HPLC测定板蓝根腺苷含量

皖南医学院本科生毕业设计（论文）2014届本科生毕业设计（论文）题目：HPLC法测定板蓝根药材中腺苷含量所在学院药学院所学专业药学年级、班级2010级药学(9)班学号10080257完成人姓名冯学武指导教师姓名张文芝2014年4月23日皖南医学院本科生毕业设计（论文）第1页共2页HPLC法测定板蓝根药材中腺苷含量摘要目的：建立一种高效液相色谱法（HPLC）测定板蓝根药材中腺苷的含量。方法：用60%甲醇超声提取板蓝根药材，HPLC法检测腺苷含量，LichrospherC18柱（4.6mm×250mm，5m）为色谱柱，甲醇-水（10:90）为流动相；检测波长为260nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结果：腺苷在0.198-0.66µg范围内呈现出良好的线性关系，r=0.9993(n=5)；平均回收率为99.68%，RSD%=1.03%。结论：该方法简便快速，测定结果准确可靠，可用于板蓝根药材的质量控制标准。[关键词]腺苷；板蓝根；高效液相色谱法皖南医学院本科生毕业设计（论文）第2页共2页DeterminationofAdenosineContentinBanlangenbyHPLCMethodABSTRACTOBJECTIVE:TodevelopamethodforadenosinecontentinbanlangenherbsbyHPLCMETHOD:Extractedwith60%methanolcontentultrasoundbanlangenbyhighperformanceliquidchromatography,.Elutedwithmethyl:water(10:90)inaflowrate1.0ml/min,adenosinewasanalyzedunderthewavelengthof260nminODSC18column,temperaturewas30℃.RESULTS:Adenosineintherangeof0.198-0.66μgshowedagoodlinearrelationship,r=0.9993(n=5);averagerecoverywas99.86%,RSD%=1.03%.CONCLUSION:Themethodissimple,rapid,accurateandreliablemeasurementresultscanbeusedforqualitycontrolofbanlangenKeywords:BanlangenHPLCmethodAdenosine皖南医学院本科生毕业设计（论文）第1页共1页目录中文摘要……………………………………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………………………………11引言……………………………………………………………………………………………12仪器材料………………………………………………………………………………………12.1实验仪器…………………………………………………………………………………12.2试剂药品……………………………………………………………………………………13方法………………………………………………………………………………………13.1实验原理…………………………………………………………………………………13.2色谱条件…………………………………………………………………………13.2.1检测波长选择………………………………………………………………………13.2.2最佳色谱条件…………………………………………………………………13.3对照品溶液的制备………………………………………………………………………13.4供试品溶液的制备……………………………………………………………………………13.5线性关系考察…………………………………………………………………………23.6精密度试验……………………………………………………………………………23.7稳定性试验………………………………………………………………………………23.8重复性试验……………………………………………………………………………………23.9加样回收试验………………………………………………………………………24.讨论…………………………………………………………………………35.结论………………………………………………………………………………36参考文献…………………………………………………………………………………57致谢………………………………………………………………………………………6皖南医学院本科生毕业设计（论文）第1页共13页1引言板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝IsatisindigoticaFort.的干燥根,《中国药典》1985一2010年版一直有收载,具有性寒味苦,有清热解毒、凉血消肿的功效,临床应用广泛。而《中国药典》未规定其质量控制的含量测定方法和指标。腺苷是板蓝根所含的一种天然成分,具有抗凝血、抗扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、镇静中枢神经和抗心率不齐的作用[1]，板蓝根药材是公认的具有抗病毒的有效中药，在临床中广泛使用。尽管对它们已作了很多研究，但其有效成分及其作用机理尚未有确切的结论，几十年来板蓝根药材及其制剂的质量监控一直未能解决[2.3]。文献报道中有人主张它们的质量控制指标应选靛蓝、靛玉红。但也有人认为“抗内毒素试验表明:靛蓝和靛玉红不具有抗内毒素活性。”[4]而它们的水溶性成分却具有很强的抗病毒、抗菌、抗内毒素、增强机体免疫作用。口前含板蓝根制剂多采用水作为提取溶剂，而靛蓝和靛玉红具有很强的脂溶性，有人对水提取液的靛蓝、靛玉红作了含量测定，结果发现其提取率仅为1.5%-3.5%。此外，浓缩过程的损失率高达924%;在通过提取、浓缩、醇沉、收膏等操作后，其转移率仅为3.3%-13%[5.6]。文献报道，板蓝根药材的水溶性成分腺苷，具有抗炎作用[6.7]，与板蓝根药材功能主治一致。但目前尚未有板蓝根腺苷含量测定的相关报道。腺苷的含量测定方法有薄层扫描法、薄层一紫外法、紫外分光度法及高效液相色谱法等。高效液相色谱法具有简便、快速、灵敏、重现性好等特点。通过试验，建立了腺苷含量测定的高效液相色谱法，为板蓝根药材及其制剂的质量控制提供了较为实用的检测方法。1化学成分到目前为止，己经从板蓝根中分离出近百个化合物，据文献报道主要有以下十一大类。即生物碱类、有机酸类、黄酮类、木脂素类、蒽醌类、甾醇类、芥子类苷、含硫类、氨基酸类、核苷类及其它类化合物。1.生物碱类化合物1.1吲哚类生物碱:靛蓝(indigotin),靛红(isatin)，靛玉红(indirubin),靛苷(indoxyl-β-glucoside)[8],2,5-二羟基吲哚(2,5-dihydroxy-indole),2,3-二氢-4-羟基-O-吲哚-3-乙腈(2.3-dihydro-4-hydroxy-2-oxo-indole-3-acetonitrile),吲哚-3-乙腈-6-O-β-D-葡萄糖苷(indole-3-acetonitrile-6-O-β-D-glucopyranoside)[9],羟基靛玉红(hydroxyindirubin)[10]，依靛蓝酮(isaindigodione)[11]和(E)-二甲氧羟苄吲哚((E)-3-(3`,5`-dimethoxy-4`-hydroxybenzylidene)-2-indolinone)[12],青黛酮(qingdainone)[13],1-甲氧基-3-乙腈基吲哚，3-乙酸基吲哚，3-吲哚醛(3-formyl-indole),1一甲氧基一3-吲哚醛[14]，脱氧鸭嘴花碱酮(deosyvasicinone)[15],(E)-2-[(3`-吲哚）腈基亚甲基]3-吲哚[16]1.2喹唑酮类生物碱:isaindigotone[10],2,4(1H,3H)-喹唑二酮[17]，色胺酮(tryptanthrin)[9],3-(2`-羧基苯基-4(3H)-喹唑酮(3-(2`-carboxyphenyl)-4(3H)-quinazolinone),4(3H)-喹唑酮(4(3H)-quinazolinone)[13],3-羟苯基喹唑酮(3-(2`-hydroxyphenyl)-4(3H)-quinazolinone)[11]。皖南医学院本科生毕业设计（论文）第2页共13页1.3喹啉类生物碱:依靛蓝双酮(isaindigotidione)[12]，板蓝根甲素(IsatanA)[31],3-[2`-(5`-羟甲基)呋喃基]-1(2H)一异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(3-[2`-(5`-hydroxymethyl)furyl]-1(2H)-is)quinolinone-7-O-β-D-glucoside)[32],2，3-二氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂萝-5.11(10H.11aH)-二酮(2,3-dihydro-1H-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-5.,11(1OH,1laH)-dion.)[20]。2.有机酸类化合物:吡啶-3-羧酸(3-pyridinecarboxylicacid)，顺丁烯二酸(maleicacid),2-羟基-1,4-苯二甲酸(2-hydroxy-1,4-benzenedicarboxylicacid)，苯甲酸(benzoicacid)，水杨酸(salicylicacid)，丁香酸(syringicacid)[18]，棕榈酸(palmiticacid),琥珀酸(succinicacid)[19],邻氨基苯甲酸(2-aminobenzoicacid)[20],5-羟甲基糠酸(5-hydroxymethylfuroicacid)[21]。3.黄酮类:新橙皮苷(neohesperidin)，甘草素(liquiritigenin)，异甘草素(isoliquiritigenin)[22],异杜荆苷(isovitexin)，蒙花苷(linarin)[20]，半齿泽兰素(eupatorin)[15]。4.木脂素类:(-)关落叶松脂素((-)-lariciresinol)，落叶松脂素-4-O-β-D葡萄糖苷(la-iciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside)，落叶松脂素-4，4`-二-O-β-D-葡萄糖苷(la-iciresinol-4,4`-di-O-β-D-glucopyranoside),4-(1,2,3一三羟基丙基）-2,6-二甲氧基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(4-(1.2,3-trihydroxypropyl)-2,6-dimethoxyphenyl-l-O--D-glucopyranoside),紫丁香苷(syringin)[13](+)-异落叶松脂素((+)-isolariciresinol)[15]。5.蒽醌类化合物:大黄素((emodin)[6]，大黄素-8-O-β-D-糖苷(emodin-8-O-β-D-glucoside)[20]。6.甾醇类化合物:β-谷多醇（β-sitosterol)，胡萝卜昔(daucosterol)[20],γ-谷甾醇(γ-sitosterol)[24]，扶桑甾醇。7.芥子苷类化合物:黑芥子苷(sinigrin),葡萄糖芸薹素(3-indolylmethylgluosinolate)，新葡萄糖芸薹素(neoglucobrassicin),1-硫代-3-吲哚甲基芥子油苷(1-sulpho-3-indolylmethylgluosinolate)[25]。8.含硫类化合物:表告依春(epigoitrin),1-硫氰基-2-羟基一3-丁烯(1-thiocyano-2-hydroxy-3-butene)[26]。9.氨基酸类化合物:脯氨酸(praline)，精氨酸(arginine),酪氨酸(tyrosine),缬氨酸(valine),谷氮酸(