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微生物学教研室吕厚东E-mail：lvhoudong@eyou.com肝炎病毒第二节乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）我国感染现状：我国是HBV感染的高发区（“国害”）10%HBsAg携带者（1.3亿）3000万慢性肝炎患者30万/年死于肝癌及肝硬化75～150万女性HBsAg携带者通过母婴传播使60～100万新生儿被感染。选择填空题:我国是一个————大国（填一疾病名称）乙型肝炎•1963年Blumberg在多次输血的血友病患者中发现了一种异常的抗原，称为澳抗。•1968年才明确这种抗原与乙型肝炎（简称乙肝）有关。•1970年Dane在电子显微镜下观察到HBV的形态，并命名为Dane颗粒。•1986年将其列入嗜肝DNA病毒科。Blumberg一、生物学特性形态与结构：病人血清中存在着3种形态病毒颗粒管形颗粒小球形颗粒Dane颗粒电镜下形态1.大球形颗粒又称Dane颗粒2.小球形颗粒3.管形颗粒HBV基因组:•dsDNA：3.2Kb•分为长链L（-）和短链S（+）（约为L链的50%至85%长），组成的不完全双链环状DNA，长链载有病毒蛋白质的全部密码。•有4个开放读码框架(ORF)，分别称为S、C、P和X区2.HBV基因组结构pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBVDNA3.2kbpre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg编码HBsAgpre-S2pre-S1+-前基因组逆转录HBV的复制方式：⑴吸附、穿入、脱壳，DNA进入肝细胞核⑵以-DNA为模板，修复+DNA的裂隙区⑶-DNA→2.1kbRNA→外衣壳蛋白3.5kbRNA→内衣壳蛋白及HBV-DNAHBV.swfHBV的抗原组成•表面抗原HBsAg核心抗原HBcAge抗原HBeAgHBcAgHBsAgHBeAgDane颗粒-+表面抗原HBsAg•存在于三型颗粒中•是HBV感染的主要标志•分亚型（a,d/y,w/r）:adw、adr、ayw、ayr•产生抗-HBs•PreS1、PreS2抗原•产生抗-PreS1和抗-PreS2HBV血清型和基因型的地理分布基因型血清型流行地区Aadw2,ayw1欧洲西北部、美国、非洲中部Badw2,ayw1中国大陆、台湾、日本、印度尼西亚越南Cadw2,adrq+,adrq-,ayr中国大陆、台湾、日本、韩国、越南玻利尼西亚Dayw2,ayw3地中海地区、印度Eayw4非洲西部Fadw4q-,adw2,ayw4非洲中部和南部、玻利尼西亚Gadw2法国、美国HBsAg的亚型adradwayrayw长江以北长江以南新疆、西藏、内蒙等核心抗原HBcAg•仅存在于Dane颗粒中•不易在血液中检出•可在感染的肝细胞表面存在•刺激机体产生抗-HBc（IgG、IgM）•表明病毒在复制e抗原HBeAg•存在于Dane颗粒中•游离存在于血液中•为病毒复制及强传染性的指标•产生抗-HBeHBeAg可存在于血清中HBeAgHBcAg分泌到细胞外切割、加工表达HBV的其它生物学性状•培养–黑猩猩动物模型–用分子生物学技术的细胞培养成功•抵抗力–抵抗力强于HAV–对低温、干燥、紫外线耐受–不被70％乙醇灭活–100℃10min可灭活HBV与原发性肝癌•流行病学方面:—HBsAg携带者发生肝癌的危险性217倍•动物模型•病毒分子结构：—x基因→x蛋白→反式激活作用二、致病性与免疫性•传染源–主要传染源是患者或无症状HBsAg携带者–HBsAg存在于血液、尿液、精液、唾液、乳汁之中•传播途径•血液、血制品传播•母-婴传播•其它•潜伏期:30~160dHBV的致病机制•1.免疫低下：HBsAg无症状携带者•2.病毒变异：逃逸免疫•3.细胞介导的免疫损伤：CTL①细胞免疫功能正常：急性肝炎②细胞免疫功能低下：慢性肝炎（胸腺肽、干扰素）③细胞免疫反应过强：暴发性肝炎(肝萎缩、黄疸、96h内死亡）④免疫耐受：HBsAg无症状携带者4.免疫复合物性的免疫损伤：肝外及肝脏损伤5.自身免疫反应的免疫损伤：肝特异性脂蛋白(LSP)抗原三、微生物学检查法•检测HBV抗原、抗体（乙肝五项）–HBsAg、抗-HBs–HBeAg、抗-HBe–(HBcAg)抗-HBcHBV抗原、抗体检测结果的临床分析HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分析+----HBV感染或无症状携带者++---急性或慢性乙型肝炎，或无症状携带者++--+急性或慢性乙型肝炎（传染性强，“大三阳”）+--++急性感染趋向恢复（“小三阳”）--+++既往感染恢复期--++-既往感染恢复期----+既往感染或“窗口期”--+--既往感染或接种过疫苗恢复期急性期症状转氨酶异常潜伏期HBsAgHBeAg抗-HBe感染后月数抗-HBc乙型肝炎病程中各种血清学标志动态变化HBV标志滴度0123456789抗-HBsHBVDNA四、防治原则1.HBV疫苗预防：(血源性、基因工程genetic_engineering.swf、可食用)2.HBIG预防：含高效价抗-HBs的人血清球蛋白720406080100136接种后月数1针2针3针03.治疗：⑴干扰素:IFN-，500万u/次，3次/周，6月⑵核苷类似物：拉米呋啶（lamivudine，3TC）：终止前基因组的合成，但对肝细胞核内cccDNA的合成无作用泛昔洛韦（famciclovir）：阻碍HBVcccDNA的产生，抑制DNA多聚酶，干扰逆转录过程苏拉明(suramin)：具有抗逆转录病毒的活性，可抑制HBVDNA的活性，从而抑制HBV的复制⑶中草药：黄芪、五味子等提取物唯有及时、准确、规范、足够的抗病毒治疗，病人才能有理想的预后。部分双链的DNA胞浆膜乙肝病毒的复制拉米夫定的抑制作用细胞核细胞浆内质网拉米夫定A(n)有感染性的HBV毒粒(-)-DNAmRNAcccDNA有感染性的HBV毒粒有包膜的前基因组肝细胞转录逆转录HBsAg的囊膜抗原成分翻译第三节丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）一、HCV的生物学性状•40～60nm球形•有包膜•+ssRNAHCV的基因结构：+ssRNA、9.5kb，有9个基因区组成HCV的基因型有6种：Ⅰ~ⅥⅠ型：欧美流行Ⅱ~Ⅵ：亚洲，中国---Ⅱ型HCV.swf结合囊泡融合与病毒释放RNA复制正链负链翻译与多肽链加工脱壳与膜融合病毒装配与成熟胞饮作用DavisGLetal.SeminLiverDis.1999;19(suppl1):103-112.HCV生活周期二、HCV的致病性与免疫性•传播途径似HBV•是引起输血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因•潜伏期：4~8周•无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见•肝外损伤：肾小球肾炎•免疫力不牢固丙型肝炎的特点•我国丙肝病毒携带者的比例在2%~5%•随着年龄的增长，丙肝病毒携带率亦增高•易感人群感染HCV后，慢性化的比例高达50%以上•乙肝患者容易重叠HCV感染20位患者20%痊愈HCV感染的预后100位HCV急性感染80位患者80%持续感染24位患者30%稳定，慢性，无进展AdaptedfromAlterHF,SeeffLB.SeminLiverDis.2000;20:17-35.28位患者28位患者56位患者接受抗病毒治疗持久性应答(50%)肝脏疾病终末期，肝细胞癌，肝脏移植，死亡治疗失败(50%)30%呈严重进展40%有不同程度的进展32位患者24位患者三、微生物学检查法•检查病毒RNA：PCR•检测抗-HCV：ELISA诊断、监测方法HCV血清学试验EIA检测抗HCV、ImmunoblotassayHCV-RNA定性试验PCR、TMAHCV-RNA定量试验PCR、bDNAALT肝纤维化非损伤试验肝活检基因分型诊断丙肝感染者和现患病人的最佳实验室方法NationalInstituteofHealthConsensusDevelopmentConferenceStatement:ManagementofHepatitisC:2002-June10-12,2002四、防治原则•预防：–由于HCV免疫原性不强且易变异，因此疫苗的研制较为困难•治疗：–IFN-α第四节丁型肝炎病毒（hepatitisDvirus，HDV）•HDV是一种缺陷病毒•由HBsAg构成其外壳•HDV定位于肝细胞核内，在血液中由HBsAg包被，形成35~37nm颗粒•-ssRNAHDV的结构•Rizzetto于1977年首先发现，又称抗原（HDAg）•35~37nm球形颗粒；•-ssRNA，1.7Kb含9个ORF35-37nm丁型肝炎的特点•HDV感染后可表现为急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者•我国HD感染率在1.6%~5%，西南地区感染率高联合感染重叠感染慢性、携带者HBV+HDVHBV+HDV潜伏期急性肝炎肝硬化暴发性肝炎慢性丁肝（coinfection）（superinfection）微生物学检查及防治原则微生物学检查：–HDAg、抗-HD及HDV-RNA–持续抗-HD(IgG)高滴度是慢性HDV感染的主要血清学标志防治原则：–丁型肝炎传播途经与乙型肝炎相似–防治原则似HBV第五节戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus，HEV）一、生物学性状•属于杯状病毒科•球形，无包膜•直径32～34nm•+ssRNA，3个ORF•两个基因型（7.5kb）二、致病性及免疫•主要为粪－口途径传播•由胆汁经粪便排出体外•对肝细胞的直接损伤及免疫病理作用•多表现为急性戊型肝炎•孕妇感染常致流产或死胎戊型肝炎的特点•与甲型肝炎相比，患者黄疸前期症状重，病程持续时间较长，病死率较高，特别是孕妇感染HEV后。•戊型肝炎分两种：–“流行性”多发生在雨季和洪水后–“散发性”在秋冬季呈现高峰•潜伏末期至发病初期传染性强，患者的隔离期为起病后3周。•尚末发现有2次发病者。三、微生物学检查及预防•检测HEV：RT-PCR检测HEVRNA•检测抗-HEVIgM•预防：–一般性预防与甲肝类似，但尚无特异性疫苗五种肝炎病毒比较HAVHBVHCVHDVHEV病毒结构+ssRNAdsDNA+ssRNA-ssRNA+ssRNA传播途径粪-口血液、性、垂直传播粪-口病情轻偶尔严重亚临床、慢性多见需HBV协助孕妇重慢性及携带者无有无实验室检查抗HAVIgMHBsAg-AbHBcAbHBeAg-Ab抗HCVIgMHCV-RNA抗HDVIgM抗HEVIgM预防疫苗疫苗无同HBV预防为主五个型别肝炎危害比较•甲、乙两型最为常见，乙型危害最为严重。•乙型、丙型慢性化比例高。•乙型和丙型慢性化是肝癌最主要的原因。•戊型常引起水型爆发流行。•丁型伴随乙型发生，可加重病情，促进慢性化。•五个型别肝炎间无交叉免疫，常可合并发生。