miRNA的功能研究-Luciferase报告基因表达载体的构建与检测

miRNAs与靶基因的3’UTR结合后，主要抑制mRNA的翻译，可以WesternBlot检测靶蛋白的表达水平；也有部分表现为对标靶mRNA的降解，可以采用qRT-PCR进行检测。但无论那一种方法，都不能有效说明是miRNAs直接作用的结果。直接的证据在于Sensorreporter的构建与活性检测，我公司的技术人员利用Promega特有psiCHECK质粒，对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断。服务特点（1）采用Promega公司特有psiCHECK质粒；（2）所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；（3）采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。服务内容（1）PCR扩增靶基因的3’UTR，或直接合成结合位点序列；（2）将上述DNA片段克隆至报告载体psiCHECK质粒；（3）合成miRNA模拟物；（4）将报告载体与miRNA模拟物共转待检细胞；（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。客户提供miRNA与靶基因的信息，相应检测细胞株。我们提供克隆含有靶基因3’UTR或结合位点序列的报告质粒，检测结果与完整的实验报告。