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CELLSEARCH®CirculatingTumorCellTest循环肿瘤细胞检测技术及临床应用PMcode:0513OCD3119主要内容CellSearch循环肿瘤细胞检测技术介绍CellSearch循环肿瘤细胞检测技术临床应用2循环肿瘤细胞CirculatingTumorCell（CTC）CTC是指进入外周血循环的肿瘤细胞。只有极少数具有高度活力、高度转移潜能的肿瘤细胞在循环系统中存活下来，相互聚集形成微小癌栓，并在一定条件下发展为转移灶。——“ACaseofCancerinwhichCellsSimilartothoseintheTumorswereseeninBloodafterDeath”TRAshworthAustralianMedicalJournal,14:146.1869“Thefactofcellsidenticalwiththoseofthecanceritselfbeingseeninthebloodmaytendtothrowsomelightuponthemodeoforiginofmultipletumorsexistinginthesameperson.”T.Ashworth,186934CellSearchCTC检测技术发展历程MBCTrialJune2001FDA501kJanuary2004NEJMAugust2004CommercializationDecember2004CellSearchSystemDevelopment1999KeepMovingChinaMBCTrialJanuary2010CFDAApproveAugust2012AnnalsofOncologyJuly2013CellSearch循环肿瘤细胞检测技术•全球领先的自动化捕获计数循环肿瘤细胞的检测技术‒150+专利•全球唯一一个获批的循环肿瘤细胞检测产品‒2004年获得FDA批准，2012年获得CFDA批准•检测循环肿瘤细胞的行业标准‒100多个临床研用究应用了CellSearch检测技术‒全美Top25的国家癌症中心使用CellSearch产品‒中国已有25家以上的肿瘤医院及综合医院使用CellSearch产品5PrixGalien2009CellSearch相关奖项及文献发表6ClevelandClinicTop10MedicalInnovationsfor2009CELLSEARCH®技术原理CellSearch检测技术的基本原理•检测外周血循环中的上皮源性的循环肿瘤细胞8循环肿瘤细胞表型CD45-,EpCAM+andCytokeratins8,18+,and/or19+4微米完整的细胞–上皮源性细胞碎片也会被捕获到，但并不会被计数使用纳米磁流体及免疫荧光技术进行捕获和鉴定9EpCAM–上皮细胞粘附分子APC–异藻蓝蛋白荧光染料CK–细胞角蛋白PE–藻红蛋白荧光染料DAPI–4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DNA荧光染料）示意图：上皮细胞白细胞抗EpCAM磁流体EpCAM抗原CD45抗原CK抗原抗CD45-APC染料抗CK-PE染料荧光染料CellSearch自动样本处理过程10CellSave管采血7.5ml+6.5ml缓冲液吸取上清，加入缓冲液，加入磁颗粒磁场孵育离心靶细胞白细胞移除磁场，重新悬浮靶细胞吸出液体及未结合细胞加入透化剂及染色试剂转移至磁孵育槽操作者CellSearch自动化样本处理过程自动化结果分析•系统自动将被捕获的、经过染色的细胞置入MagNest装置的样本盒中•由于MagNest的磁场作用，捕获的靶细胞将移动至样本盒的分析表面，形成单细胞层•系统自动分析后得到结果并由操作人员进行最终判读11循环肿瘤细胞检测结果12CTCsCK-PE+DAPI+CD45-APC-LeukocyteCK-PE-DAPI+CD45-APC+CELLSEARCH®系统CellSearch系统第一个标准化，自动化的循环肿瘤细胞捕获计数平台14CELLTRACKS®AUTOPREP®SystemCELLTRACKSANALYZERII®CellSaveTubesReagentkit储存管•10ml真空采血管，含有EDTA和专利的细胞防腐剂•保护循环肿瘤细胞（CTC）的形态和抗原表达•样本在室温（15~30℃）条件下储存的稳定时间可达96小时，便于样本的保存和运输15CellTracksAutoPrep自动样本处理系统•完全自动化的样本制备装置，用于对循环肿瘤细胞进行捕获和染色•可对8个样本进行批处理，允许完全无人值守运行，每批处理时间为4h，单个样本处理时间为2.5h•通过完整的过程控制，可对循环肿瘤细胞样本进行标准化的分析前制备16CellTracksAnalyzerII结果分析系统•对经过免疫磁颗粒捕获、荧光染料标记的循环肿瘤细胞进行计数，每个样本分析时间为15分钟•使用4个滤光片对样本盒的整个表面进行扫描，并对4个滤光片的图像进行整理•当形态特点和染色类型与上皮细胞相符时，用户即可将相关细胞归类为循环肿瘤细胞。17CellSearch循环上皮细胞检测试剂盒•CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒包含循环肿瘤细胞的捕获试剂和免疫荧光染色剂•试剂盒还包含CellTracks®样本盒，用于在CellTracks®II分析仪上进行循环肿瘤细胞分析及用于样本制备的锥形管•试剂盒可进行16次检测18试剂盒（商品名：CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒）CELLSEARCH®临床应用CellSearch预期用途•用于体外诊断IVD•CellSearch循环上皮细胞检测试剂盒（免疫磁颗粒细胞捕获+荧光染色法）（商品名称：CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒）用于全血中上皮源性（CD45-，EpCAM+，以及细胞角蛋白8,18+及/或19+）的循环肿瘤细胞（CTC）的计数检测。由CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒检测到外周血液中的CTC与接受治疗的转移性乳腺癌患者的无进展生存期及总生存期降低相关，本检测是对转移性乳腺癌患者进行监测的一项工具，CTC的系列检测应当与转移性乳腺癌的其它临床方法联合使用，在病程期间任何时间对CTC计数都可评价患者的预后，对已经其它检测方法（组织学或影像学等）确诊的转移性乳腺癌患者的无进展生存期与总生存期的预测20CellSearchCTC检测结果Cutoff值•基线CTC检测结果大于等于5个细胞的转移性乳腺癌病人预后不好，总生存期和无进展生存期较短•基线CTC检测结果小于5个细胞的转移性乳腺癌病人预后良好，总生存期和无进展生存期较长•此Cutoff值基于临床研究实验得出，并已被FDA和CFDA批准用于临床实践21Unfavorable≥5CTCs/7.5mlFavorable0-4CTCs/7.5ml——CristofanilliM.etalN.Engl.J.Med2004;35:781-91CellSearchCTC检测结果分布•数据来自CellSearch临床注册研究•177例MBC患者检出大于等于5比例为49%•345例良性乳腺疾病及正常对照组检出大于等于5比例为0——CristofanilliM.etalN.Engl.J.Med2004;35:781-9122Table1.PrevalenceofCirculatingTumorCellsatBaseline.*VariableNumberofSubjectsNumberofCirculatingTumorCells≥2≥4≥5≥6≥10≥50≥100≥1000PercentageofsubjectsControlsubjectsNormal14510000000Benignbreastconditionsofotherconditions20010000000Allsubjectswithmetastaticbreastcancer177615349473821163CellSearchCTC检测的临床价值•CellSearchCTC检测作为一个先进的血液学检查，已经被证实具有重要的临床应用价值◘在乳腺癌患者患病期间任何时期，CTC检测结果均为独立的预后因子，可以预测病人的总生存期和无进展生存期◘CTC在治疗前后检测结果的变化预示病人预后的改变，为临床疗效监测提供信息。◘CTC结合传统治疗监测手段（例：影像学方法）可以提高疗效监测的准确性，或可能更早提示治疗效果。23No.atRisk5CTC90909087858080776759503928151042≥5CTC87837368625752494033241892210FFullSetofDataWeekfromBaseline5CTC18.0mo~10.0mo≥5CTCProbabilityofOverallSurvival(%)051015202530354045505560657075800102030405060708090100治疗基线CTC检测结果的预后作用24基线CTC/7.5mlN（%）中位OS（月）590(51)18587(49)10.1≥5vs.5:HR=4.39，P0.001•PFS分析具有类似的结果——CristofanilliM.etalN.Engl.J.Med2004;35:781-91治疗前基线CTC检测结果对于OS，PFS均具有预后作用治疗3~4周CTC检测结果的预后作用25——CristofanilliM.etalN.Engl.J.Med2004;35:781-91No.atRisk5CTC114114112111108103102998675624832131042≥5CTC494945393531272418149633210治疗后3~4周CTC/7.5mlN（%）中位OS（月）5114(70)18549(30)8.2≥5vs.5:HR=5.54，P0.001•PFS分析具有类似的结果治疗3~4周CTC检测结果对于OS，PFS均具有预后作用FFullSetofDataWeekfromBaseline5CTC18.0mo~8.0mo≥5CTCProbabilityofOverallSurvival(%)051015202530354045505560657075800102030405060708090100CTC检测结果在新诊断病人中的预后作用26CTC在新诊断病人中治疗前后提供显著的预后信息一线化疗前，即基线一线化疗一个疗程后，即3～4周后——Circulatingtumorcells:anovelprognosticfactorfornewlydiagnosedmetastaticbreastcancer.JClinOncol.2005Mar1;23(7):1420-30.PFSTimeFromBaselineBloodDraw(weeks)5CTC(n=40)-9.5months~4.9months≥5CTC(n=43)ProbabilityofProgression-FreeSurvival(%)051015202530354045505560657075801020304050607080901004.9m9.5mOSTimeFromBaselineBloodDraw(weeks)5CTC(n=40)18months~14.2months≥5CTC(n=43)ProbabilityofSurvival(%)0510152025303540455055606570758010203040506070809010014.2m18mOSTimeFromBaselineBloodDraw(weeks)5CTC(n=45)-9.5months-2.1months≥5CTC(n=15)Probabil