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2015年药典黄曲霉毒素测定法本法系用高效液相色谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速0.8mL/min；采用柱后衍生法检测:光化学衍生法：光化学衍生器（254nm.PriboFast-KRC光化学柱后衍生器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm)，发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/mL、0.3μg/mL、1.0μg/mL、0.3μg/mL、）0.5mL，置10mL于量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。(PribolabSTD#1082-2AFT混合标准品：AFTB1和AFTG1：1.0μg/mL，AFTB2和AFTG2：0.3μg/mL）供试品溶液的制备：1.取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000r/min,普瑞邦高速均质器Pribolab®800S:转速22,000r/min）。Pribolab®高速均质器，新药典新国标通用，针对各类真菌毒素及其他物质萃取时间要求不一的需求，通过特殊结构设计实现在短时间内对真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取，保证检测结果的准确性和精确度。粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。优点：高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及其他物质的萃取过程；转速两档可调，低速12000r/min，高速22000r/min；全金属机身，不锈钢材质，抗有机溶剂腐蚀；可广泛应用于食品检验、科学研究、医学治疗、化工制药等行业；本机构造方面均合于无菌操作的要求；通过CE认证。应用:•适用于真菌毒素检测样品的次级粉碎和快速萃取.2.2500r/min离心5分钟或用槽纹滤纸过滤。3.精密量取上清液15mL，置50mL量瓶中，用PBS溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm,用PriboFast®玻璃微纤维滤纸代替最好，性能较高，效率高）过滤。4.准确移取20.0mL样品提取液，过PriboFast®免疫亲和柱，过柱时流速不能快，流速快的话回收效率差，建议采取重力过柱。PriboFast®免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理,将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。其提纯效率很高,适用于各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。整个纯化过程30分钟左右。同时我们还提供多毒素复合免疫亲和柱。5.用20mL水洗涤，洗涤液弃去。6.为保证洗脱充分，建议以2.0mL色谱甲醇分三步进行洗脱，重力洗脱即可。首先，加入1.0mL甲醇洗脱，当溶剂通过柱子后，孵育30s（孵育即甲醇在柱子中浸泡）；然后，再加入0.5mL甲醇进行洗脱，过柱前孵育30s；最后，再加入0.5mL甲醇洗脱，过柱前孵育30s，并使2-3mL空气通过柱体，收集洗脱液，置2mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(免疫亲和柱操作建议使用PriboFast®泵流操作架,便于控制各个步骤流速,保证较好的回收率)测定法：分别精密吸取上述混合对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量，计算，即得。关于普瑞邦：Pribolab（普瑞邦）是面向全球提供霉菌毒素检测解决方案的主要服务商之一，凭借强大的研发团队和专业的霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料等行业提供专业的霉菌毒素检测技术与产品服务。PriboFast®霉菌毒素免疫亲和柱PriboMIPTM霉菌毒素分子印迹固相亲和柱PriboVitaTM维生素类免疫亲和柱和试剂盒PriboFast®霉菌毒素多功能净化柱PriboFast®酶联免疫检测试剂盒Pribolab®霉菌毒素标准品和质控样品PriboFast®光化学柱后衍生器（KRC+MDU）Pribolab®M-EVAP超高效浓缩器亦可提供多种毒素以及复杂样品的代检服务，更多产品信息和技术问题请登录公司网站查询或咨询当地授权销售商。