搜索
1DNA的粗提取和鉴定一、DNA的粗提取的原理思考1：DNA存在于真核生物细胞的哪些部位？思考2：提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性质：①DNA和蛋白质的溶解性、对酶、高温和洗涤剂的耐受性在NaCl溶液中的溶解度对蛋白酶的耐受性在酒精中的溶解度对高温的耐受性对洗涤剂的耐受性DNA画出曲线图：蛋白质2、分析教材中DNA粗提取时去除滤液中的杂质的方案一、二、三的原理。方案一：方案二：方案三：二、DNA粗提取的主要步骤：1、材料选择：适于作实验材的材料：选用的生物材料；如鸡（红）血，其适宜作为实验材料的原因：①鸡血（红）细胞核的DNA含量丰富，材料易得；②鸡血细胞极易吸水胀破。一般用鸡血细胞液，而不用鸡全血，为什么？能否用哺乳动物红细胞呢？2、主要实验步骤（以鸡血红细胞为例）：①破碎细胞，释放DNA（核物质）方法：将5～10mL鸡血细胞液加入20mL中；用玻棒同方向搅拌5min；用3～4纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；收集。目的：破坏细胞，释放核物质注意：搅拌不能用力过大，以防止打碎DNA分子；DNA存在：多数与蛋白质结合，存在于滤液中②溶解细胞核内DNA方法：向滤液中加入2倍体积的mol/LNaCl溶液，搅拌1min；过滤获取目的：使与DNA结合的解聚，释放出；DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意：按同一方向搅拌2思考：1.上述步骤都有搅拌的操作，搅拌操作有什么要求？为什么要这样做？2.上述步骤都有过滤，过滤所用的材料是什么？每次过滤后选取滤液还是粘稠物？3．本实验中两次加入蒸馏水的目的各是什么？第一次：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，目的：第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸馏水，目的：拓展：1、以菜花为材料进行实验时，如何获得核物质？取材、剪碎→加入洗涤剂、食盐→研磨、过滤▲加洗涤剂的目的：▲加入食盐的目的：2、探究不同方法、洗涤剂、食盐用量对DNA粗提取量的影响（说说实验思路）三、DNA的鉴定：1、DNA鉴定的原理：在的条件下,DNA遇会被染成。2、画出装置图，并标出每支试管中所加入的物质种类、总量、及出现的颜色。③DNA析出方法：沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸馏水，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA析出，直到；可以在玻棒上收集到黏稠物（或过滤或离心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液浓度达到mol/L左右，使DNA析出注意：加入的蒸馏水不能过多，使NaCl溶液浓度过低，DNA又会黏稠物：丝状、略带黄色（DNA分子上附着有少量蛋白质）④DNA的初步纯化方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向搅拌3min，使DNA充分溶解；过滤，收集滤液；向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷冻的95%乙醇，并用玻棒按同一方向缓慢、均匀地搅拌，在玻棒上收集白色丝状物（DNA）原理：DNA不溶于中，而蛋白质能溶于中。33、在沸水浴中加热的目的是什么？同时说明DNA对高温的耐受性如何？为何要待试管冷却后比较颜色变化？4、二苯胺试剂的使用与斐林试剂的使用有一些相似之处，试举例说明。四、实验结果分析与评价1、实验结果评价：是否提取到DNA？①观察提取的DNA颜色：如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；②二苯胺鉴定：出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。2、粗提取得到的丝状物为什么略带黄色？实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。3、影响丝状物总量的因素有哪些？实验材料种类和数量、溶解核DNA时的NaCl溶液浓度、实验方法、搅拌方法（搅拌不当可能破坏DNA）五、案例：（快速阅读、理解步骤原理）以菜花为实验材料进行DNA的粗提取【实验材料准备】将新鲜菜花和体积分数为95％的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24h【提取DNA的具体步骤】1、取材称取30g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。动作要轻缓、．．．．．．柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．教材中建议采用洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，使植物细胞膜破碎，释放DNA。学生可以设置对照实验，比较哪一种方法可以提取到纯度更高的DNA。一般实验室提取高纯度的DNA都采用一种阳离子去污剂──十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿—异丙醇混合液（体积比为24∶1）抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNA。3、过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000r/min的转速，离心2～5min，取上清液放入烧杯中)。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。4、沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。六、训练题：1．在DNA粗提取的过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是A．稀释血液；冲洗样品B．使血细胞破裂；降低氯化钠的浓度C．使血细胞破裂；增大DNA的溶解度D．使血细胞破裂；冲洗样品2．NaCl的物质量为多少mol/L时，DNA的溶解度最小A．0.12B．0.13C．0.14D．0.153．在提取的细胞核物质的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是4A．溶解杂质B．溶解蛋白质C．析出DNAD．溶解DNA4．提取含杂质较少的DNA所用的溶液A．NaCl溶液B．冷却90%的酒精C．加热95%的酒精D．冷却95%的酒精5．DNA遇二苯胺（沸水浴）时，会染成A．砖红色B．红色C．紫色D．蓝色6．破译生物基因组DNA的遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核DNA。下列不适宜作为DNA提取的实验材料是A．鸡血细胞B．蛙的红细胞C．人的成熟红细胞D．菜花7.下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，错误的是8．（多选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述．正确的是试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应9.在利用猕猴桃进行“DNA粗提取与鉴定”实验中，相关操作正确的是A．直接向剪碎的猕猴桃果肉组织中加入蒸馏水并搅拌，以释放核DNAB．向猕猴桃果肉研磨液中加入适量的蒸馏水，以降低DNA酶活性C．将猕猴桃果肉研磨液迅速加热到100℃，再冷却后过滤，可以获得DNA粗提物D．向溶有粗提物的NaCl溶液中加入冷却的体积分数为95%的酒精，可以获得较纯净的DNA10．（多选）下列关于DNA粗提取与鉴定的说法不正确．．．的是A．洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B．在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C．常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色D．将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同11.（2010江苏高考）某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于－20℃条件下保存24h。5DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。第二步：先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6只试管，分别加入等量的2mol/LNaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。分析上述实验过程，回答下列问题：（1）该探究性实验课题名称是。（2）第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少。（3）根据实验结果，得出结论并分析。①结论1：与20℃相比，相同实验材料在－20℃条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：。②针对结论1，请提出合理的解释：。（4）氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。12．（2011江苏卷）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C．将丝状物溶解在2mol/NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同13.(2012江苏)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是A．洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B．将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C．常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D．用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少14.（2013江苏）某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，操作错误的是A．加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B．用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNA6C．加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D．加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热15.（2014江苏）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误．．的是A．酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C．向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物D．DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝16.（2015江苏、多选）图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定冶实验中部分操作步骤示意图，下列叙述正确的是A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同B.图1中完成过滤之后保留滤液C.图2中完成过滤之后弃去滤液D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质17．科研人员以金定鸭、长乐灰鹅和象洞鸡的全血为实验材料，比较苯酚一氯仿抽提法（方法A）和盐析法（方法B〉提取血液中DNA的效率。图中EDTA具有破坏细胞膜、抑制DNA酶活性的作用，SDS具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性和抑制DNA酶活性的作用。提取过程和结果如下：7请回答：（1）本实验不选择哺乳动物血液为实验材料的原因是。（2）步骤①中，若只用蛋白酶K消化处理.对实验结果的影响是。（3）步骤③中.破碎细胞常用的方法是。步骤⑤加人蒸馏水的目的是。（4）苯酚和氯仿-异戊醇不溶或微溶于水，密度均大于水，步骤②⑦所依据的原理是。（5）对于长乐灰鵝、象洞鸡来说，较适宜的DNA提取方法分别是、。（6）实验结果表明，不同方法提取的DNA中，影响DNA纯度的主要物质是。相同体积的不同鸟类的血液DNA提取量有明显差异，其原因可能是。17.（1）哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和线粒体（2）DNA的提取量减少，纯度降低（3）血细胞液中加入一定量的蒸馏水，并用玻璃棒搅拌降低NaCl溶液的浓度，析出DNA（4）DNA不溶于苯酚、氯仿-异戊醇，蛋白质等杂质溶于苯酚、氯仿-异戊醇（5）苯酚一氯仿抽提法（方法A）盐析法（方法B〉（6）RNA不同鸟类血液中血细胞的密度不同（或不同鸟类血细胞中DNA含量不同）8