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MGMT甲基化检测SOP(简)1组织DNA提取纯化并测定浓度;2取200-500ngDNA，补水至体积到20ul（不足200ng的样品，直接取20ulDNA溶液）;3按照EZDNAMethylation-Goldkit操作步骤处理DNA；4以步骤3处理后的DNA样品为模板，按以下体系程序进行两次扩增：5PCR扩增引物序列（由invitrogen合成）引物名称引物序列产物大小bp退火温度MGMT-outFMGMT-outRGYGTTTYGGATATGTTGGGATAGTTAAACTCCRCACTCTTCCRAAAAC135bp59MGMT-SFMGMT-SRTTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGCGCACTCTTCCGAAAACGAAACG83bp59MGMT-PFMGMT-PRTTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGTAACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA91bp59第一步：反应体系：30μlPCR体系:Prime1.5μl10*buffer3μldNTP2μlddH2O21μlrTaq0.4μlTemplate2μl(50ng).扩增步骤95°C2min94°C30s40*59°C30s72°C30s72°C5min16°C∞第二步：反应体系30μlPCR体系:Prime1.5μl10*buffer3μldNTP2μlddH2O22μlrTaq0.4μlTemplate1μl.扩增步骤95°C2min94°C30s40*59°C30s72°C30s72°C5min16°C∞6在3%的琼脂糖凝胶电泳上检测7结果判定情况1：MGMT-SFR（甲基化引物）有扩增MGMT-PFR（非甲基化引物）无扩增该样品为完全甲基化情况2：MGMT-SFR（甲基化引物）无扩增MGMT-PFR（非甲基化引物）有扩增该样品无甲基化情况3：MGMT-SFR（甲基化引物）有扩增MGMT-PFR（非甲基化引物）有扩增该样品为半甲基化