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中药是中国医学宝库的一个重要组成部分，随着秀安在科学的发展，人们对中药的质量和卫生标准的要求不断提高，但由于中药的品种多样，来源广泛，且容易在加工，贮藏，运输。销售过程中受微生物的污染而导致其腐败变质，使得中药的卫生质量大大下降。一般来说，降低中药中微生物的含量的方法有很多，辐照杀菌技术为冷杀菌，穿透力强且无残留，国内外已广泛应用于中药杀菌。采用Co60-γ射线方法杀菌处理，在一定的剂量下，中药中的微生物含量迅速下降，达到国家的卫生标准，然而在中药辐照杀菌产业化应用过程中，偶尔有产品即使采用较高剂量辐射，菌体数量下降并不明显，这主要是产品中含有耐辐射的微生物所致。本研究从中药（金锁丸）中分离耐辐射的微生物，从而为中药辐照杀菌提供技术参考，为开发耐辐射微生物提供资源。1.材料与方法1.1材料1.1.1样品与菌种来源样品金锁丸为中药，主要成分有沙菀子，实芡，莲子，莲须，龙骨，牡蛎等，是由某制药有限公司提供，该产品在批量辐照杀菌过程中，有一批表现异常，经重复处理，累计辐照剂量9kGy，但产品杂菌总数下降不多，产品卫生质量仍不达标，这在四川省中药辐射杀菌二十多年来罕见的，初步分析认为其中含有耐辐射的微生物。1.1.2主要试验仪器高压灭菌锅，超净工作台，显微镜，培养皿，移液管，恒温培养箱，普通冰箱，低温冰箱，60Co-γ辐照装置，恒温干燥箱。1.1.3培养基固体肉膏蛋白胨培养基（W%）：牛肉膏：0.5g，蛋白胨：1.0g，NaCl:0.5g,水：100ml,琼脂：1.5-2.0g,pH:7.2-7.5,0.MPa,120oC杀菌20min。液体肉膏蛋白胨培养基（W%)：牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0g，NaCl:0.5g,水：100ml,pH7.2-7.5,0.MPa,120oC杀菌20min。半固体肉膏蛋白胨培养基（W%)：牛肉膏：0.5g，蛋白胨：1.0g，NaCl:0.5g,水：100ml,琼脂：0.7-0.8g，pH：7.2-7.5，0.1MPa，120oC杀菌20min。1.2.1分离培养（1-7）产品（某制药有限公司提供的金锁丸一批）辐照累计剂量9KGy，分两次辐照，即5KGy和4KGy，产品仍不合格，后全部报废，我们从未辐照的同批产品中来完成这项研究，为保证能分离到耐辐射的微生物的种类且减少分离的工作量，采用5KGy剂量进行预处理，制备样品的稀释液，称取经过辐照预处理的样品(金锁丸）1g，放入盛有99ml的并装有玻璃球的无菌水或无菌生理盐水锥形瓶中震荡10-20min，使其中菌体芽孢或孢子均匀分散制成10倍稀释液，然后按10倍稀释法进行稀释分离，以制备10-6稀释液倾注法分离:取9个无菌培养皿平均分成3组，每组平行做3个，分别在培养地面按稀释度编号，稀释完毕后，可用原来的稀释管从菌液浓度最小的10-6样品稀释液开始吸取1ml稀释液，按无菌操作技术加到相应编号10-6的无菌培养皿内，再以相同方法分别吸取1ml的10-5，10-4的样品稀释液，各加到相应编号为10-5，10-4的无菌培养皿，将以杀菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基熔化，冷却到45-50oC左右，分别倾入到已盛有10-6，10-5，10-4的样品稀释液的无菌培养皿内，待平板完全冷却后，将平板倒置于37oC恒温箱中，培养3-4d，目的让样品里的微生物得到充分的生长，在必要时可再延长培养时间。挑取单个菌落转接斜面牛肉膏蛋白胨培养基培养24h，此方法重复3次。1.2.2纯化培养及涂片检查将培养24h的君再转移斜面培养37oC，18h。然后转接斜面37oC培养10h。分别取样涂片，染色，显微镜观察菌体形态，着色情况等特征分析比较。1.2.3耐辐射菌的筛选（7）将分离得到微生物，用剂量5KGy和10KGy60Co-γ射线进行照射，观察菌体的抗辐射能力，初步确定耐辐射的菌种，然后用不同方法培养，观察其理化性状。参考文献【1】汤显春，夏克祥，刘海舟，等.曾候乙墓穴木椁微生物的分离与鉴定（J）.微生物学报，2003,6（23）：265-266【2】梁月荣，陆建良，刘祖生，茶树根际土壤抗酸铝微生物的分离与初步鉴定（J）.茶叶科学，1999,19（2）：110-114【3】刘子宇，周伟，李平兰等冷却猪肉中主要微生物的分离与初步鉴定（J）.肉品卫生，2005,（6）17-19【4】李清春，张景强，肉制品中微生物的分离与初步鉴定（J）.研究与探讨，2005,26（3）：83-85【5】翟于飞，龚文琪，祝春水，一株产絮凝固剂微生物的分离选育及时性鉴定（J）.武汉理工大学学报，2003,23（10）：23-26【6】马麦生，谭明，赵乃昕等，酵素菌中芽孢杆菌的分离与鉴定（J）.潍坊医学院学报，2002，24（2）：86-87【7】陆兆新，邹晓葵，武久正照等，输液器污染微生物辐射抗性频率发布的研究（J）.核农学报，2000，14（3）：157-162