HPLC在万寿菊活性组分皂化分离过程控制中的应用

HPLC在万寿菊活性组分皂化分离过程控制中的应用李宁张雪霞李晓露张丽林旸(国家微生物药物工程研究中心,华北制药集团新药研究开发有限责任公司,石家庄,050015)摘要:目的建立高效液相色谱法对万寿菊活性组分含量的检测方法。方法采用HypersilC8色谱柱(150mm×4.6mm,10µm)，流动相为甲醇-1‰乙酸水，流速:1.0mL·min-1。结果在一个色谱过程中同时测定万寿菊中多种活性组分。结论本法筒便、准确、专属性强，为工艺控制和质量控制提供有效的分析方法。关键词:叶黄素；万寿菊；含量测定；高效液相色谱法中图分类号:R284.1文献标识码:ADeterminationofcomponentsfromLuteinesterbyHPLCLiNing,ZhangXue-xia,LiXiao-luZhangLi,LinYang(NationalMicrobialMedicineEngineering&ResearchCenter;NewDrugResearch&DevelopmentCompanyofNCPC;Shijiazhuang050015)Abstract：ObjectiveTooptimizeaHPLCmethodtoquantifyactivecomponentsinTageteserectaL.MethodsAchromatographicconditionwasasfollows:HypersilC8Column(150mm×4.6mm,10µm)，1‰aceticacidwithmethanolasamobilephase,flowrateat1.0mL·min-1.ResultsManycomponentsinTageteserectaL.weresimultaneouslyquantifiedinonecourseofchromatography.ConclusionThissimple,accurateandspecificprocedureisappliedtothequalitycontrolinpreparationofactivecomponentsfromTageteserectaL.Keywords：lutein;TageteserectaL.;contentdetermination;HPLC万寿菊系菊科类1年生草本植物，其花瓣中富含天然叶黄素和玉米黄素。叶黄素和玉米黄素对人视觉有保护所用，此外它还具有预防白内障、预防和改善老年性视黄斑变性[1]、预防动脉硬化[2]、增强免疫力[3]等功效，特别是预防癌变的发生[4]。万寿菊中叶黄素和玉米黄素大部分以酯的形式存在，为了获得游离态叶黄素和玉米黄素，需要对其进行皂化，目前多采用薄层色谱对皂化程度进行检测，不能对皂化率进行定量分析。本实验提供了一个实用便捷的HPLC分析方法，可应用于叶黄素的研究和生产过程中，对皂化过程进行监测。1.仪器与试剂1.1仪器：高效液相色谱仪（996检测器，美国Waters公司）；ZMDMicromass质谱仪（美国Waters公司）；。1.2试剂：万寿菊浸膏，美科尔（邯郸）生物工程有限公司；氢氧化钾，乙酸，乙醇，异丙醇为国产分析纯，甲醇为国产分析纯。2.试验方法2.1色谱条件色谱柱：HypersilC8(150mm×4.6mm,10µm)，流动相：A：甲醇，B：1‰乙酸水；流速：1.0mL·min-1；检测波长：446nm；柱温：60℃。表1流动相梯度设置Tab1Gradientofmobilephaseconfiguration时间/min流速/mL·min-1A/%B/%01.0851551.08515151.01000201.01000251.08515301.085152．皂化前样品制备作者简介：李宁，男，工程师Tel：[phone]E-mail:[e-mail]取万寿菊浸膏75mg，加入100mL异丙醇，超声溶解，即为皂化前样品。3.皂化后样品制备取万寿菊浸膏50g，加入50mL乙醇，搅拌中加入20mL40%氢氧化钾溶液，继续搅拌3h，过程温度70℃。待反应结束，取皂化液0.1mL,加入100mL异丙醇，超声溶解，用乙酸调节pH=8.0，即得皂化后样品。3.结果与讨论3.1结果上述条件下，叶黄素与叶黄素单酯、叶黄素双酯等组分在30min内洗脱完毕。如图1所示:叶黄素、玉米黄素作为同分异构体，为一混合峰，与单双酯可实现基线分离，足以满足工艺控制的需要，采用面积归一法可计算皂化率。叶黄素、玉米黄素峰面积皂化率=×100%所有色谱峰面积之和。皂化前皂化后1.叶黄素、玉米黄素混合峰图1万寿菊浸膏皂化前后HPLC图谱图21#色谱峰质谱上述峰已由HPLC-PAD和HPLC-MS（见图2）确认无误。2.讨论本法筒便、准确、专属性强，为工艺控制和质量控制提供有效的分析方法，完全可以替代薄层色谱检测万寿菊浸膏的皂化程度。REFERENCES[1]COHENM.Age-relatedmaculardegenerationanditspossibleprevention[J].MedJAust,2005,l82(6):3l0-311.[2]ALVES-RODRIGUESA,THOMASB.TheroleofLuteininthepreventionofatherosclerosis[J].JAmCoilCardiol,2002,40(4):835．[3]CHEWBP,PARKJS.Carotenoidactionontheimmuneresponse.[J].JNutr,2004，l34(1)：257-261．[4]VAINIOH,RAUTALAHTIM.Aninternationalevaluationofthecancerpreventivepotentialofcarotenoids[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev,1998,7(8):725-728