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知识结构二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测一、固定化技术基础知识一、固定化技术基础知识固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括吸附法、包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）。包埋法化学结合法物理吸附法细胞多采用包埋法固定酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化反应方式不管是固相柱还是固相悬浮体，回收后，在一定条件下贮存，还可以利用。1.使底物溶液通过装有固相酶的柱，柱留出液即为酶催化的产物。2.有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中，一定时间后溶液即成酶催化的产物。实验原理α-淀粉酶β-淀粉酶糖化淀粉酶淀粉糊精麦芽糖葡萄糖二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测运用吸附法将α-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的α-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈红色，表明水解产物糊精生产。固定化装置—层析柱实验材料制备5mmol/LKI-I2溶液称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。a-淀粉酶的固定化在烧杯中将5mga-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入5g石英砂，不时搅拌，30分钟后装入层析柱中。用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为1ml/min。可溶性淀粉溶液取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。实验步骤2.试验后，用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在4℃冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL/min的流速过柱。在流出5mL后接收2mL流出液，加入1-2滴KI-I2溶液，观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。HST层析住实验结果12341、2mL水+1~2滴KI-I2溶液2、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液3、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液4、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍实验注意事项a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴（6=0.3mL/50uL）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。b.显色。在流出5mL后接取2mL过滤液，然后向试管中加入1-2滴KI-I2溶液。切记，KI-I2溶液不要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。