dd糖及苷的提取分离

第五节糖及苷的提取分离一、提取单糖、低聚糖及苷类化合物常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得到不同极性的化合物。多糖常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。植物体内苷常与其对应的水解酶共存，所以要采用杀酶保苷的方法。二、分离1.季铵盐沉淀法与酸性多糖形成不溶性沉淀，而使其分离。常用季氨盐有十六烷基三甲胺溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可沉淀分离中性多糖。2.分级沉淀或分级溶解法按比例由小到大的顺序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，反复溶解与沉淀。该方法适合于分离溶解度相差较大的多糖。3.离子交换色谱常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。4.凝胶柱色谱反分子筛原理，按照分子的大小不同进行分离。常用葡聚糖凝胶（sephadexG）5.纤维素柱色谱6.制备性区域电泳第六节糖的核磁共振性质一、糖的1H-NMR性质糖的端基质子信号在δ4.3~6.0，甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右，其余质子信号在δ3.2~4.2之间。根据糖的端基质子信号的个数和化学位移值可推测连有糖的个数、糖的种类及糖与糖、糖与苷元的连接位置。根据甲基质子信号的个数和化学位移值可推测甲基五碳糖的个数、糖的种类及糖与糖、糖与苷元的连接位置。根据端基质子的偶合常数确定苷键构型。当端基质子（C1位质子）与C2位质子均为竖键时，其两面角为180°，偶合常数为6~8Hz；当一个为竖键，一个为横键时，其两面角为60°，偶合常数为2~4Hz。据此可判断吡喃型、C1优势构象糖的苷键构型。HOORHOHC3°180OROHHOHC3°60H2OHOHORHOHHOHOCHOORHOHC3°180HOOROHHC3°60H2OHOORHOHHHOHOCOORHHOHHOHOCH2OH二、糖的13C-NMR性质（一）化学位移及偶合常数CH2OHδ62左右，CH3δ18左右，端基碳δ95~105。OOHOHOHOCH2OHH123456OOHOHOHCH3OH123456β-D和α-L型苷键端基碳化学位移大于100，β-L和α-D型则小于100。吡喃糖中端基质子处于横键时。其端基碳氢的偶合常数为170~175Hz；处于竖键时则为160~165Hz。（二）苷化位移糖与苷元成苷后，苷元的α-C、β-C和糖的端基的化学位移值均发生了改变，称为苷化位移。1.伯醇苷成苷后，苷元α-C向低场位移约8个化学位移单位，β-C向高场位移约4个化学位移单位，糖的端基碳向高场位移1~2个化学位移单位（与甲苷比）。OOCH2CH2CH3αβC1+1~2+8-42.环醇苷a.两个β-C均为仲碳的苷前手性碳：对称碳原子增加一个取代基后，变为非对称碳，称之为~。规定：在环醇的仲碳的e键上增加一个基团，并将该基团的优先序列定为第三，按R,S规则命名，当为R构型时称该碳为pro-R碳，反之为pro-S碳。成苷后α-C向低场位移7个单位，端基碳向高场位移约1~4个单位（与甲苷比）,β-C的前手性构型与端基碳构型相同时，向高场位移约2个单位；不同时，向高场位移约4个单位。b.一个β-C为仲碳，另一个为叔碳或季碳的苷α-C与糖的端基碳构型相同时，α-C向低场位移约5个单位；不同时α-C向低场位移约10个单位。β-C和端基碳的变化较复杂。OORPro-RPro-S3.叔醇苷成苷后α-C向低场位移约7个单位；β-C向高场位移约5个单位；端基碳向高场位移约7个单位。4.酯苷和酚苷α-C向高场位移，区别于上述苷。第六节糖链的结构测定一、纯度测定（多糖）多糖纯品实质上是指一定分子量范围的均一组分。测定方法：超离心法、高压电泳法、凝胶柱色谱法、旋光测定法、官能团摩尔比恒定法等。二、分子量测定单糖、低聚糖及其苷的分子量测定主要采用质谱法。其中电喷雾质谱（ESIMS）不仅能测定小分子化合物的分子量，而且也可测定多糖等高分子化合物的分子量。多糖的分子量只是一种统计平均值。应用甲基化法和过碘酸氧化法进行的末端分析法也常用来推算多糖的分子量。三、单糖的鉴定一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，经显色后用薄层扫描法求得各种糖的分子比。也可用GLC或HPLC对单糖定性定量。GLC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作为对照品。四、糖的连接位置的测定1.甲基化法：将被测物全甲基化，水解苷键，用GC定性定量分析。2.1H-NMR法：根据乙酰化后的质子化学位移判断糖的连接位点。3.13C-NMR法：通过苷化位移，推断糖的连接位点。五、糖链连接顺序的确定1.部分水解法：将糖链水解成较小片段（低聚糖）然后分析片段确定连接顺序。2.质谱法3.NMR和2D-NMR法。六、苷键构型及氧环的确定1.苷键构型确定方法包括：1H-NMR法、酶解法、分子旋光差法等。2.氧环测定包括：13C-NMR法、红外法、甲醇解法、Smith降解法等。第一节单糖的立体化学，掌握单糖的结构式的三种表示方法：Fischer、Haworth、优势构象式，以及Fischer和Haworth之间的转变关系。掌握糖的绝对构型D、L，端基差向异构α、β的判断方法，以及糖的优势构象式的表示方法。小结：第二节糖和苷的分类重点掌握单糖、低聚糖、多糖的主要类型及结构特点，在苷的分类当中，同学们要掌握按照苷键的分类方法，以及各种类型苷的结构特点及主要代表化合物。第三节糖的化学性质重点掌握Molish反应、过碘酸氧化反应，以及羟基的甲醚化、乙酰化反应，以及这些反应在分离、鉴定中的应用。第四节苷键的裂解重点掌握影响酸催化水解的因素，掌握乙酰解及过碘酸裂解的方式和应用。第五节糖及苷的提取分离重点掌握糖的一般提取方法，以及凝胶柱色谱分离糖的方法。第六节糖的核磁共振性质重点掌握各种糖的端基质子的化学位移特点、以及不同构型2位质子和端基质子的偶合常数特点，掌握不同构型糖的端基糖的化学位移，以及苷化位移在糖和苷的结构鉴定中的应用。第七节糖链的结构测定熟悉质谱法测定单糖和低聚糖分子量的一般方法；PC,TLC,GC在单糖鉴定中的应用；熟悉单糖连接顺序和连接位置测定所采用的一般方法。