AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程

SOP04006Page1/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程使用维护标准操作规程颁发部门制订人：复核人：批准人：质保部制订日期：复核日期：批准日期：执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数_____份发送部门修订记录修订人修订原因修订内容版本修订日期1.目的：确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。2.范围：适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。3.定义：无4.职责：荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。5.内容：5.1室内温度控制在15～30℃，相对湿度45～75%。5.2仪器操作5.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。5.2.2接着打开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。5.2.3点击7500Softwarev2.3图标，打开软件。5.2.4按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块，检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。（检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平，检测96孔PCR反应板无需配平）5.2.5再次按压托盘使其滑入仪器。SOP04006Page2/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程5.2.6新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5cycles；（95°，10″；62°，35″）×40cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），20μl反应体系。5.2.6.1在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中，将TargetName下的Target1改成FAM；点击AddNewTarget，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。5.2.6.2在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20（20μl反应体系）。选中第一个HoldingStage，点击DeleteSelected删除；在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击AddStage下拉菜单选择Cycling，在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下面点击图标收集荧光。5.2.6.3点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。5.2.7已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击打开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5cycles；（95°，10″；62°，35″）×40cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），ReactionVolumePerWell:20μl（20μl反应体系）。5.2.8在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。5.2.9在Run-AmplificationPlot中点击STARTRUN，命名为20140101-1（当日日期+当日上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1），保存在默认文件夹中，开始运行。5.2.10结果分析5.2.10.1PCR反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。5.2.10.2也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20），Threshold值（Rn）推荐设定为5000～15000，点击Analyze进行分析，然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。5.2.11实验结束后取出反应管（切勿打开管盖），顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。5.3仪器维护5.3.1每周维护SOP04006Page3/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程5.3.1.1检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。•至少每周检查一次计算机磁盘空间。•如果硬盘的可用空间不足其总容量的20%，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。5.3.1.2关闭控制7500Instrument的计算机，30秒后再次开启计算机。5.3.1.3用无绒布块（不脱毛）蘸取75%酒精清洁7500Instrument的表面。（注：切勿使用有机溶剂清洁7500Instrument。）5.3.1.4使用75%酒精浸泡反应管托架（晾干后放回仪器内）。5.3.2每月维护5.3.2.1执行背景校准。（可执行一次背景校准以检查是否存在污染物）5.3.2.2运行磁盘清理和磁盘碎片整理。•至少每月一次。•当Windows®操作系统显示消息提示执行碎片整理时。•切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500Real-TimePCRSoftware。5.3.3每半年（6个月）维护5.3.3.1检查灯具状态。①在7500Software中，选择Instrument→LampStatus/Replacement以确定卤素灯的状态。显示LampStatus/Replacement对话框：•Condition–表示以下其中一种状况：–Good–灯具工作良好，不需要更换。单击Close。–Failed–必须更换灯具。单击Close，然后按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。–ChangeSoon–灯具使用超过2000小时；生产商建议将其更换。单击Close，然后决定是否更换灯具。如果决定更换，请按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。•Usage(Hours)–灯具已照明的总小时数。•LampCurrent–灯具的输出电流，以安培为单位(A)。低电流意味着灯具可能将要失效。•DateLastReplaced–上次更换灯具的日期。SOP04006Page4/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程②在执行一次运行之前或期间，7500Software可能显示以下警告：消息描述Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.在运行开始时，灯具电流低于可接受水平。在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.7500Software停止了该次运行，因为在运行中灯具电流下降到可接受水平之下。在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。在消息框中单击OK，检查仪器日志，然后更换灯具。Warning-Thelampusagehasexceeded2000hr.Werecommendreplacingthelampsoontoensureoptimalassayperformance.在运行开始时，灯具使用时间超过2000小时。单击CancelRun，然后更换灯具，或者单击ContinueRun。重新运行ROI、背景、光学和染料校准。5.3.3.2执行目标区（ROI）校正。5.3.3.3执行背景校准。5.3.3.4执行光学校准。5.3.3.5执行染料校准。5.3.3.6执行RNaseP仪器验证试验。5.3.4其它维护任务（需要时执行）5.3.4.1样本块污染清除。SOP04006Page5/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程执行以下程序，去除7500Instrument样本块的荧光污染。荧光污染是导致背景运行失败的常见原因，在此情况下，一个或多个反应孔会持续表现出异常的高信号。注意！切勿移去设备上的盖板。7500Instrument中没有用户可安全维修的组件。如果怀疑存在问题，请联系生产商服务代表。①全程戴上一次性无粉手套操作。②找到样本块中受污染的反应孔（参阅5.4.2.13“如何确定污染”）。③从7500Real-TimePCRInstrument中取出反应板和托盘支架。a.按压托盘门，将其打开。b.取出反应板和托盘支架。c.关闭托盘门。以一定角度向托盘右侧施加压力。④手动降低样本块：a.在7500Software中，选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中，单击StartManualCalibration。c.在ROIInspector对话框中，单击MoveBlock。d.当ROIInspector对话框显示“BlockDown”时，单击Done。⑤关闭7500Real-TimePCRInstrument，然后拔下其电源电缆。允许仪器冷却15分钟。⑥打开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内，然后推动以解开门栓。b.打开仪器前门。SOP04006Page6/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程⑦抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的背面。⑧使用少量的双蒸水，清洁样本块中被污染的反应孔：a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反应孔中。b.抽吸并滴入反应孔中的双蒸水数次，以冲洗反应孔。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反应孔的内壁。e.使用无绒布料，吸出残余的双蒸水。⑨7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。抬起门栓，然后将受热的护盖门紧固到交叉杆。SOP04006Page7/29文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程⑩打开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。⑪插上电源插头并开启7500Instrument。⑫通过执行背景校准运行确认已消除污染（参阅5.4.2“背景校准”）。⑬如果污染仍然存在，重复步骤②至⑦，然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反应孔：a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反应孔中。b.抽吸并滴入反应孔中的溶液数次，以冲洗反应孔。c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反应孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反应孔。⑭重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反应孔，并验证已清除掉污染物。⑮如果污染仍然存在，重复步骤②至⑦，然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反应孔：a.用移液管吸取少量10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反应孔中。b.抽吸并滴入反应孔中的溶液数次，以冲洗反应孔。c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反应孔之后，应始终使用去离子水冲洗反应孔。⑯重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反应孔，并验证已清除掉污染物。如果仍有污染，请与生产商技术支持联系。⑰确保受热盖门完全关闭并上闩。如果没有，则7500Soft