MCM2,Ki67和PEND的表达与鼻咽癌临床分期及分化程度的关系

MCM2,Ki67和PEND的表达与鼻咽癌临床分期及分化程度的关系【摘要】目的研究Ki67,VEGR及EGFR的表达与鼻咽癌(NPC)临床分期、分化程度之间的关系。方法应用免疫组化分析32例NPCKi67、VEGF及EGFR的表达。结果(1)Ki67、VEGF及EGFR在32例NPC中的阳性表达率分别为84·4%(27/32),84·4%(27/32),78·1%(25/32)。(2)晚期(Ⅲ,Ⅳ期)鼻咽癌患者Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为100%(20/20)、100%(20/20)及95%(19/20)均明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期)患者的表达率,分别为58·3%(7/12)、58·3%(7/12)及50%(6/12),差异均有显著性(P0·05);有颈部淋巴转移患者的Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为96·1%(25/26)、92·3%(24/26)及88·5%(23/26),均明显高于无颈部淋巴转移患者的表达率,分别为33·3%(2/6)、50%(3/6)及33·3%(2/6),差异均有显著性(P0·05);未分化癌Ki67、VEGF及EGFR阳性表达率分别为100%(10/10)、90%(9/10)及80%(8/10),均高于低分化癌患者的表达率77·2%(17/22)、81·8%(18/22)、77·3%(17/22),但差异均无显著性(P0·05)。结论(1)鼻咽癌中存在着Ki67、VEGF及EGFR的高表达;(2)Ki67、VEGF及EGFR均与鼻咽癌的临床分期及有无颈部淋巴转移有相关性,均与病理分化程度无相关性。【关键词】鼻咽肿瘤;Ki67;VEGF;EGFR;免疫组化Ki67(增殖核抗原)、VEGF(vascularendothelialgrowthfactor,血管内皮生长因子)及EGFR(epidermalgrowthfactorreceptor,表皮生长因子)是促进恶性肿瘤生长、发展及转移较为重要的调节因子,三者与NPC临床分期及分化程度中的关系已有少量文献报道,但尚无一致结论。我们收集了32例较完整的临床、病理资料及通过免疫组化检测Ki67、VEGF及EGFR的表达,以探讨三者表达及其与鼻咽癌临床分期、分化程度的关系,现报告如下。1资料与方法1·1一般资料回顾2006年7月至2007年12月医院肿瘤科经病理组织学确诊的初治鼻咽癌患者32例,其中男29例,女3例,年龄16~64岁,平均46岁。所有患者放化疗前均行全身PET/CT显像。其中低分化癌22例,未分化癌10例;Ⅰ,Ⅱ期12例,Ⅲ,Ⅳ期20例;有颈部淋巴转移26例,无颈部淋巴转移6例。1·2免疫组化染色32例肿瘤组织标本石蜡常规切片4~5μm裱在用多聚赖氨酸涂好的玻片上,70℃烤24h备用,组织切片经脱蜡、水化,柠檬酸缓冲液微波法修复抗原,Ki67,EGFR,VEGF单抗的组织化学染色按三步法操作,3,3-二氨基联苯胺(DAB)酶底物显色。Ki67,EGFR,VEGF单抗及免疫组织化学所用试剂由公司提供。1·3结果判定Ki67表达阳性结果为核境界清晰的棕色、棕褐色颗粒沉着细胞。每张切片随机计数5个视野,共计1000~1500个肿瘤细胞中的阳性细胞。计算阳性细胞百分比=(阳性细胞数/计数肿瘤细胞总数)×100%,参考相关文献资料Ki67计数标准[1],以20%为界,≥20%为高表达(HPI),20%为低表达(LPI),无染色为阴性(-)。VEGF免疫组化染色的结果参考文献[2]判断,胞膜或胞浆呈棕黄着色者为阳性细胞,未着色者为阴性;EGFR样本染色评分参照文献[3]评分方法:EGFR着色部位主要为胞浆和(或)胞膜,依着色深度分阴性(-)为0分(指阳性细胞数为0%),弱阳性(+)为1~4分(指阳性细胞数在1%~33%之间),阳性(++)为5~8分(指阳性百分数在34%~66%之间),强阳性(+++)为9~12分(指阳性百分数在67%以上)。1·4统计学方法采用CS200统计软件进行相关分析与回归计算,独立两样本均数比较行t检验,计数资料采用方差分析,检验水准α=0·05。2结果2·1Ki67在NPC中的表达及与临床分期、病理分化程度的关系Ki67表达阳性表现为细胞核呈棕黄色,分布无规律(见图1),在32例NPC中的阳性表达范围为:0~70%,其中低表达率为71·9%(23/32),高表达率为12·5%(4/32),总表达率为84·4%。晚期(Ⅲ,Ⅳ期)鼻咽癌患者Ki67阳性表达率为100%(20/20),明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期)患者的表达率58·3%(7/12),二者之间差异有显著性;有颈部淋巴转移患者的Ki67阳性表达率为96·1%(25/26),明显高于无颈部淋巴转移患者的表达率33·3%(2/6),二者之间差异有显著性;未分化癌VEGF阳性表达率为100%(10/10),高于低分化癌患者的表达率77·2%(17/22),但二者之间差异有显著性(见表1)。表1Ki67、VEGF及EGFR的表达及其与NPC临床分期、分化程度及颈部淋巴转移关系例(%)项目总例数Ki67VEGFEGFR病理类型低分化鳞癌2217(77.2)18(81.8)17(77.3)未分化癌1010(100.0)9(90.0)8(80.0)P值0.1550.5550.863临床分期Ⅰ,Ⅱ期127(58.3)7(58.3)7(58.3)Ⅲ,Ⅳ期2020(100.0)20(100.0)18(90.0)P值0.0040.0040.036颈部淋巴转移有转移2625(96.3)24(92.3)23(88.5)无转移62(33.3)3(50.0)2(33.3)P值0.0000.0100.0032·2VEGF在NPC中的表达及与临床分期、病理分化程度的关系VEGF阳性表达部位为细胞膜(见图2),在32例NPC中的阳性表达率为84·4%(27/32)。晚期(Ⅲ,Ⅳ期)鼻咽癌患者VEGF阳性表达率为100%(20/20),明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期)患者的表达率58·3%(7/12),二者之间差异有显著性;有颈部淋巴转移患者的VEGF阳性表达率为92·3%(24/26),明显高于无颈部淋巴转移患者的表达率50%(3/6),二者之间差异有显著性;未分化癌VEGF阳性表达率为90%(9/10),高于低分化癌患者的表达率81·8%(18/22),但二者之间差异有显著性(见表1)。2·3EGFR在NPC中的表达及与临床分期、病理分化程度的关系EGFR阳性表达部位为细胞浆及细胞膜(见图3),在32例NPC中的弱阳性(+)表达率为31·3%(10/32),阳性(++)表达率为46·8%(15/32),总表达率为78·1%。晚期(Ⅲ,Ⅳ期)鼻咽癌患者EGFR阳性表达率为90%(18/20),明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期)患者的表达率58·3%(7/12),二者之间差异有显著性;有颈部淋巴转移患者的EGFR阳性表达率为88·5%(23/26),明显高于无颈部淋巴转移患者的表达率33·3%(2/6),二者之间差异有显著性;未分化癌EGFR阳性表达率为80%(8/10),高于低分化癌患者的表达率77.3%(17/22),但二者之间差异有显著性(见表1)。3讨论Ki67是目前较为肯定的核增殖标志基因,其表达变化可反映肿瘤的增殖活性,与肿瘤分级、预后有一定的关系。国内外许多研究表明,Ki67抗原的过量表达与乳腺癌、肺癌、胃癌、大肠癌等恶性肿瘤的恶性生物学行为和预后密切相关。在NPC的研究中,有报道[4]Ki67的阳性表达范围为0~48%,且60%属于低表达者。我们研究显示Ki67的阳性表达范围为:0~70%,其中低表达率为71·9%(23/32),高于报道水平。有学者认为Ki67阳性表达与临床分期[5]及局部淋巴结有、无转移[6]相关,但亦有不少学者[4]对此提出相反的看法,认为Ki67的表达与头颈肿瘤的分期无相关性。本研究结果显示:Ki67表达与NPC临床分期及有无颈部淋巴转移有关,而与病理分化程度无关。VEGF能特异性地促进血管内皮细胞分裂、增殖,诱导肿瘤血管形成,并增加血管通透性,使血管内成分渗漏,为血管内皮细胞的迁移及血管形成提供基质,在肿瘤的生长和转移中发挥较为重要的作用。现有研究显示VEGF在胃癌、乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中均有较高水平的表达,并与某些肿瘤转移及预后相关,但在头颈肿瘤中的研究对于VEGF与分期和预后的关系存在较大争议[7],有关NPC中VEGF的研究报道不多,本研究结果显示NPC组织VEGF阳性表达率为84·4%,VEGF表达与NPC临床分期及有无颈部淋巴转移有关,而与病理分化程度无关。这一结果略高于其他学者的报道(80·4%)[8]。并与张弓等[9]的结果一致,该论文报道75例NPC组织中VEGF的表达与NPC临床分期、颈淋巴结转移、远处转移及生存率有关。EGFR是原癌基因cerbB-1(HER-1)的表达产物,广泛分布于血管组织和哺乳动物的上皮细胞膜上,其所介导的信号传导通路与肿瘤的发生、发展关系密切。在非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、胃癌、结直肠癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、卵巢癌中存在EGFR的表达或高表达。EGFR在鼻咽癌组织中的表达率在25%~95%之间[10-11],LASKIN等[10]的研究显示EGFR与NPC的临床分期有关,与T,N分期无关。但叶奕菁等[12]认为EGFR与NPC临床分期无关。本研究利用免疫组化方法检测EGFR在NPC中的表达情况,结果显示:NPC中EGFR弱阳性(+)表达率为31·3%(10/32),阳性(++)表达率为46·8%(15/32),总表达率为78·1%;EGFR表达与NPC临床分期及有无颈部淋巴转移有关,而与病理分化程度无关。综上所述,NPC组织中存在Ki67,VEGF,EGFR的高表达,我们的结果与文献报道一致。本研究的结果显示Ki67,VEGF,EGFR的阳性表达率与其临床分期及有、无颈部淋巴转移有关,与病理分化程度无关,与目前文献报道的结论不完全一致。由于本组实验研究病例数少,且有关Ki67、VEGF、EGFR与NPC病理分化程度的关系鲜见报道,因此,要明确三者与NPC临床分期及分化程度的关系,需要开展进一步扩大临床病例的研究。参考文献[1]TUTVM,BRAITHWAITEKL,ANGUSB,eta.lCyclinD1ex-pressionintransitionalcellcarcinomaofthebladder:correlationwithp53,wsf1,PRbandKi67[J].BritJCancer,2001,84(2):270.[2]DUDEKA,MAHASETHH.Circulatingangiogeniccytokinesinpatientswithadvancednon-smallcelllungcancer:correlationwithtreatmentresponseandsurvival[J].CancerInvestig,2005,3:193-200.[3]CHOIJ,KIMH,LIMH,eta.lVascularendothelialgrowthfactorintheserumofpatientswithnon-smallcelllungcancer:correlationwithplateletandleukocyteounts[J].LungCancer,2001,33:171-179.[4]石小燕,胡国清,曹荣华.Ki67在鼻咽癌中的表达及意义[J].肿瘤防治研究,2004,31(1):4-6.[5]ZHENGX,HUL,CHENF,eta.lExpressionofKi67antigen,epidermalgrowthfactorreceptEpsteinBarrvirus-en-codelatentmembraneprotein(Lmpl)nasopharyngealcarcinoma[J].EurJCancerBOralOnco,l19