DNA倍体

DNA倍体定量分析在宫颈癌早期诊断中的应用XXXXX:10055632355XXXX:XXXXX@.COM子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一全球范围内，每年约有20多万妇女死于子宫颈癌，是仅次于乳腺癌位居第二的恶性肿瘤。而在发展中国家，子宫颈癌占恶性肿瘤发病率的第一位。我国目前约有宫颈癌患者40万人，每年新发现病例为13.51万，农村多于城市，约有8万人死于宫颈癌。宫颈癌是由人类乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）特别是高危型病毒引起，其发展是一个缓慢的过程，一般要通过宫颈癌前疾病到原位癌（0期），发展到浸润癌（Ⅰ-Ⅳ期）。从宫颈癌前疾病发展到浸润癌一般需要5-10年的时间，期间宫颈细微变化都可以通过细胞学方法检测出来。宫颈癌是怎么发生的？宫颈癌是感染疾病，可预防的的疾病，也是世界目前唯一可以早期发现并治愈的癌症！防治的关键在于早期筛查。1000期≥90Ⅰ期治愈率（%）分期脱落细胞学（exfoliativecytology）1928年希腊医生PapanicolaouGN首次发表了用阴道抺片诊断宫颈癌的文章。1943年希腊医生PapanicolaouGN提出巴氏五分级分类法。“三阶梯”检查宫颈细胞学阴道镜检查病理组织检查复层鳞状上皮（stratifiedepithelium）内底层细胞圆形或卵圆形，Ф12～16mm。核居中，染色质细而均匀，胞质为深蓝色，核浆比约1：0.5~1外底层细胞圆形或椭圆形，Ф15～25mm。核圆形，居中位，染色质疏松细颗粒状。胞质较内底层淡染呈浅蓝色。核浆比约1：2中层细胞菱形或舟状，Ф30～60mm。核居中，Ф5～8mm。染色质疏松，胞质明如婵翼样，浅蓝色或绿色。核浆比约1：5~8角化前表层细胞多边形或多角形，Ф40～60mm。核Ф5～8mm，核染质较疏松，胞质蓝色或淡红色。角化表层细胞多边形或多角形，Ф40～60mm。核固缩，有时甚至消失，胞质红色或橘红色。宫颈脱落细胞形态学良性反应性细胞改变炎性反应性细胞：上皮胞核增大为正常中层鳞状上皮的1～2.5倍，柱状上皮胞核增大1～4倍。核轻度深染，核染色质细颗粒状均匀分布，胞质丰富，可见空泡和核周晕萎缩反应性细胞：核增大而不深染，裸核，核碎裂常见。可见大量外底层细胞，炎性渗出物，嗜蓝颗粒状背景，但无癌细胞或变性的癌细胞。细胞排列较规则宫内节育器的反应性细胞：柱状上皮细胞呈小团，核质比增高。胞质量不等，呈印式样外观，核染色质粗其他各种类型感染：滴虫，霉菌，单纯疱疹，衣原体以及放疗等Ⅰ级：未见异常细胞Ⅱ级：发现异常细胞，但均为良性Ⅲ级：发现可疑恶性细胞性质不明细胞细胞形态明显异常，难于肯定其良、恶性，需要近期复查核实未分化或退化的可疑恶性细胞与恶性裸核Ⅳ级：发现待证实的癌细胞（高度可疑的恶性细胞），具有恶性特征但不够典型;或更典型但数目太少，需要复核，例如高度可疑的未分化或退化癌细胞，或少数低分化癌细胞Ⅴ级：发现癌细胞，其恶性特征明显或数目较多，可作互相比较以确定为恶性者，例如高分化的鳞癌或腺癌细胞;成群未分化或低分化癌细胞巴氏结果判断正常细胞学涂片良性细胞学改变：包括各类微生物感染、炎症、宫内节育器及放疗后的反应性和修复性改变上皮细胞异常TBS结果判断ASCUS：不能明确诊断的非典型鳞状上皮细胞ASC-US（不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞）ASC-H（非典型鳞状上皮细胞，不除外高级别鳞状上皮内病变）LSIL（低度鳞状上皮内病变）：包括HPV感染的细胞改变或轻度不典型增生/CINⅠHSIL（高级别鳞状上皮内病变）：包括中、重度不典型增生及原位癌/CINⅡ、Ⅲ鳞癌（SCC）：包括非角化型鳞状细胞癌，角化型鳞状细胞癌，小细胞型鳞状细胞癌上皮细胞异常宫颈癌及癌前病变的组织结构示意图·无临床症状·肿瘤早期检测技术可诊断·治疗费用少，可痊愈！宫颈细胞病理学分类和宫颈上皮变化宫颈癌发病原因行为危险因素生物学因素遗传易感性HowinducesHPVcervicaldysplasiaandcancer?HPVinvadesbasalcells&dysregulatesmetabolism.DysplasticcellsappearNormally,onlyparabasalcellsproliferateDysplasticcellsmoveupandreachsurfaceAfter?2-4weeksEpithelialcellsmaturate&movein7-14daystosurfaceHPVHPVinfectionviawoundsinepitheliumCIN1CIN2CIN3JanBaaketal.早期诊断的有利条件宫颈有利的解剖学基础条件一条件二前驱病变阶段长，约10年易暴露、易观察易触诊无创性取材宫颈癌普查细胞学技术取材制片诊断阅片常规方法+Thinpr6+液基薄层+兰丁麦克奥迪DNA倍体定量分析原理DNA倍体定量分析原理癌细胞癌变过程DNA含量改变在前，形态改变在后宫颈癌染色体的改变正常细胞核内有23对染色体，又称为DNA二倍体（2c细胞）。有固定数量不变的DNA含量（7.6pg），其DNA指数为1。DNA定量细胞学常用c（content）作为单位来衡量DNA含量。正常G0、G1细胞DNA含量的一半为1个c。0.66水母5.9-13.005.3-7.236.502.885.4-6.14.7-55.9-10.57.6DNA（含量）pg大鼠兔狗鸡羊猪牛人物种正常细胞(即DNA二倍体细胞，2C细胞)及肿瘤细胞在生长增殖时,细胞核内DNA结构及含量都会发生变化。正常细胞增殖周期DNA指数的改变在1-2之间。而肿瘤细胞常≥2.5。通过对细胞核内DNA含量的测定及特征的分析能了解正常细胞周期变化及发现恶性增殖的肿瘤细胞。正常细胞核内均有23对染色体，DNA指数（DI）为1癌变细胞核内染色体数量发生异常改变DNA指数（DI）多大于2.5常规细胞学诊断方法与细胞DNA定量分析方法敏感性和特异性的比较孙小蓉，李玉兰，车东媛等，JDiagPathol,2005(12):12-6细胞学筛查制片技术诊断敏感性比较巴氏染色显微镜TBS细胞学诊断DNA染色全自动细胞图象分析仪定量细胞学诊断特有的宫颈普查诊断程序病理诊断常规细胞学DNA定量细胞学(DNA倍体5C的细胞数)ASCUSLSILHSIL癌１～２≥3CIN1CIN2CIN3CIN4癌不同DNA指数（DI）在宫颈癌普查中的临床意义综合诊断意见及临床建议DNA图像分析仪与流式细胞仪的比较DNA定量技术在宫颈癌普查中的优势细胞DNA定量分析方法用于表面刮取标本涂片：例如阴道、宫颈、口腔、肛管、鼻咽部、眼结膜、体表病灶溃面等处。分泌物或排泄物涂片：例如痰液、尿液、前列腺液、肛肠脓血排泄物、肿瘤之漏管分泌物、乳头溢液等。体表、体部和体腔内和液体或肿瘤实体的针吸穿刺检查：例如胸腔、腹腔、四肢、躯干、肺、肝脾、肾等器官。光纤内窥镜直视下的刷片和组织印片：例如食管、胃、支气管、泌尿道、结肠、直肠等。宫颈刷取材注意事项取材前阴道、宫颈不得使用任何润滑剂妊娠期妇女不宜使用宫颈刷如发现可疑宫颈癌的临床体征,应迅速活检(宫颈细胞学检查与活检同步)月经期不得使用宫颈刷病人在受检前48小时,不得作阴道冲洗及任何阴道治疗病人在受检前48小时,不得使用避孕剂急性宫颈炎及各种阴道炎的急性感染期,经治疗后再作宫颈细胞学检查取材后若发生活动性渗血，应压迫止血人流后月经未来潮前，不做检查注意：患者刮片前要禁用阴道外用及激素类药物，以防细胞形态的改变，给诊断带来困难宫颈标本的收集管理标本管请放置于阴凉处保存,并注明识别标志(姓名,编号等)当室温超过30摄氏度或因故不能及时送检时,请放入冰箱内(4℃)保存,一般不超过10天请将标本管与申请单放在一起一并交往指定地点取报告时间及方式与有关专业人员联系取材后的标本保存条件存放时间：十天内存放温度：４℃或室温（＜３０℃）存放方式：标本管直立临床常见的几个问题标本不合格,细胞数量不够需重复取材出现DNA异倍体细胞时，活检后病理未发现异常39为什么细胞学阳性，病理活检阴性？可能与下列因素有关：病理活检点位不够或未取到发病部位切片质量不好医生读片误差DNA倍体应用的局限性其他因素引起的非整倍体细胞：某些病毒如HPV，HIV感染，放射治疗，激素治疗，VitB12缺乏等整倍体肿瘤细胞：白血病细胞，鼻咽癌细胞DNA-ICM硬件和软件：重叠细胞