BCPAP基本资料new

实验室保存BCPAP细胞基本资料BCPAP人甲状腺癌乳头状细胞细胞背景资料（源自ATCC）ATCC中没有本细胞株，该细胞购自广州吉尼欧生物科技有限公司；细胞来源：法国UniversityofMedecineLyon-Sud细胞图片Lowdensity（40fold）Highdensity（40fold）培养方法培养基：RPMI-1640+10%FBS，青霉素100IU/mL和链霉素100μg/mL培养箱条件：37℃，5%CO2复苏：从液氮中取出细胞，迅速放入37℃水浴（注意防止冻存管炸裂），待解冻后迅速加入9ml完全培养基中混匀，离心（800rpm，3min），将收集的细胞用3ml完全培养基重悬，转入细胞培养瓶培养。换液：弃去旧培养基，加入3~4ml预热37℃的新鲜培养基。1~2天换液一次，视细胞密度和培养基变色的程度而定。传代：当细胞生长至80%时应当传代。弃去培养基，用PBS或无血清培养基冲洗1~2次，加入1ml胰酶（25cm2培养瓶）铺平，37℃消化直至细胞大部分脱离瓶底（1-2min左右），加入2ml完全培养基终止消化，转入15ml离心管中，离心（800rpm，3min）去上清，加入完全培养基重悬细胞，轻轻打散后分装至细胞培养瓶培养（按1:2的比例传代）。注：进口细胞培养瓶可重复使用，但每次胰酶消化后，要用PBS将瓶壁冲洗2遍后再接入细胞。冻存：取处于对数生长期、生长状态良好的细胞，用胰酶消化后加完全培养基终止消化反应，离心（900rpm，3min）去上清（操作同传代），轻轻敲散后用细胞冻存液重悬细胞（1×106~5×106细胞/ml），分装至冻存管（1ml/管），放入梯度降温盒后置于-80℃冰箱，24小时后放入液氮中保存。注：为保证细胞的状态良好，冻存前24h应换液。细胞生长曲线（CCK-8测定）注：30min处为加入CCK-8后30min测定数据，60min处为加入CCK-860min后测定数据00.20.40.60.811.21.41.60200040006000800010000BCPAP30min0h24h48h72h种板密度（细胞/每孔）吸光度（OD450-OD620）00.511.522.50200040006000800010000BCPAP60min0h24h48h72h种板密度（细胞/每孔）吸光度（OD450-OD620）合适种板密度4000细胞/孔（96孔板，增殖抑制试验）状态判断目前该细胞生长状态良好，适合做药筛实验附：生长曲线绘制方法1取对数期生长状态良好的细胞，胰酶消化后，吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板；设计8个浓度梯度，分别为2x103、3x103、4x103、5x103、6x103、7x103、8x103、9x103细胞/孔，每孔培养基100微升，每个浓度三个重复，同样的浓度种四块板，37℃、5％CO2培养箱中培养过夜；2接种12h后待细胞完全贴壁后弃去原培养基，此时记为0h，CCK-8法测板一块，其余3板每孔加入200微升完全培养基继续培养00.20.40.60.811.21.40244872BCPAP30min20003000400050006000700080009000时间（h）吸光度（OD450-OD620）00.511.522.50244872BCPAP60min20003000400050006000700080009000吸光度（OD450-OD620）时间（h）3CCK-8法：加入CCK-8液（10微升／孔）；继续培养1小时；分别于30min和60min各测板一次4酶标仪检测各孔OD值（检测波长450nm，参比波长620nm）；记录结果；5剩余3板分别于24h，48h，72h处测板，测板方法同上BCPAP细胞增殖抑制预实验结果96孔板药物浓度布局PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSBlankDMSOT100T10T1T0.1T0.01PBSPBSBlankDMSOT100T10T1T0.1T0.01PBSPBSBlankDMSOT100T10T1T0.1T0.01PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS细胞密度：4000cell/well；T：紫杉醇Taxol（ng/ml）；加药72h后测板原始数据OD450PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS1.6111.5760.4780.5691.231.4751.418PBSPBS1.5771.6010.4940.5851.1171.4081.546PBSPBS1.6081.5950.4450.5731.1571.3911.395PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS加药72h后测板原始数据OD620PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBS0.0580.0530.0430.0460.0520.0540.053PBSPBS0.0540.0540.0450.0460.050.0520.054PBSPBS0.0570.0540.0450.0470.050.0520.052PBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSPBSOD450为细胞与测试试剂反应产物的吸光值，OD620为溶液浊度的值，因此各孔的实际OD值=OD450-OD620各药物浓度对BCPAP细胞增殖的抑制率Taxol（ng/ml）Inhibitionrat（%）IC5010072.153558.589ng/ml1065.56062127.304270.110.73520.018.913468抑制率计算：Inhibitionrate（%）=（ODDMSO对照组-OD药物处理组）/ODDMSO对照组×100IC50计算（SPSS）：在变量表中定义变量名为“剂量”、“抑制率”、“总值”，在数据表中依次输入各变量的值，“总值”多设为100％。点击“Analysis—regression—probit”，将“剂量”选入“协变量”栏，“抑制率”选入“响应频率”栏，“总值”选入“观测值汇总”栏中，在“转换”栏中选择“对数底为10”，在“模型”栏中选择“Probit”概率单位模型，在“选项”栏中选择“从数据中计算”，其他保持默认选项，然后单击“OK”。效应概率水平为0.50时的剂量值即为IC50。