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1凉山彝族自治州HIV快诊检测点实验室作业指导书凉山州人民政府防治艾滋病工作委员会办公室2凉山州疾病预防控制中心中国-默沙东艾滋病合作项目凉山办公室二0一一年七月凉山州HIV快速检测点实验室作业指导书目录前言………………………………………………………………………………（1）凉山州艾滋病快速检测样本的接收、登记与运送……………………………（2）凉山州艾滋病快诊检测点检测步骤及要求……………………………………（3）凉山州HIV抗体快速检测流程图………………………………………………（6）凉山州HIV抗体快速检测质量控制……………………………………………（7）凉山州HIV抗体快速检测实验室消毒与污物处理……………………………（9）凉山州HIV抗体快速检测实验室生物安全及职业暴露………………………（10）凉山州HIV抗体快速检测实验记录及结果上报………………………………（13）凉山州HIV快诊检测实验室管理制度…………………………………………（14）凉山州HIV抗体快速检测保密程序……………………………………………（15）凉山州艾滋病检测点资格审批申请表…………………………………………（16）凉山州医疗卫生机构HIV常规检测登记表……………………………………（19）凉山州HIV快速实验原始记录表………………………………………………（20）凉山州HIV抗体筛查报告单……………………………………………………（21）凉山州艾滋病检测点HIV抗体复检检测单……………………………………（22）凉山州艾滋病检测各类试剂入库、领取使用登记表…………………………（23）凉山州艾滋病检测实验室仪器使用温度记录…………………………………（24）凉山州艾滋病检测实验室废弃物及生物垃圾处理记录表……………………（25）3四川省艾滋病检测点审评验收情况一览表……………………………………（26）凉山州HIV抗体检测月报表……………………………………………………（27）凉山州HIV抗体检测季度报表…………………………………………………（28）前言为认真贯彻落实温家宝总理考察凉山州艾滋病防治工作的重要指示精神，实现国家艾滋病防治工作目标，加大艾滋病检测力度，加强对基层工作人员的技术指导，进一步规范HIV快速检测工作，提升防治工作的质量，我办委托州疾控中心，在国家艾滋病防治技术指南和规范的基础上，结合我州实际情况，制定了《凉山彝族自治州HIV快速检测点实验室作业指导书》（试行）（以下简称《指导书》）。《指导书》内容包括“样本的接收、登记和处理”、“HIV抗体快速检测流程图”“HIV抗体快速检测质量控制”、“实验室消毒与污物处理”、“实验室生物安全及职业暴露”、“检测实验记录及结果上报”“保密程序”、“记录表格”等。为提高《指导书》科学性、权威性和可操作性，特邀请国家和省级专家共同参与了《指导书》的制定工作。在此，我办对给予指导和支持的所有单位和机构，以及为《指导书》做出贡献的相关领导和专家表示衷心的感谢。由于时间和水平等诸多因素和限制，本书难免存在疏漏、不当之处，请各使用单位和检测人员提出修改意见，我为将对《指导书》进行修订和完善。凉山州人民政府防治艾滋病工作委员会办公室2011年8月4凉山州艾滋病快速检测样本的接收、登记与运送一、标本的接收登记：对受检人群的所有信息（检测日期、编号、姓名、性别、年龄、民族、婚姻、文化、身份证号码、户籍所在地、样本类型）详细登记在艾滋病咨询检测登记表和快诊原始记录表中。二、标本的采集：采集样品应按临床采血技术规范采集指尖血或静脉血，采集标本时应注意生物安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液时操作应戴手套，避免职业暴露。三、标本运送：阳性标本在送往县疾控进行复检时，严格按照“生物安全运输管理条例”包装。事先检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将样品移出，对样品管和盛器消毒。同时与“艾滋病检测点HIV抗体复检检验单”一并送往县疾控，双方签字验收。对所采集的血样不能及时送往县疾控中心，可短期内将样品存放2～8℃冰箱。5凉山州艾滋病快诊检测点检测步骤及要求一、工作步骤【步骤一】对受检人群的所有信息（检测日期、编号、姓名、性别、年龄、民族、婚姻、文化、身份证号、户籍所在地、样本类型）详细登记在艾滋病咨询检测登记表和快诊原始记录表中。见附表1。【步骤二】按临床采血技术规范采集指尖血或静脉血，无菌条件下采集指尖血或（静脉血3～5ml）室温静置，让血浆自然分离。（做HIV快诊等实验用）。【步骤三】按照试剂盒说明书要求，从包装盒中取出测试卡，平衡至室温并编号，准确加入血浆（或全血、稀释液）样品于测试卡的架处。30分钟内观察结果，结果判定见图。快诊试剂保存条件：加样孔（S）线检测区（T）线对照区（C）线SCTSCTSCTSCTSCT阳性阳性阴性无效无效61、可以保存2～30℃,有稀释液和快速试剂,建议保存在2～8℃冰箱.2、试剂出入库一定要有记录,包括试剂厂家名称、规格、试剂效期、批号、接收人、使用人签名、使用日期等。见附表2。3、每天记录存放试剂冰箱温度、实验温度、环境温湿度。【步骤四】加入样品后，一般在15～30分钟内观察结果（根据各试剂厂家的要求）不得超过30分钟，否则无效。在质控区和反应区均出现红线，结果评定为阳性。只在质控区出现红线，反应区不出现红线，结果阴性。不出现质控带，实验无效，（实验温度保持在20～25℃）。【步骤五】阳性结果做好记录，并认真填写二表二卡，同时将血浆样本一同送往县疾控中心做复检实验。初筛实验按《全国艾滋病检测规范技术》2009年版。【步骤六】待确证结果返回后，一并装入个人随访档案袋中。二、筛查点实验室生物安全要求：所有使用过的采血针头、真空采血器、测试卡、一次性手套、一次性工作服必须经过严格消毒或高压消毒，焚烧处理。禁止在实验室内进食、喝水、吸烟、化妆等违反生物安全规定的行为。三、艾滋病检测实验室常用的消毒方法：（一）物理消毒方法：1、高压蒸汽消毒，121℃，消毒15～20分钟。2、干烤消毒，140℃，消毒2～3小时。3、定点集中式焚烧，要有专人看管。（二）化学消毒方法：1、含氯消毒剂，有效含氯量2000～5000mg/L。2、使用75%乙醇消毒仪器表面20～30分钟。3、使用2%的戊二醛消毒仪器表面20～30分钟。四、艾滋病筛查点实验室房屋要求：（一）房屋面积：要求在16～20平方米独立的实验用房，决不允许和疫苗7预防注射、配制输液液体，注射液体等无关联的工作混合使用。（二）房间内摆放一张清洁的桌子，专门用于登记记录，另外一张桌子用于采血和做快诊实验专用。摆放一个文件柜，存放文件档案。一台消毒高压锅（有条件的单位），一个带盖的消毒桶，内装含氯量在2000～5000mg/L的消毒液，专门用于装被污染过的或使用过的实验耗材。另外在放置一个垃圾桶，放置无污染性垃圾。8凉山州HIV抗体快速检测流程图样品快诊实验阳性反应阴性反应复检实验一阴一阳均阳性反应均阴性反应送确证实验室做确证实验报告阴性将样本送筛查实验室9凉山州HIV抗体快速检测质量控制一、目的监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异、批间操作的重复性，验证检测结果。二、适用范围适用于HIV-1/2抗体定性快速检测。三、作业程序（一）检测前质控：1、样品要求唯一编号，实验前仔细核对，检查。2、检测人员每日检查室内温度，实验环境温湿度应在试剂盒说明书的范围内，试剂和样品应按要求存放，并做好记录。3、检查是否有足够的试剂库存量，确证试剂是在有效期范围内，禁止使用过期试剂。4、每批实验如果应用不同批号的试剂，应做好记录。（二）检测过程质控：1、准备好试验区域，摆放好必要器具。2、详细记录样品编号、姓名、地址、试剂名称及批号，操作者、复检者签名。3、核对样品编号、标记、检测、防止错号。4、实验前仔细阅读试剂盒说明书，严格按照说明书操作。5、需要在冰箱保存的试剂，先从冰箱内取出，放置室温，平衡后在使用。剩余的试剂条应立即放入自封袋中密封2～8℃保存，可10以存放在室温的试剂，要尽可能避免高温。6、建议每一次最多做10份样品，确保试剂条和编号与标本编号准确对应，防止错号和交叉污染。7、结果判定时，质控带必须出现实验条带才能成立。如实验完成后未出现质控条带，本次实验结果无效，实验需重做。8、外部质控，由国家或省疾控中心提供，或试剂厂家购买。要求在更换不同试剂批号时，更换不同厂家时，更更换不同检测人员时做外部质控。（三）检测后质控：1、实验结果进行判读时，应保证判读地点光线充足。对于难以判读的条带，最好有2人判读。2、复核样品编号并填写实验结果。3、向实验室负责人报告检测结果。4、检查试剂库存量，根据实际需要，提前向上级实验室申请补充。5、在收到或检测时，发现试剂出现外包装盒或内容物已损伤，标签出现错误、缺失或字迹模糊（特别是产品厂家名称、批号、生产日期或失效期），应详细记录。11凉山州HIV抗体快速检测实验室消毒与污物处理按照“生物安全管理条例”对污染物品、进行有效消毒处理。一、血液标本应置于运输箱内，按照三层包装后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消毒液消毒。送检单位外面套清洁的塑料袋封口一并运送。二、各种化学消毒剂均应贴有标签，放置于合适和位置，试验台上不放置不必要的物品。实验室环境一旦污染，限在污染区外周围倒入消毒液，逐渐向中心消毒处理。并做好记录。三、实验室所有生物垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于黄色污物袋内，经焚烧或有效消毒处理后定点深埋。污染的非一次性工作衣应先消毒后洗涤。四、所有尖锐品、血样管和血液标本放置于不宜刺破的容器内（锐器盒，带盖塑料桶），限制在实验室内消毒后在指定地点焚烧处理。五、常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒法相同。（一）锐器盒或塑料消毒桶：5000mg/L次氯酸钠。（二）生物安全柜、工作台面和仪器表面：使用75%乙醇。（三）溢出物：5000mg/L次氯酸钠。12凉山州HIV抗体快速检测实验室生物安全及职业暴露一、建立安全制度（一）成立生物安全领导小组，随时自查和督导生物安全隐患。（二）实验室的设备、建筑和设施的安全必应通过专家的评审。（三）建立安全标准操作程序，该程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。（四）无论是否发生意外事故，每年都要对安全标准操作程序及其实施情况进行检查。（五）制定意外事故处理预案，建立意外事故的登记和报告制度。出现职业暴露意外事故应及时处理，同时报告主管领导。二、人员管理和培训（一）人员管理1、新调入人员、外来合作、进修学习的人员在进入实验室前，须经过实验室主任批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。2、实验室工作人员每年采血检测HIV、HBV、HCV、PT抗体检测，建立个人健康档案制度，血清样本应长期保留。（二）培训1、所有工作人员必须经过HIV检测技术和实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接受管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。132、必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。三、安全保障措施（一）个人保健和防护1、高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。手部皮肤有开放性伤口及其它不适于工作的情况，应暂停工作。2、进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。3、进入实验室应穿隔离衣、戴手套。如手套破损，立即丢弃，洗手后换上新手套。4、离开实验室前必须脱去隔离衣、手套并洗手。5、严禁在艾滋病检测实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。（二）带入和带出实验室的物品1、对所有带入实验室的样品都应进行检查，装有测试样品的包装箱（袋）应在安全柜或其他适当的装置内打开。2、将HIV测试样品转送到上级实验室复检时，应按照生物安全三层包装，防止对人员和环境的污染。运送样品的人应明确接收地点为和接收人，在样品接收单上双方签名，确认样品无外溢，无不合格现象。3、污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行严格消毒。