Cytodex+1微载体使用前预处理实验方案

Cytodex1微载体使用前预处理实验方案一、实验目的：对Cytodex1微载体进行实验前的预理，以达到细胞培养的要求。二、实验仪器和材料:高压蒸汽灭菌锅，电子天平，玻璃瓶，血清瓶，Cytodex1微载体，磷酸氢二钠（Na2HPO4），一水磷酸二氢钠（NaH2PO4••H2O），氯化钠，硅化剂。三、试剂配置：PH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）:称取NaH2PO4••H2O3.86g，Na2HPO410.22g，NaCl85g，现少量水使之溶解，最后加水定容至10L。四、实验步骤：1、水化1）、将干的15gCytodex1(3g/L)微载体加入到合适的硅化过的玻璃瓶中。2）、用1500ml无Ca2+,Mg2+的PBS(50-100mL/gCytodex)在室温下至少水合3小时并不时温和地搅拌。水合过程可以在更高的温度下如37℃加速。3）、将上清倾去，然后加入750ml新鲜的无Ca2+,Mg2+的PBS(30-50mL/gCytodex)，温和搅拌几分钟洗涤一次，弃去洗涤的PBS，加入750ml新鲜的无Ca2+,Mg2+的PBS(30-50mL/gCytodex)。2、消毒将经水化处理好的微载体溶液进行高压纯水蒸汽灭菌(115℃，15min，15psi)，待用。3、使用之前，先让无菌的微载体沉降，倾去上清，然后用750ml温热的培养基(20-50mL/gCytodex)润洗。这个润洗过程减少了微载体之间和微载体内的PBS对培养基的稀释（当培养体积很小或者所培养细胞的平板效率较低时，此步骤显得尤为重要）。4、让微载体沉降，弃去上清，然后用少量的培养基重悬以后转移至培养容器中。处理微载体时不必要使用血清或者含有血清的培养基来润洗。