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中山海济文件编号：STP-VP-Page1of41.目的：DEAE/phenyl是INDEX层析系统的主要生产部件，为能更好确定DEAE/phenyl的吸附量与提高产品质量，所以对DEAE/pheny胶的吸附性能进行确认。2.范围：适用于DEAESepharose/phenylSepharose。3.验证小组成员及职责：验证小组成员部门职责备注4．概述：当DEAE/phenyl胶内蛋白的吸附量接近饱和时，蛋白开始从胶中流出，出口浓度逐渐上升，最后达到进样的蛋白浓度，即吸附达到完全饱和。验证依据《DEAESepharose文件编号:STP-VP-DEAE/phenyl吸附量验证方案复制号：起草人：审核人：批准人：起草日期：审核日期：批准日期：颁发部门：质量部生效日期：分发至：质量部□生产部□人事行政部□销售部□中山海济文件编号：STP-VP-Page2of4F.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程》、《PhenylSepharoseF.F疏水柱层析标准操作规程》。5.性能验证5.1DEAE吸附量验证5.1.1处理与平衡按《DEAESepharoseF.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程》操作。5.1.2上样按以下方案操作方案（1）上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在35-37mg/ml，线性流速：80cm/h。方案（2）上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在37-40mg/ml，线性流速：80cm/h。方案（3）上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在40-43mg/ml，线性流速：80cm/h。方案（4）上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在43-45mg/ml，线性流速：80cm/h。方案（5）上样电导小于0.2×103μs/cm,上样量在45-50mg/ml，线性流速：80cm/h。从开始上样到结束用玻璃瓶把流出液接住并编上号，再测定浓度。5.1.3清洗以80cm/h的线性流速冲洗2-4倍柱床体积的10mMT.EpH7.2，使紫外检测仪示数冲到基线。从开始清洗到结束用玻璃瓶把流出液接住并编上号，再测定浓度。5.1.4洗脱用0.02MNaCl-10mMT.EpH7.2洗脱2-3倍柱床体积，线性流速：80cm/h。用0.04MNaCl-10mMT.EpH7.2洗脱4-5倍柱床体积，线性流速：80cm/h。用0.1MNaCl-10mMT.EpH7.2洗脱3-4倍柱床体积，线性流速：80cm/h。5.1.5收集及取样按《中间产品收集和取样标准操作规程》操作。按《SDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程》与《相关蛋白含量测定标准操作规程》检测电泳（上样液一起做）与相关蛋白含量。5.1.6浓度测定中山海济文件编号：STP-VP-Page3of4按《中间产品浓度测定标准操作规程》操作。5.1.7层析柱处理按《DEAESepharoseF.F柱层析（Ⅰ）标准操作规程》操作。附数据分析表表1方案编号方案1方案2方案3方案4方案5样品名称上样液上样流穿液清洗流穿液上样液上样流穿液清洗流穿液上样液上样流穿液清洗流穿液上样液上样流穿液清洗流穿液上样液上样流穿液清洗流穿液浓度蛋白有无结论：表2电泳图谱粘贴处中山海济文件编号：STP-VP-Page4of4注：比较方法1.下样液与上样液比较（初杂程度）2.每个方案的下样液进行比较（除杂效果）结论：表3方案样品名称相关蛋白含量备注1DEAE（1）收集液2DEAE（1）收集液3DEAE（1）收集液4DEAE（1）收集液5DEAE（1）收集液结论：