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成都医学院教案首页2009级生物技术专业任课教师：殷建华课程微生物学实验技术题目土壤中产纤维素酶菌株的筛选学时讲授实验3练习行课时间2011年12月29日第6－8节课次第8次教材《微生物学实验》，赵斌，何绍江主编，科学出版社教具教学目的要求1.掌握从环境中分离筛选纤维素酶产生菌的原理和方法；2.熟悉选择培养基的原理和制备方法。3.了解筛选特定菌株的实验方案的设计程序。教学重点难点及其解决方案教学重点:选择培养基的原理和制备方法教学难点:选择培养基的原理和制备方法解决方案：通过实验学生反复训练，对于最后的实验结果教师举例进行分析参考资料[1]钱存柔，黄仪秀.微生物学实验教程.北京：北京大学出版社，1999.[2]沈萍编.微生物学实验.北京：高等教育出版社，2002.实施情况小结教研室主任签名：2011年9月10日成都医学院教案续页教学过程、内容及时间分配教学方法与手段实验八土壤中产纤维素酶菌株的筛选一、实验原理（20分钟）微生物对大分子的纤维素﹑淀粉﹑蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内.如纤维素酶水解纤维素为小分子的糖，细菌菌落在固体培养基上会形成水解斑，从而据此判断细菌能否分解纤维素。二、实验器材及方法实验器材：（5分钟）1、培养基：羧甲基纤维素钠培养基羧甲基纤维素钠10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾氯化钠1g，蛋白胨10g酵母粉蛋白胨10g，琼脂粉20g，水1000ml，pH自然2、土壤样品实验方法：1、培养基的制备（30分钟）以羧甲基纤维素钠为惟一碳源制备平板培养基，筛选纤维素酶产生菌。2、土壤的采集在学校的灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5毫升灭菌水的试管中，震荡混匀。3、涂布平板与培养（20分钟）取试管中的液体1毫升，以等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，取10-4，10-5，10-6，10-7稀释倍数的土样液体0.2毫升分布加入平板中涂布。然后放入37℃培养箱培养48小时后观察。4、挑取纤维素酶产生菌（20分钟）测量平板中菌落的透明圈及菌落的直径，并计算Φ透明圈/Φ菌落，挑选比值大的菌落转接平板培养。5、纤维素酶产生菌的生物学特性观察（25分钟）菌落形态，革兰氏染色。三、关键步骤及注意事项注意无菌操作。讲授法讲授法强调惟一碳源的原理讲授法