Hoechst33342PI细胞凋亡染色试剂盒

北京吉美生物技术有限公司Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒产品简介：Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst33342/PIApoptotisAssayKit)是一种采用Hoechst33342和碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰，但只能代表G0/G1期发生凋亡，无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡，而且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。Hoechst33342可以穿透细胞膜，进入正常细胞和凋亡细胞与DNA结合，能在紫外线下显示蓝色荧光，而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。PI不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，PI可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。Hoechst33342/PI双染后，可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在二元直方图上，正常细胞对Hoechst33342具有拒染性，呈弱蓝色荧光+弱红色荧光（Hoechst33342+/PI+）；凋亡细胞对Hoechst33342具有嗜染性呈强蓝色荧光+弱红色荧光（Hoechst33342++/PI+）；坏死细胞对PI具有嗜染性，呈弱蓝色荧光+强红色荧光。本试剂盒亦可用荧光显微镜进行观察，检测细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。产品组成：自备材料：1、胰蛋白酶消化液2、流式细胞仪或荧光显微镜3、PBS4、细胞计数板操作步骤（仅供参考）：1、细胞样品的制备：（1）贴壁细胞：①□小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。②□用胰蛋白酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。③□收集上述细胞悬液到离心管内。④□4。C1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。⑤□加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。编号名称JC2257100Tstorage试剂（A）：CellStainBuffer(2×)100ml4。C试剂（B）：Hoechst33342Stain0.5ml-20。C避光试剂（C）：PIStain0.5ml-20。C避光使用说明书1份北京吉美生物技术有限公司⑥□4。C1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。⑦□小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。⑧□轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。（2）悬浮细胞：①□4。C1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。②□小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。③□加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。④□4。C1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。⑤□小心吸取上清并丢弃，可留大约50μlPBS，以免吸走细胞。⑥□轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。2、CellStainBuffer工作液的配制：取适量CellStainBuffer（2×）与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合，即为CellStainBuffer工作液3、重悬细胞：取上述收集好的0.1~1×106个细胞，加入0.9mlCellStainBuffer工作液,重悬细胞沉淀。4、Hoechst33342/PI染色：（1）一步法：①□加入5μlHoechst33342Stain。②□加入5μlPIStain。③□轻轻混匀，置于冰浴或4。C，孵育20~30min。（2）两步法：①□加入5μlHoechst33342Stain，置于37。C冰浴，孵育5~15min。②□置于冰浴中冷却后，4。C1000g离心3~5min,使细胞沉到管底，弃上层染色液。③□加入0.9mlCellStainBuffer工作液,重悬细胞沉淀。④□加入5μlPIStain，置于冰浴或4。C，孵育5~15min。⑤□轻轻混匀，置于冰浴或4。C，孵育20~30min。5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长400~500nm检测蓝色荧光，在大于630nm处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。如果使用荧光显微镜检测，检测前4。C1000g离心3~5min沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，亦可不收集细胞，弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂（A）、试剂（B）、试剂（C），冰浴或4。C染色20~30min。染色后PBS洗涤一次，再在荧光显微镜下观察。染色结果：在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，正常细胞呈低蓝光/低红光，凋亡细胞呈高蓝光/低红光，坏死细胞呈低蓝光/高红光。注意事项：1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。2、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。3、Hoechst33342与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起Hoechst33342的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光与兰色荧光的比例改变。北京吉美生物技术有限公司4、如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液，才可以进行检测。5、PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：12个月有效。4。C保存，5~6个月有效。相关产品：产品编号产品名称JC2008磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)JC2015D-Hanks平衡盐溶液(1×,含酚红)JC2080胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)JC2247DAPI染色液(5ug/ml)JC2279台盼蓝染色液(0.4%)JD3016Masson三色染色液JD3163糖原PAS染色液JT9111葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)