5大肠杆菌感受态细胞的制备转化与鉴定

大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定一、目的把体外重组的DNA引入受体细胞二、原理（一）遗传物质的传递（二）受体菌的选择与改造三、感受态细胞的制备氯化钙法：1、划平板培养菌种2、挑单菌落培养过夜3、菌体的扩大培养以下步骤均在冰浴中进行4、.4℃离心，4000rpm×10min，弃去上清，用冰浴的0.1MMgCl225ml悬浮30min5、.4℃离心,4000rpm×10min，弃去上清，加入冰浴的0.1MCaCl2-甘油溶液1ml悬浮。以100μl/管分装入1.5ml离心管中，-70℃冻存备用。四、感受态细胞的转化1、取100μl贮存于-70℃钙化菌，冰浴化开；2、加入适量连接产物，轻混匀，冰浴20min;3、于42℃热休克90s，迅速转移至冰浴中，继续冰浴2-3min;4、.加入LB液体培养基200μl，于37℃缓摇孵育45min;5、将培养物适量涂于1.5%琼脂LB平板（根据质粒性质添加抗生素或/和X-Gal/IPTG），待胶表面没有液体流动时，37℃温箱倒置培养12-16hr。五、重组子的筛选1、耐药性基因2、蓝白斑筛选