避免感染性物质的扩散1、为了避免被接种物洒落，微生物接种环的直径应为2～3mm并完全封闭，柄的长度应小于6cm以减小抖动。2、使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。3、干燥痰液标本时要注意避免生成气溶胶。4、准备高压灭菌和／或将被处理的废弃标本和培养物应当放置在防漏的容器内（如实验室废弃物袋）。在丢弃到废弃物盛器中以前，顶部要固定好（如采用高压灭菌胶带）。5、在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。四、生物安全柜的使用1、应参考国家标准和相关文献，对所有可能的使用者都介绍生物安全柜的使用方法和局限性（参见第6章）。应当发给工作人员书面的规章、安全手册或操作手册。特别需要明确的是，当出现溢出﹑破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。2、生物安全柜运行正常时才能使用。3、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。4、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。5、安全柜内不能使用本生灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。6、所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。7、尽量减少操作者身后的人员活动。8、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。9、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。10、工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。11、在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。12、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。五、避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触1、微生物操作中释放的较大粒子和液滴（直径大于5μm）会迅速沉降到工作台面和操作者的手上。实验室人员在操作时应戴一次性手套，并避免触摸口、眼及面部。2、不能在实验室内饮食和储存食品。3、在实验室里时，嘴里不应有东西——钢笔、铅笔、口香糖。4、不应在实验室化妆。5、在所有可能产生潜在感染性物质喷溅的操作过程中，操作人员应将面部、口和眼遮住或采取其他防护措施。六、避免感染性物质的注入1、通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。2、锐器损伤（如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物质。3、以下两点可以减少针刺损伤：（a）减少使用注射器和针头（可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头）；（b）在必须使用注射器和针头时，采用锐器安全装置。4、不要重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防∕耐穿透的带盖容器中。5、应当用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。七、血清的分离1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。3、规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。严禁用口吸液。4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。5、带有血凝块等的废弃标本管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和／或焚烧。6、应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。八、离心机的使用1、在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。2、应按照操作手册来操作离心机。3、离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。4、离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。5、用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧（最好使用螺旋盖）。6、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。7、离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。8、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。9、空离心桶应当用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70％）来平衡。盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用，因此不能使用。10、对于危险度3级和4级的微生物，必须使用可封口的离心桶（安全杯）。11、当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。12、应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范。13、应当每天检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。14、每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。15、使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。16、当使用离心机时，可能喷射出可在空气中传播的感染性颗粒。如果将离心机放置在传统的前开式的Ⅰ级或Ⅱ级生物安全柜内，这些粒子由于运动过快而不能被安全柜内的气流截留。良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护，以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生。九、匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用1、实验室不能使用家用（厨房）匀浆器，因为它们可能泄漏或释放气溶胶。使用实验室专用搅拌器和消化器更为安全。2、盖子、杯子或瓶子应当保持正常状态，没有裂缝或变形。盖子应能封盖严密，衬垫也应处于正常状态。3、在使用匀浆器、摇床和超声处理器时，容器内会产生压力，含有感染性物质的气溶胶就可能从盖子和容器间隙逸出。由于玻璃可能破碎而释放感染性物质并伤害操作者，建议使用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯（polytetrafluoroethylene，PTFE）容器。4、使用匀浆器、摇床和超声处理器时，应该用一个结实透明的塑料箱覆盖设备，并在用完后消毒。可能的话，这些仪器可在生物安全柜内覆盖塑料罩进行操作。5、操作结束后，应在生物安全柜内打开容器。6、应对使用超声处理器的人员提供听力保护。十、组织研磨器的使用1、拿玻璃研磨器时应戴上手套并用吸收性材料包住。塑料（聚四氟乙烯）研磨器更加安全。2、操作和打开组织研磨器时应当在生物安全柜内进行。十一、冰箱与冰柜的维护和使用1、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。2、储存在冰箱