25病毒感染的检查方法和防治原则

第25章病毒感染的检查方法和防治原则第一节病毒感染的检查方法一、标本采集与送检：•供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则–采集时间：发病初期（急性期）采集标本–标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本–标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融–标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制标本中的细菌或真菌等生长繁殖。尽量及时接种，如不能当时接种，标本应保存在-70℃低温冰柜或液氮中。•供血清学检测的标本采集原则–取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观察双份血清抗体效价二、病毒的分离动物接种-动物模型鸡胚培养细胞培养原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法细胞培养(1)原代细胞培养对病毒的敏感性高，可用于生产病毒疫苗，但不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。(2)二倍体细胞培养生长迅速，可传50代保持二倍体染色体数目，可用于制备病毒疫苗，也可用于病毒的实验室诊断工作。(3)传代细胞培养由癌细胞或二倍体细胞突变而来，染色体数为非整数倍，细胞生长迅速，可无限传代，广泛用于病毒的实验室诊断工作。病毒在细胞内增殖的指征：–病毒致细胞病变效应（cytopathogeniceffect,CPE）•病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。•普通光学倒置显微镜可观察正常细胞CPE–红细胞吸附现象•带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后，细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合–病毒干扰现象病毒干扰作用风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)病毒感染性的定量测定–空斑形成单位（plaque-formingunit,PFU）–50%致死量（LD50）或50%组织细胞感染量（TCID50）测定–病毒形态与结构的观察病毒的病原学鉴定三、病毒抗原的直接检出•免疫荧光法•酶联免疫吸附试验四、病毒抗体的直接检出•中和实验•血凝抑制实验•补体结合实验•中和实验–病毒在活体内或细胞培养中被特异性中和抗体作用而失去感染性的一种试验–可检查患者血清中抗体的消长情况，可用来鉴定未知病毒或研究病毒的抗原结构•补体结合实验–常用病毒内部可溶性抗原检测血清中IgM类抗体–用于病毒早期感染的诊断•血凝抑制实验–检测血凝抑制抗体的试验–常用于有血凝素病毒感染的诊断及流行病学调查，也可用于鉴定病毒的型及亚型五、检测病毒核酸•核酸杂交技术•PCR技术•高通量的病毒核酸检测技术形态学检查–光学显微镜检查法–电镜和免疫电镜检查免疫学检查法–检测病毒抗原免疫荧光法、酶联免疫吸附试验–检查病毒特异性IgM–多种病毒抗原抗体检测方法病毒核酸检测技术病毒感染的快速诊断第二节病毒感染的免疫预防•病毒感染的预防更重要!•病毒感染的预防主要是使用疫苗!•疫苗的使用对减少病毒感染和消灭某些病毒性传染病起到关键作用!特异性免疫的获得方式（复习）•主动免疫–自然主动免疫：患病、隐性感染–人工主动免疫：疫苗•被动免疫–自然被动免疫：通过胎盘、初乳–人工被动免疫：抗毒素、丙种球蛋白免疫预防人工主动免疫灭活疫苗：Salk脊髓灰质炎疫苗、狂犬疫苗流行性乙型脑炎疫苗、流感疫苗减毒活疫苗：Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗等特点灭活疫苗减毒活疫苗免疫持续时间较短较长保护力（与自然感染接近程度）较低较高免疫球蛋白产生IgGIgA和IgG粘膜免疫产生低有细胞介导免疫产生低有毒力回复无可能疫苗病毒运输和使用中的扩散无可能受宿主其他病毒干扰无可能室温稳定性高低•人工主动免疫–灭活疫苗和减毒活疫苗我国常用的病毒疫苗疫苗名称疫苗种类（培养细胞种类）脊髓灰质炎疫苗减毒活疫苗（人二倍体）麻疹疫苗减毒活疫苗（鸡胚细胞）流行性腮腺炎疫苗减毒活疫苗（鸡胚细胞）风疹疫苗减毒活疫苗（人二倍体细胞）甲型肝炎疫苗减毒活疫苗（人二倍体细胞）人用狂犬病疫苗灭活疫苗（地鼠肾细胞）乙型脑炎病毒灭活疫苗（地鼠肾细胞）流感病毒灭活疫苗（地鼠肾细胞）乙型肝炎疫苗基因工程疫苗（酵母菌表达）人工被动免疫注射含有抗病毒中和抗体的免疫血清、丙种球蛋白和IL-2，以及与细胞免疫有关的转移因子、干扰素等，使机体立即获得特异性免疫力。•普通免疫球蛋白–用于某些病毒性疾病如免疫缺陷病以及传染性肝炎、麻疹、水痘、腮腺炎、带状疱疹等病毒感染的紧急预防•抗病毒血清•免疫调节剂第三节抗病毒治疗•抑制病毒–选用抑制病毒复制的化学药物或制剂•提高机体免疫–提高机体的免疫应答，促进自身消灭病毒感染的细胞效能•化学治疗基本策略：根据病毒的复制周期设计不同药物–抑制病毒穿入、脱壳及病毒释放金刚烷胺–抑制病毒核酸复制及mRNA合成•核苷类类似物阿昔洛韦（ACV）、叠氮脱氧胸苷（AZT）、拉米呋定、利巴韦林、碘苷•非核苷类似物–抑制病毒蛋白的修饰–鸡尾酒疗法AZT/ZDV•免疫治疗–免疫调节或治疗剂–治疗性疫苗–免疫细胞的修饰与回输•基因治疗