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第26卷第2期扬州大学学报(农业与生命科学版)Vol.26No.22005年6月JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)Jun.2005H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律的研究薛峰,张评浒,刘晓文,唐应华,龙进学,高崧,刘秀梵*(扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州,225009)摘要:通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明:雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日龄左右,二次免疫应根据鸡群母源抗体水平于首次免疫后100d左右进行。雏鹅、鸭3日龄进行首次免疫,水禽对禽流感疫苗产生良好的免疫应答,并于免疫后25～30d达到抗体高峰,但首次免疫抗体维持时间不长,最佳二次免疫时间应在首次免疫后30d左右进行。关键词:肉鸡;麻鸭;扬州白鹅;禽流感;血凝抑制抗体水平中图分类号:S852.65+9.5文献标识码:A文章编号:16714652(2005)02000103MonitoringoflawofriseanddeclineofAIhemagglutinationinhibitionantibodyinbroilerchickensandwaterfowlinducedbyH5subtypevaccinesagainstavianinfluenzaXUEFeng,ZHANGPin-hu,LIUXiao-Wen,TANGYing-hua,LONGJin-xue,GAOSong,LIUXiu-fan*(LabofAnimInfecDis,MOA,YangzhouUniv,Yangzhou,225009,China)ABSTRACT:ThemonitoringplanforAIVH5subtypespecificantibodytiterswasimplementedforcontinuous5monthsinbroilerparentchickensimmunizedwithinactivatedH5N2oil-emulsionvaccine.TheresultsshowedthathighmaternalantibodytitersofHIantibodyinparentbroilerchickensat7daysolddeclinedtoverylowlevelduring14days.Sothefirstimmunizationforbroilermustbeconductedin10-day-old,andtheboostimmunizationmustbeconductedat100daysafterfirstvaccinationimmnineandtheimmunizationprogramforbroilerwouldbedetermineddependingonthelevelofbrioler’smaternalantibodyandthequalityofvaccines.Inthisstudy,thelevelofcommercialducks’andgeese’maternalantibody,andthatinducedbyfirstimmunizationandboostimmunizationweremonitoredforalongtime.Theresultsshowedthattheaquaticbirdsimmunizedat3-day-oldelicitedgoodimmuneresposesandthelevelofAIVspecificantibodymountedtohightitersat25-30daysafterfirstimmunization,butcouldnotbemaintainedforalongtime.Sothebesttimeforboostimmunizationwasconductedat21daysafterfirstactiveimmuneattitersat25-30daysafterfirstimmunization,butcouldnotbemaintainedforalongtime.Sothebesttimeforboostimmunizationwasconductedat30daysafterfirstactiveimmune.KEYWORDS:broilerchickens;commercialducks;geese;avianinfluenza;hemagglutinationinhibitionantibodytiter禽流感(AI)是由A型流感病毒引起各种家禽及野生禽类的全身性和/或呼吸系统综合征的传染病[1],该病在公共卫生上有其重要性。目前,水禽鹅和鸭在我国禽类养殖中占有着重要地位,饲养量位居世界第一。以往研究表明,水禽可长期无症状感染并经消化道排毒,而感染其他动物,这可能是流感病毒收稿日期:20050407基金项目:国家“十五”科技攻关项目(2004BA519A02)作者简介:薛峰(1978—),男,江苏如皋人,扬州大学博士研究生,主要从事禽流感流行病学研究。*联系作者,E-mail:xfliu@yzu.edu.cn2扬州大学学报(农业与生命科学版)第26卷和水禽间经过适应达到进化平衡状态的结果[2]。但20世纪90年代中期以来,H5亚型流行株对水禽致病力逐渐增强,可引起水禽发病死亡,表明水禽已不仅仅是流感病毒的储存库,而且其本身也成为流感病毒的易感宿主[1,2]。因此应用疫苗免疫接种成为当前预防和控制禽流感的必然选择。目前我国正式批准生产的H5N2禽流感疫苗基本上是根据对鸡的试验结果而制定的,是否适用于水禽,尚无相关的试验数据及合理的免疫程序,也未见有关H5亚型禽流感疫苗免疫水禽所产生保护力评价体系的报道。鉴此,本研究对有、无母源抗体水禽及父母代肉鸡免疫前后的抗体消长规律进行了研究,以获得水禽最佳免疫程序。1材料与方法1.1疫苗H5N2亚型禽流感油乳剂灭活苗由哈尔滨兽医研究所提供,批号为No.20040114。1.2试验动物父母代肉鸡:1日龄含H5亚型禽流感母源抗体AA父母代肉鸡,购自江苏省江阴种鸡场。扬州白鹅:1日龄,HI抗体检测呈阳性,购自扬州市霍桥孵化厂。麻鸭:1日龄,购自扬州市霍桥孵化厂。1.3试验动物分组与处理1)鸡的分组与处理:240只1日龄AA父母代肉鸡,1、7日龄时随机取20只检测母源抗体,10日龄用H5N2亚型禽流感灭活疫苗进行首次免疫,于免疫后第10、40、70天随机取20只进行抗体检测;于首次免疫后第100天进行二次免疫,分别于二次免疫后第20、60、80天进行抗体监测。2)鸭、鹅的分组与处理:将鸭、鹅分为3个组,进行H5N2疫苗的抗体消长规律试验。试验1组:选择雏鸭100只,隔离饲养。首次免疫于出壳后第3天(母源抗体为1∶64)进行,二次免疫于6周龄进行。免疫后30d内每隔3d采血1次,每次采血20只;30d后每隔7d采血1次,每次采血20只。二次免疫抗体检测起始时间从二次免疫当天开始记时。试验2组:选择雏鹅60只,分开隔离饲养,3周龄时首次免疫,首次免疫后第7周进行二次免疫。1.4血清学检测血凝试验(HA试验)和血凝抑制试验(HI试验)方法参见文献[4]。2结果与分析2.1含母源抗体鸡群免疫H5N2疫苗后抗体的消长规律采血样鸡以脚号作标记,分不同时段对应采血,分离血清。由图1可见,7日龄鸡群母源抗体较高,此后逐渐下降,10日龄首次免疫时鸡群H5母源抗体平均水平为6.5log22。免疫后鸡群抗体产生较慢,从第2周起抗体水平开始明显上升,至首次免疫后7周抗体开始下降,且下降速度较快。110日龄进行二次免疫,二次免疫后抗体持续上升,至二次免疫后第3周,抗体平均水平维持在5.0log22HI滴度。2.2H5N2疫苗免疫鹅群后抗体的消长规律由图1可见,鹅群首次免疫后第3周母源抗体滴度呈下降趋势,于第7周进行二次免疫后,抗体水平快速上升,于免疫后第2周达到高峰,此后开始缓慢下降,跟踪检测至第11周仍维持在较高的抗体水平。2.3H5N2疫苗免疫鸭群后抗体的消长规律用H5N2灭活疫苗首次免疫3日龄鸭群,HI抗体维持在较低水平(2log22～3log22),于首次免疫后第6周进行二次免疫;所有免疫组于二次免疫后第7天抗体水平出现明显反弹,至第4周仍未达到抗体高峰。图1鹅、鸭、肉鸡免疫H5N2疫苗后抗体的消长规律Fig.1LawofriseanddeclineofAIantibodyingoose,ducksandbroilerchickensinducedbyH5subtypevaccines1.白鹅;2.麻鸭;3.肉鸡第2期薛峰等:H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律的研究33讨论1)本研究结果表明,父母代肉鸡于7日龄时母源抗体水平达最高峰,20日龄时母源抗体下降到最低水平,因此应10日龄左右进行首次免疫。用灭活苗免疫后,抗体水平上升速度不快,最高峰抗体滴度也不高,而下降却较快,其主要原因可能与本研究所用的毒株免疫原性较差有关,因此应严格筛选免疫原性较好的AIV毒株制备高质量疫苗,并根据不同日龄的鸡调整免疫程序,以确保抗体达到一定的水平。2)水禽对高致病性禽流感具有明显的年龄易感性,经对不同母源抗体水平水禽的初免日龄研究表明,不同日龄水禽首次免疫对禽流感疫苗的免疫应答影响不大,这为生产实践中选择水禽的最佳首次免疫日龄提供了理论依据。3)本研究结果表明,禽流感疫苗首次免疫水禽后第25～30天抗体达到较高水平,二次免疫后HI抗体上升较快,一般在二次免疫后第2周左右即可达到高峰,但鹅群与鸭群抗体增长幅度存在一定差异,免疫鹅群抗体增幅明显超过免疫鸭群,这可能与水禽本身对禽流感疫苗免疫的敏感性及免疫剂量有关[3]。4)水禽首次免疫后禽流感抗体滴度不高,抗体水平维持时间不长,而二次免疫后抗体滴度明显升高,且维持时间较长。因此,在生产实践中必须对水禽进行二次免疫,尤其是种用水禽应于开产前2～3周根据抗体水平进行三次免疫,且水禽二次免疫时间应选择在首次免疫后第15天,即首次免疫后抗体未达高峰前进行二次免疫,二次免疫后抗体幅度上升较慢,如选择在首次免疫后抗体滴度刚开始下降时进行二次免疫,免疫后抗体上升较快,上升幅度也较大。因此,本研究为生产实践上选择水禽禽流感免疫的最佳二次免疫时间提供了理论依据。5)禽流感疫苗建议使用禽流感单联疫苗。多联疫苗虽然含有多亚型禽流感疫苗成分,能产生一定的免疫应答,但不能长时间维持较高的抗体水平,达不到理想的保护效果。另外,目前有关国内正式批准生产的H5N1与H5N2禽流感疫苗对鸡及水禽产生的不同保护效力试验尚在进一步的研究中。因此,在使用禽流感疫苗时,还应根据当地流行的禽流感病毒类型,选择合理的血凝素和神经氨酸酶亚型种毒制成的疫苗,才能真正发挥疫苗应有的免疫效果,有效地预防禽流感的发生[3]。参考文献:[1]卡尔尼克BW.禽病学[M].第10版.高福等译.北京:中国农业大学出版社,1999.[2]甘孟侯.禽流感[M].北京:中国农业出版社,2002.[3]罗开健,辛朝安.禽流感油乳灭活疫苗的研制[J].中国兽医杂志,2001,37(4):6-9.[4]OIE.OIE哺乳动物、禽类和蜜蜂A类和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册[M].北京:农业部畜牧兽医翻译出版社,1996.136-139.[5]田国斌,赵增连,唐秀英,等.鸭源禽流感病毒的分离和鉴定[J].中国预防兽医学报,1999,21(1):1-3.