CGMMV病毒提纯及多抗制备

整理文档很辛苦,赏杯茶钱您下走!

免费阅读已结束,点击下载阅读编辑剩下 ...

阅读已结束,您可以下载文档离线阅读编辑

资源描述

CGMMV病毒提纯:1)取新鲜或-80℃冷冻的植物组织按1:2(W/V)比例加入0.1M,pH7.2磷酸缓冲液(PBS),并加入至终浓度为0.1%的巯基乙醇,匀浆后双层纱布过滤;2)滤液以1:1体积加入CHCl3乳化,4℃搅拌2h,6000rpm离心15min;3)取上清液,加入10%PEG(MW6000)及1%NaCl,4℃搅拌2h,30000rpm离心2h,弃上清;4)沉淀悬浮于0.1倍体积0.01M,pH7.2磷酸缓冲液(内含1%TritonX-100),再经6000rpm离心15min,取上清;5)重复上步一次;6)合并上述两步的上清,加至20%蔗糖垫,90000g超速离心,90min;7)弃上清;8)沉淀加入2mLPBS(pH8.0)溶解,10000g离心5min,上清即为病毒粒子粗提液;9)病毒提纯液经2%磷钨酸(pH6.7)染色后置电镜下观察粒子形态。CGMMV多克隆抗体的制备:400μgCGMMV提纯病毒与弗式完全佐剂等体积充分乳化后,从背部脊柱两侧多点皮下注射免疫新西兰白兔。3周后将300μg提纯病毒与不完全弗式佐剂等体积乳化后从背部脊柱两侧皮下多点免疫注射。之后每隔2周大腿肌注加强免疫1次,剂量与第2次免疫一样。每次免疫7d后取少量血清用间接ELISA检测抗体效价,当效价达到1:100000以上时采血并分离血清。

1 / 1
下载文档,编辑使用

©2015-2020 m.777doc.com 三七文档.

备案号:鲁ICP备2024069028号-1 客服联系 QQ:2149211541

×
保存成功