flowcytometry.

流式细胞术西南大学化学化工学院郑鹄志[e-mail]一、流式细胞仪工作原理•细胞逐个通过仪器分析点•激光照射样品•PMT记录散射信号和荧光信号•荧光信号和散射信号处理•荧光信号•前向散射信号(forwardscatter,forward-anglelightscatter)：与细胞大小、体积有关；与细胞折光率有关。•侧向散射信号(sidescatter)：与细胞表面状态、内部结构、细胞大小和形状有关。二、应用•临床检验•微生物•毒理学检测•细胞凋亡•1、临床检验中的应用•A.肿瘤学•肿瘤细胞中DNA含量和正常细胞不同•肿瘤细胞表面存在特殊抗原或受体•肿瘤早期诊断•诊断治疗和预后判断•药物疗效确定•B.血液学中的应用•白血病诊断：抗血细胞表面分化抗原（CD）的单抗。•白血病免疫分型•网织红细胞测定：反应红细胞造血功能；RNA。•……•C.免疫学•淋巴细胞亚群分析•感染及治疗疗效的观察：T细胞亚群的观察2、微生物学•A.细菌检测和鉴定•单个O157:H7•B.真菌研究•酵母转化•C.病毒检测•间接法：检测感染细胞（免疫法）•直接法：新型核酸染料（SYBRgreen）和PCR扩增•HIV,HCV,HBV,流感病毒等3、毒理学检测•A.微核检测•紫外和488nm双激光器，Hoechst33342和噻唑橙，可以检测到含微核的细胞。•B.生殖毒性检测•长形精细胞、圆形精细胞、精原细胞和非精子细胞、初级精母细胞的DNA含量不同，FC出现4个不同的峰。C.免疫毒性•细胞吞噬功能分析•荧光标记的大肠杆菌与吞噬细胞孵育，加入荧光猝灭剂。未被吞噬的细菌荧光消失，被吞噬的细菌荧光不受影响。可检测出不同吞噬能力的细胞所占百分比。4、细胞凋亡AnnexinV分析：早期凋亡细胞的细胞膜产生不对称丢失，磷脂丝氨酸残基暴露。ＡＶ与磷脂丝氨酸残基有高度亲和性。荧光标记的AV。DNA分析：凋亡细胞DNA含量发生变化，可以采用荧光试剂PI区分凋亡细胞和正常细胞。（562－588nm）三、化学中的应用•多功能纳米颗粒分选中的应用