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1排阻色谱SEQ分析排阻色谱SEQ分为GPC（凝胶渗透色谱）和GFC（凝胶过滤色谱）GPC主要用于聚合物领域，GFC主要用于生物科学领域。以下介绍岛津GPC分析系统特点：★以分子量大小分离：分子量大的先洗出，小的后洗出。按保留时间计算分子量分布。★专用色谱柱分类：●以分子量大小分类（表明分离线性范围）。●以流动相分类使用四氢呋喃作流动相。使用DMF作流动相。（二甲基甲酰胺）使用氯仿作流动相。使用水性溶液作流动相。根据色谱柱线性分布，色谱柱可以串连使用，先连接分子量大的，再接分子量小的。岛津GPCVol.1.02软件操作首先，在CLASS-VP中对标准品进行色谱分析，优化积分后，得到理想的色谱图和数据，即去掉杂质峰和负峰（Method∈IntegrationEvents中MinArea最小峰面积，Intergateoff禁止积分，WIDTH半峰宽等等）。然后进入GPC分析软件：1．点击开始∈程序∈GPC∈GPCforCLASS-VP2出现下面对话框：在Datafilename下为从CLASS-VP中由色谱文件（***。dat）转换成的对应GPC文件起名和排序号******.D**（如DLSICA。D01）。然后点击OK进入下面菜单：3在窗口中有以下七个处理功能图标：GPCGPCMolGPCSuperSingleFileconfigurationMethodWeightBatchImposeChrmatogramManagerGPC配置GPC方法分子量批处理叠加单色谱文件管理上述图标中选择GPCGPC方法即可以满足日常分析应用。Method2．下面再返回到CLASS-VP工作站中操作，先将其它界面最小化，如图：如图：选择File∈Data∈Open打开标准品色谱数据4选择数据文件后，打开5选择File∈Method∈Open打开分析该标准品的方法（已优化积分完毕）选择Analysis∈Analyze分析计算该标准品一次。3．点击最下方图标栏中的GPCforCLASS-VP图标，如图：进入下面界面：6双击GPC方法图标，进入下面菜单：该菜单分为三部分：CalibrationCurveTable为校准曲线表，编辑标准品保留时间Time，分子量Molecular等参数7CalibrationCurve（Linear）标定后，显示校准曲线。Chromatograph显示打开的标准品GPC格式图谱。4．如图选择File∈LoadLCDatafile选择（2）中分析标准品时转换的GPC数据文件，确定后显示下面界面：8点击该界面中的GET键，得到下面界面：提问是否ClearCalibrationTable？（清除现在的校准表？）选择是显示下面界面：9在CalibrationCurveTable校准曲线表中的Molecular项中，分别键入各个组分峰的分子量然后点击该表左下角的Draw显示得到拟合曲线的界面：在该界面（CalibrationCurve（Linear）中，显示标定后的校准曲线。如果校准曲线拟合的不理想，可以点击该曲线左下角的Type键，显示下面界面，选中合理的拟合类型：10点击OK得到下面重新拟合后的曲线：●修正：*如果样品与标准品一致（例如皆为聚苯乙烯）则不需修正。在上面界面中选择Parameter∈GPCParameter如图：11出现下面界面：NameQfactorV---αV---k样品名粘度系数标准品α值标准品k值如无则粘度系数Q和α，k皆输入1，点击OK校准曲线立即得到修正。12*如果样品与标准不一致（标准与样品不一致）则需修正。在上面界面中选择Parameter∈MHConversion如图：出现下面界面：V—α粘度系数（据MH公式手册查出键入），V—k粘度系数（据MH公式手册查出键入）13PolymerA标准品的α，k值。PolymerB样品的α，k值。点击OK校准曲线立即得到修正。如果查不到样品的粘度系数α，k值，则不做该相修正。粘度修正Parameter∈MHConversion在说明书后有介绍，请仔细阅读。＊有时样品α，k值化学手册查不到，可以不修正，则最后样品的分析报告，为相对于标样(如聚苯乙烯)的分子量分布。（Mn，M/W等）●保存校准曲线：点击File∈SaveFileAs出现下面界面：在Filename中键入****在Pathname中确定保存路径＊:\＊:\＊:\点击Save键，该校准曲线已保存完毕，将来使用者再做相同样品，相同条件的GPC分析时可以随时打开调用，不用每次分析都做标准品分析标定。需要注意的是，如果分析条件发生变化（如流动相，流速等），出峰的保留时间产生偏移较大时，应该重新分析标准品标定校准曲线，以保证分析结果的准确。145．样品的GPC分析：现在可以返回到CLASS-VP中对样品进行色谱分析，分析结束后，执行分析计算一次即可。也可以调入已做完的样品色谱数据，执行分析计算一次，都会得到相应转换的GPC文件。然后进入GPC方法界面，点击如图Calculation∈GPCCalculation：15出现下面界面：在LCCalc。Data：中点击图标■打开需要的样品GPC文件名在GPGMethod：中确认所用的校准曲线文件名，如下图：点击确定16再点击上面界面中的Calculation键，显示下面界面：样品的GPC计算即告完成。6．分析报告检查：点击View菜单中各项17点击View∈Slice检查切片数据18点击View∈Peak检查个峰数据点击View∈AverageMolecularWeight检查分子量数据19点击Report∈Format编辑报告输出格式在下面界面各项中选择打印内容和打印位置：20点击Report∈Print则直接在打印机打印报告。7．GPC分析软件的退出：先从最小化图标中逐项打开各项操作界面并关闭。在CLASS-VP中清洗系统。然后停止CLASS-VP的系统运行。最后退出CLASS-VP。8．关闭所有单元电源开关。