普通生物学实验讲义

1普通生物学实验讲义环境科学与工程学院中国海洋大学2普通生物学实验讲义实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图......................3实验二生物细胞的显微结构..............................................8实验三植物细胞的质壁分离与质壁分离复原................13实验四原生动物的显微观察............................................15实验五叶绿体色素的提取、分离及含量测定................21实验六洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察........25实验七鱼的形态及解剖结构............................................27实验八ABO血型检测......................................................33实验九大型海藻的分类与识别........................................353实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图一、实验目的1.了解普通光学显微镜的基本构造，能规范和较熟练地使用；2.学习细胞临时装片的制作方法和生物绘图的方法。二、实验材料微藻细胞培养液三、实验用具显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管四、实验内容1、普通光学显微镜的基本构造、使用方法及保护显微镜的基本结构显微镜构造很复杂，种类很多，但基本结构是由机械和光学两大部分构成，现分述如下：1.1机械部分它是为光学部分服务的部件，包括以下六部分：(1)镜座：显微镜昀下面呈马蹄形或圆形的部分，起稳定和支持显微镜作用。(2)镜柱：直立于镜座上的短柱，支持显微镜的其它部分。(3)镜臂：弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。(4)载物台：自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。(5)镜筒：和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是160-170mm。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘），其上装有2-4个物镜。(6)调焦器（调节器或调节螺旋）：为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。大的叫粗调焦器，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细调焦器，4升降镜筒较慢。1.2光学部分由接目镜、接物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。(1)接目镜：装于镜筒上方，由两组透镜构成，接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。接目镜上刻有5×，8×，10×，15×，25×等符号，表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。如接物镜是10×，接目镜是8×，其物像的放大倍数是10×8＝80倍。可在接目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。(2)接物镜：装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有2-4个接物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有4×，10×，40×及100×。4×及10×接物镜是低倍镜，40×是高倍镜，100×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌，高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构，油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。(3)聚光器（集光器）：位于载物台（通光孔）下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入接物镜和接目镜，有的聚光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈，可调集光器口径的大小和照射面，以调节光线强弱（有的显微镜只有遮光极而无集光器）。光线过强时，可缩小虹彩光圈。(4)反光镜：是显微镜观察时获得光源的装置，位于显微镜镜座中央，一面为平面镜，一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。显微镜的使用方法(1)取好光源（调光）用显微镜观察标本前，先要取好光源。首先把显微镜放在自己左肩一侧台前，镜座距桌边约两寸，镜臂朝自己，镜筒朝外。用手转动物镜转换器，使低倍接物镜和镜筒成一直线，正对通光孔。用左眼从接目镜向下注视，同时用手拨动反光镜，让镜面对着光源，当看到圆形镜界（视野）呈现光亮而均刀的时候即调好光了，如视野阴暗不明，则需再调节反光镜和集光器，直到视野明亮均刀为止。若为自带电源，则在使用前打开电源开关，逐步调节光亮度旋钮，直至亮度合适为止。(2)观察5将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央，玻片标本两端用压片夹夹紧，再用手沿顺时针方向旋转粗调节器，把镜筒徐徐降到物镜头差不多接近玻片标本（约半厘米）为止（从侧面观察下降镜筒）。然后左眼观察，边观察边用调节器将镜筒徐徐上升（逆时针方向旋转粗调节器）直到发现物象，观察清晰为止。如果观察部分不在视野中心，可移动玻片标本到视野中心，再上下转动粗调节器至物象清晰为止。如果要观察视野内某部分更细微的结构，则需要用高倍镜观察，首先要把观察的部分移至视野中心，然后移动物镜转换器换上高倍镜（使正对通光孔）（使用镜头转化器，不要直接扳动镜头），再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整，至视野中出现物象，然后用细调节器调节到看清物象止。如光线太弱，可放大虹彩光圈的口径或调节光亮度旋钮。高倍镜下观察的标本，如果放大倍数还不够，可用油镜，换用前，同样要先在高倍镜下观察，把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后，在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒，直立反光镜，使光学部件的光线不再对在一条直线上。应当了解的是，在显微镜中观察到的物象是倒象，因此移动玻片时，应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片，同样要使物象向前移动，就要向后移动玻片。观察结束后，降下载物台，取掉载玻片，光源调至昀弱后关闭电源（为防止下次打开电源时因电流过大烧毁照明灯泡，请在关闭电源前一定将光源亮度调至昀暗）。显微镜的保养(1)取送显微镜时，必须右手握住镜臂，左手托住镜座，轻拿轻放。(2)显微镜的使用，一定要按实验指导写的方法和步骤，认真仔细去做，不然，容易损坏标本和镜头，又达不到看清物象的目的。(3)观察标本时，一定要先用低倍镜观察，再用高倍镜，低倍镜能看清，就不必用高倍镜。(4)不能用硬纸擦透镜，必须用干净的擦镜纸或细软纱布，朝一个方向擦试透镜，以免损坏镜头。(5)不要随便转动粗细调节器，以免机器损伤，调节失灵。(6)载物台要保持清洁、干净，不要让水或其他液体（酸、碱或其他化学药品等）流到台上，6以免生锈或腐蚀。(7)避免阳光直接照射，要防潮湿、防灰尘，经常保持镜体和镜体箱的干燥和清洁。显微镜的类型(1)光学显微镜主要有普通光学显微镜、体视显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、相差显微镜等，另外按目镜筒数可分单筒（目）和双筒显微镜，按使用人数可分单人、双人和多人用显微镜等。(2)电子显微镜主要有扫描电子显微镜、透射电子显微镜、扫描隧道电子显微镜等。2．微藻细胞临时装片制作及形态、结构的观察擦净载玻片和盖玻片，即将浸洗过的玻片用纱布擦干，擦盖玻片时，应十分小心。在载玻片中央加一滴藻细胞培养液，将盖玻片压好制成标本片（盖玻片一端要先接触载玻片，然后将另一端轻轻放下，不要产生气泡），将标本片置于镜台上，先练习低倍镜的使用，然后再换高倍镜观察，绘出藻细胞形态图。生物绘图的要求(1)具有高度的科学性，不得有科学性错误。形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精美而美观。(2)图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。(3)绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。(4)绘图的线条要光滑、刀称，点点要大小一致。(5)绘图要完善，字体用正楷，大小要均刀，不能潦草。注图线用直尺画出，间隔要均刀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整齐。(6)绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间，在图的下方注明图名及放大倍数。生物绘图的方法7生物绘图的方法有多种，昀常见的是点点衬阴法和线条衬阴法。点点衬阴法即将图形画出后，用铅笔点出圆点，以表示明暗和深浅，给予立体感。在暗处点要密，明处要疏，但要求点要均刀，点点要从明处点起，一行行交互着点，物体上的斑纹描出再点点衬阴。线条衬阴法又称涂抹阴影法，是依靠线条的疏密来表示阴暗和深浅。点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点。生物绘图的步骤(1)绘图前认真的观察标本，搞清实物标本的结构特点，切忌抄书或平空想象。(2)用HB铅笔轻轻将图轮廓画出，作为草图要掌握好比例和位置。(3)在草图的基础上绘详图，此时要用2H和3H铅笔，线条要流畅，点要刀称，点线不要重复描绘。(4)按注图要求绘图，写上图名及班级、姓名、放大倍数等。五、实验要求按实验目的的要求完成实验内容和实验报告，报告要求：1.写出使用普通光学显微镜的注意事项。2.按生物绘图的要求准确绘出藻细胞形态并标注其基本结构。8实验二生物细胞的显微结构一、实验目的(1)了解植物细胞的基本构造及装片观察的操作方法。(2)了解动物细胞及基本组织的结构和功能。(3)进一步掌握显微镜的使用方法。二、实验材料洋葱鳞叶、白菜叶、马铃薯、胡萝卜三、实验用具显微镜、刀片、摄子、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、碘液。牙签、0.1％的亚甲基蓝、0.7％的NaCl溶液、蒸馏水、吸水纸四、实验内容1、植物细胞的显微结构1.1观察洋葱鳞叶的表皮细胞首先在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，然后取洋葱鳞茎剥去外皮较老的鳞叶片，用摄子撕去内部鳞片叶表皮一小块放在载玻片水滴中，将其展平后，再用摄子夹取一干净的盖玻片，将其一边放于载玻片上，和水面接触，另一边慢慢放下，以免产生气泡防碍观察。如水不足，沿盖玻片边缘滴加，如边缘水分过多，可用纱布拭去，这样做成临时装片后，就可放置显微镜下观察。先用低倍镜观察，再选择一个清晰的细胞用高倍镜仔细观察细胞形状及各部分构造，可见洋葱鳞片叶表皮细胞多数呈长方形，外为细胞壁，内有无色细胞质和细胞核，圆形的细胞核内可见到1-2个更小的折光较强的核仁。由于洋葱表皮细胞较为透明，故必须缩小虹彩光圈，避免过强光线，否则反而看不清。然后，从盖玻片一边加入1-2滴碘液，用吸水纸从盖玻片另一边吸去蒸馏水，使碘液透9入材料中，这时细胞核染成黄褐色，细胞质染成浅黄色，液泡颜色较淡。1.2质体(1)观察白菜叶肉细胞中的叶绿体取载玻片一块，在其中滴入清水，然后用摄子撕取白菜叶带叶肉的下表皮，放在载玻片的水滴中，盖上盖玻片，在显微镜下观察，可看见在叶的细胞中有许多圆形绿色颗粒－－叶绿体。在表皮细胞中一般不含叶绿体，但在组成气孔的两个半圆的保卫细胞中可见圆形叶绿体。(2)观察胡萝卜细胞的有色体在培养皿中盛好水，将胡萝卜（储藏根）切成2-3cm长，用左手的食指和大姆指夹持，中指在下顶住，使胡萝卜顶部置于指上4-6mm，右手拿刀片，刀口朝内保持水平方向，自左前方向右后方拉动刀片，胡萝卜片就被切下。为了切得厚薄均刀，刀片与材料断面要平行，左手保持平稳不动，右手拉刀迅速均刀，材料与刀片保持湿润。切好的切片，立即放入培养皿的水中。选择昀薄的切片，做成水装片，在显微镜下观察，有色体为红橙色，不规则的颗粒或棒状。1.3细胞后含物(1)马铃薯的淀粉粒取切开的马铃薯一小块，用镊子镊取少许白色混浊的浆液，置载玻片水滴中，加上盖玻片，用显微镜观察。淀粉粒呈卵圆形、椭圆形颗粒，较小的呈圆形，每一个淀粉粒中心有一特别明亮的脐点，常偏向一侧；脐点外围有明暗交替的“轮纹”围绕。除了这种单粒淀粉外，马铃薯还有少许复粒和半复粒淀粉，水稻米粒多含复粒淀粉。观察后，加一滴碘液于盖玻片边缘，