微生物检测教案

黑龙江大学课程名称：微生物检测主讲教师：杜春梅职务职称：副教授授课对象：生命科学学院（生物工程、生物技术、食品工程）选课人数：116学年学期：2008-2009学年春季学期总学时数：44（理论课26学时，实验课16学时）参考书目：现代食品微生物检验技术，张伟、袁耀武主编，化学工业出版社，2007食品微生物检验技术，魏明魁、段鸿斌主编，化学工业出版社，2008食品卫生微生物检验学，李志明编著，化学工业出版社，2009食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006安全食品微生物学，李卫华等译（StephenJ.Forsythe著），中国轻工业出版社，2007药品微生物学检验手册，马绪荣、苏德模主编，科学出版社，2003药品微生物学鉴定技术，全国医药职业技术教育研究会编，化学工业出版社，2004微生物学检验（第二版），刘运德主编，人民卫生出版社，20072第一周（80min）教学目的：掌握食品药品微生物检验的指标，了解微生物检验在实际生产生活中的重要意义。教学方法：多媒体课件，讲授教学重点难点：微生物检验的指标、范围、意义是本次课的重点和难点教学内容：第一章绪论根据美国疾控和预防中心的信息引出微生物学检验的必要性。（5min）一、关于食物中毒(20min)1．概念2．举例说明3．细菌性食物中毒的特点4．细菌性食物中毒类型5．食品中污染的细菌分类：致病菌、条件致病菌、非致病菌二关于药品污染(15min)1药品污染的严重后果（举例说明）2药品污染的范围和常见原因三、食品和药品中污染的微生物类型（图片展示）(20min)1食品和药品中常见的细菌2食品和药品中常见的真菌3食品和药品中常见的病毒4食品中常见的寄生虫5螨课后问题：为什么大肠菌群作为指示菌?（作为指示菌大肠菌群的优点有哪些？）第二周（80min）教学目的：掌握微生物检验的基本程序和要求。教学方法：多媒体课件，讲授教学重点难点：如何取样具有代表性是本次课的重点学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;114-132教学内容：课堂讨论：为什么大肠菌群作为指示菌?（5min）3第一章绪论四、微生物检验（重点,40min）1、概念2、微生物检验的范围（举例说明）3、微生物检验的指标（重点和难点）（1）菌落总数（2）大肠菌群（3）致病菌（4）霉菌及其毒素（5）其它指标：病毒、寄生虫、昆虫3、微生物检验的意义第二章微生物检验的一般程序一、检验前准备（5min）二、样品的采集(举例说明，20min)强调样品必须具有代表性、要有科学的取样方案和正确的样品制备方法1、微生物限度检验的特殊性2、抽样对微生物限度检测值的影响3、样品的种类4、采样方法（1）药品取样（2）食品取样（3）生产工序监测采样（4）采样数量和标签三、样品的送检（2min）四、样品的处理（10min）1、基本要求2、供试液制备的一般方法3、有抑菌成分的样品的处理五、样品的检验（2min）六、结果与报告（1min）展示程序图，并作概况讲解自学问题：下列食品的检样如何制备？1、清凉饮料、冷冻饮品；2、冷食菜、豆制品；3、糕点、果脯等；4、酒类；5、调味品；6、方便；面（素食米粉）；7、罐藏食品；8、粮食4第三周（80min）教学目的：掌握微生物检验种常见食品药品的制备技术教学方法：多媒体课件，讲授教学重点难点：区分卫生学和致病菌的取样方案学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;114-132教学内容：第三章各类食品、药品微生物检验样品的采集与制备第一节各各类类食食品品检检样样的的制制备备（（4400mmiinn））一、肉与肉制品样品的采集与制备1、采样2、样品制备二、乳与乳制品1、采样2、样品处理三、蛋与蛋制品1、采样2、检样的处理四、水产品1、采样2、检样的处理讨论自学问题：下列食品的检样如何制备？1、清凉饮料、冷冻饮品；2、冷食菜、豆制品；3、糕点、果脯等；4、酒类；5、调味品；6、方便；面（素食米粉）；7、罐藏食品；8、粮食第二节各类药品微生物检验样品的采集与制备（40min）一、一般供试品（一）取样：（二）稀释剂（三）供试液制备二、特殊供试品（一）眼膏及软膏剂（二）栓剂及油剂（三）胶囊剂（四）胶剂（五）偏酸偏碱的供试品第四周（80min）教学目的：掌握食品、药品和水的卫生细菌学检验方法教学方法：多媒体课件，讲授5教学重点：平板菌落计数法测菌落总数，多管发酵法大肠菌群教学难点：菌落总数的计数方法和大肠菌群的MPN检索学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;132-147教学内容：第四章卫生细菌学检验一、菌落总数（40min）1概念2食品、药品的测定方法3水样的测定（1）饮用水的标准（2）水样采集与制备（3）测定程序、稀释度选择和报告方式（4）注意事项（5）其它测定方法：滤膜法试管稀释法平板表面涂布法6其它菌落总数的测定方法二、大肠菌群（40min）1、测定程序2、检测方法（1）薄膜集菌法（2）多管发酵法（3）COLIID检测法（4）TTC（氯化三苯四氮唑）显色快速法（5）DC（去氧胆酸钠）半固体试管快速法（6）纸片快速法3、耐热大肠菌群的测定（1）耐热大肠菌群的定义（2）耐热大肠菌群的检查第五周（80min）教学目的：了解大肠埃希菌的特性，掌握其检验方法教学方法：多媒体课件，讲授教学重点：检验方法教学难点：ELISA检测肠毒素，MUG-Indole检查法学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;132-147教学内容：第六章病原菌的检验6第一节大肠埃希菌(Escherichiacoli)一、大肠埃希菌的生物学特性（10min）1、形态与染色2、培养特性3、生化特性4、抵抗力5、抗原结构6、致病力二、大肠埃希菌检查法（30min）IMViC三糖铁琼脂（展示图片后，课堂讨论）志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产生什么现象？大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什么现象？沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？硫化氢试验血清学试验氧化酶试验三、MUG-Indole检查法（20min）1、原理2、检验程序3、注意事项四、肠毒素检验（10min）1、产毒培养2、ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）检测LT和ST五、快速检测（10min）第六周，第七周（160min）教学目的：了解沙门菌的特性，掌握其检验方法教学方法：多媒体课件，讲授教学重点：检验方法教学难点：血清学检查法学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;132-147教学内容：第六章病原菌的检验7第二节沙门菌检查法一、生物学特性（40min）1、形态2、培养特性3、生化特性4、抗原结构（1）抗原构造（2）抗原变异5、发病机理和症状二、沙门菌常规检查法（80min）1、培养基及诊断血清2、检验程序预增菌:增菌分离培养生化试验赖氨酸脱羧酶试验尿素酶试验氰化钾试验动力检查血清学凝集试验3、结果判断及报告增添一些必要的生化试验。4、注意事项三、沙门菌噬菌体检验法（10min）四、荧光抗体法（10min）五、其它方法（10-20min）ELISADNA探针PCR技术第八周，第九周（160min）教学目的：了解金黄色葡萄球菌的特性，掌握其检验方法教学方法：多媒体课件，讲授教学重点：致病性，检验方法教学难点：血浆凝固酶试验学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;132-147教学内容：8第六章病原菌的检验第三节金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)检查法一、生物学性状（40min）（一）形态与染色（二）培养特征（三）生化反应（四）抗原构造（五）抵抗力（六）致病性二、常规检查法（80min）增菌培养分离培养纯培养革兰氏染色镜检血浆凝固酶试验：结果判定三、其他鉴别试验（40min）溶血试验法肠毒素测定：磷酸酶试验耐热DNA酶试验：触酶试验第十周，第十一周（160min）教学目的：了解梭菌的特性，掌握产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌检验方法教学方法：多媒体课件，讲授教学重点：致病性，检验方法教学难点：特征性生化试验和动物毒素试验学生参考书目:食品检验技术（微生物部分），刘用成主编，中国轻工业出版社，2006;132-147教学内容：第六章病原菌的检验9第四节梭菌（Clostridium）检查法一、梭菌概述（20min）（一）梭菌形态特征（二）培养特性（三）检查方法二、产气荚膜梭菌检查（60min）（一）生物学特性(二)产气荚膜梭菌半定量测定（三）特征性生化试验牛乳发酵乳糖分解-明胶液化试验卵磷脂酶试验与奈格尔试验三、破伤风梭菌检查法（60min）（一）生物学特性1、梭菌形态特征2、培养特性3、生化反应4、致病力（二）检验方法1、增菌产毒培养：2、革兰染色镜检3、毒力试验4、分离培养5、结果判定（三）注意事项四、肉毒梭菌检查法（20min）第十二周（80min）教学目的：掌握GMP中的微生物检验标准和技术教学方法：多媒体课件，讲授教学重点难点：空气洁净度的检测方法学生参考书目:药品微生物检定技术，李榆梅主编，化学工业出版社，2006;85-96教学内容：提问讨论：肉罐头中应检查哪种梭菌（10min）第六章GMP中的微生物检验10一空气洁净度标准（10min）1、英制（粒/ft3）：209E空气洁净度标准2、公制（粒/L）：原苏联、澳大利亚标准，分三级。3、国际公制（粒/米3）二、洁净环境中微生物学警告水平和行动水平的建立（10min）1警告水平2行动水平三、模拟生产操作步骤微生物学评估（10min）四、空气洁净度的检测方法（重点和难点，30min）1、制定采样计划和采样位置的关键因素2、采样频率3、洁净室采样点布置4、设备5、测定方法（1）浮游菌测数（2）沉降菌测试五、微生物环境控制程序（10min）第十三周（80min）随堂考试回顾所学内容（40min）课堂答疑（40min）