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参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶①_______________DNA母链②_______________________课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段生物体内的DNA复制细胞核1．DNA复制的场所是______________。2．参与DNA复制的组成成分与反应条件打开DNA双链提供DNA复制的模板参与的组分在DNA复制中的作用③_______________合成子链的原料DNA聚合酶④_____________________________引物⑤______________________________________________________________________续表4种脱氧核苷酸催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸PCR扩增技术1．概念DNAPCR技术是____________________的简称，是一种在________进行的迅速扩增DNA的技术。它能够以极少量的__________为模板在短时间内复制出上百万份。2．PCR反应过程(1)变性。(2)复性。(3)延伸。3．结果两个引物DNA聚合酶只能特异性地复制在______________之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。多聚酶链式反应体外DNA含量测定1．原理：利用DNA在______________的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。260nm2．计算公式：DNA含量(μg/mL)＝50×(260nm读数)×(________________)。稀释倍数体内复制PCR扩增解旋方式在解旋酶的作用下，细胞提供能量，部分解旋加热至90℃左右，双链全部解开，不需要解旋酶引物一小段RNARNA或者单链DNA合成子链在引物的基础上，一条链连续合成，另一条不连续合成分别从两条链的引物端开始，连续合成，控制温度条件在72℃特点边解旋边复制，半保留复制在体外迅速扩增DNA聚合酶不需要耐高温聚合酶耐高温的TaqDNA聚合酶循环次数受生物自身控制30多次相同点两者都需要模板、四种脱氧核苷酸，都需要酶和能量，需要一定缓冲溶液环境DNA的体内复制与PCR扩增的区别与联系PCR技术的原理及过程1．PCR原理PCR技术利用了DNA的热变性原理：在80～100℃的范围内，DNA的双螺旋结构解体，双链分开，当温度缓慢降低时，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。2．PCR的反应过程(1)变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为单链。(2)复性：温度下降为50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。(3)延伸：当温度上升至72℃左右时，四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA链。3．PCR反应的条件(1)稳定的缓冲液环境。(2)DNA模板。(3)分别与模板DNA两条模板链相结合的引物。(4)A、T、C、G四种脱氧核苷酸。(5)耐热的DNA聚合酶，一般用TaqDNA聚合酶。(6)能严格控制温度变化的温控设施。PCR扩增技术与DNA体内复制的区别【例1】下列属于PCR扩增区别于DNA体内复制的是()①需要解旋酶②需要引物③常温常压下进行④以四种脱氧核苷酸为原料⑤需要耐高温的TaqDNA聚合酶⑥边解旋边复制⑦可以短时间得到大量拷贝⑧需要模板A．①②③④⑤⑥⑦⑧C．⑤⑦B．②③④⑤⑥⑦D．③④⑥⑧【名师点拨】：体内复制与PCR扩增既有区别又有联系，PCR体外扩增概念很明确，在体外，加热解旋，因此需要耐高温的TaqDNA聚合酶，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA。【答案】：C【配对练习1】真核生物细胞质中也有DNA，例如叶绿体、线粒体等，关于细胞质DNA复制不正确的是()A．需要解旋酶B．需要DNA聚合酶C．两条链同时复制只有一个起点D．不是半保留复制解析：真核生物细胞质中DNA复制需要解旋酶、DNA聚合酶、两条链同时复制只有一个起点，是半保留复制。答案：DPCR扩增的条件【例2】PCR扩增包括三个环节，变性、复性(退火)、延伸，这三步的温度依次是()A．94℃、55℃、72℃B．72℃、55℃、94℃C．55℃、94℃、72℃D．80℃、60℃、72℃【名师点拨】：PCR扩增的原理就是利用DNA耐高温的特性，使DNA在94℃左右双链解螺旋，然后在低温(37～55℃)的情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)下，以引物3′端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板从子链的5′→3′方向延伸，合成DNA新链。【答案】：A【配对练习2】在下面哪个温度范围内，DNA双螺旋结构解开()A．10～20℃B．80～100℃C．20～30℃D．40～60℃解析：PCR扩增在80～100℃温度范围内，DNA双螺旋结构解开。答案：B