3血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验

脂质和脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验临床检验教研室龚晓华11、掌握脂及脂蛋白代谢；脂代谢紊乱常用生化检验项目（TC、TG、HDL-C、LDL-C、LP（a）、apoA-I、aPOB）的检测方法、参考区间及临床意义2、熟悉血浆脂蛋白的分类、高脂蛋白血症的分型3、了解血浆脂代谢相关酶的测定；临床生化检验项目在脂代谢紊乱诊治中的应用本章教学要求：2第一节概述甘油三酯(TG)游离胆固醇(FC)胆固醇酯（CE)总胆固醇(TC)磷脂(PL)游离脂肪酸(FFA)血脂(血浆脂类)一、脂及脂蛋白相关的概念3（一）血浆脂蛋白的组成与结构组成：主要由蛋白质、三酰甘油、磷脂（PL）、游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）、游离脂肪酸（FFA）等成分组成。但其组成比例及含量却相差很大。相同点：蛋白质+脂类(TG、PL、FC+CE)不同点：(1)蛋白质和脂类的含量不同(2)蛋白质(Apo)的种类及其含量不同4结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的核心和亲水性的表层。核心由不溶于水CE与TG组成，表层由载脂蛋白、PL及FC组成，FC及PL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。561、超速离心法：乳糜微粒（CM）极低密度脂蛋白（VLDL）中间密度脂蛋白（IDL）低密度脂蛋白（LDL）高密度脂蛋白（HDL）脂蛋白（a）（Lp(a)）（二）血浆脂蛋白的分类780.951.0061.021.101.151.2020406080500直径(nm)510VLDLHDL2乳糜微粒LDLHDL3CMIDLLp(a)CM残粒密度各类脂蛋白颗粒的密度及体积8依据血浆脂蛋白分子中蛋白质表面电荷多少的不同而分离。通常可分成：CM、pre-β-LP、β-LP、α-LP四条区带分别相当于CM、VLDL、LDL、HDLIDL也有β移动度，在IDL异常时可显现宽β带2、电泳：（一）血浆脂蛋白的分类910血浆脂蛋白的主要功能1.CM运输外源性TG至外周组织2.VLDL运输内源性TG至外周组织3.LDL运输胆固醇至外周组织，与冠心病成正相关4.HDL从外周组织逆转运胆固醇至肝脏或其他组织再分布，与冠心病成负相关11（三）载脂蛋白脂蛋白中的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo)，具有结合与转运脂质及稳定脂蛋白结构等功能，在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能。定义：1.载脂蛋白的种类与功能：按1972年的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、ApoB、ApoC、ApoD、ApoE等。12Apo种类多，类--亚类—亚亚类。ApoA：ApoAI、ApoAII和ApoAIVApoB：ApoB100和ApoB48ApoC：CI、CII、CIIIApoD及ApoE、Apo(a)、ApoH、ApoJ13分类（三）载脂蛋白1314Apo分类生理功能AI激活LCAT,使FC酯化;AII抑制LCAT活性AIV激活LCAT;辅助CII激活LPL;调节食欲B100介导LDL与LDL-R结合的配体B48为CM合成和分泌所必需,参与外源性脂代谢CII激活LPLCIII抑制LPL活性;抑制肝脏对HDL的摄取E作为配体与LDL受体和ApoE受体结合CETP介导HDL中的CE与VLDL中的TG等交换，参与RCT,14功能①与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。②运转胆固醇和三酰甘油。③作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。④以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。⑤激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类（三）载脂蛋白15（四）脂蛋白受体定义脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。16脂蛋白受体的作用：不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。种类：主要有LDL受体、残粒受体及清道夫受体。17各种脂蛋白受体功能LDL受体不仅能识别ApoB100，也可识别ApoE，在细胞结合、摄取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。18残粒受体能识别ApoE，是清除血液循环中CM残粒和β-VLDL残粒的主要受体，它也能结合含ApoE的HDL。清道夫受体主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰LDL(包括氧化LDL和-VLDL)从血液循环中清除。19HDL代谢：胆固醇逆转运(RCT)VLDL-IDL-LDL代谢：由肝合成VLDL,释放入血后转变为IDL和LDL,并被肝或其它器官代谢的过程CM代谢：饮食摄入的胆固醇和TG在小肠中合成CM及其代谢过程LP代谢外源性代谢内源性代谢脂蛋白代谢以肝脏为中心二、脂及脂蛋白的代谢20参与脂蛋白代谢主要关键酶有:LPL、HL(HTGL)、LCAT、HMGCoAase特殊蛋白质有:CETP、LRP、MTTP、SREBP均参与脂类代谢的多个环节。血浆脂蛋白代谢21一、外源性脂质代谢22外源性代谢途径:CM代谢(半寿期1小时)TG,CETG,FC,PL,FFA肠壁细胞ApoE-RFCHDLCMCM残粒激活LPLFFA第3步第1步第2步23二、内源性脂质代谢1.VLDL和LDL代谢24B100VLDLCTGCEEVLDL-R脂肪组织与肌肉B-RE-R组装SR-ALPL激活ADHDLFFA肝外细胞LDL-RLDL-REIDLB100TGCEELDLB100TGCEStep1Step2Step3LPLFFACM残粒GLU脂肪动员CM残粒LDL转运CB100CE肝脏合成TG内源性代谢途径:VLDL、IDL、LDL代谢CECETPCE巨噬细胞25临床观察发现，有些患者的细胞表面受体缺乏或减少，致使血浆LDL含量增多，结果是血浆胆固醇和胆固醇酯浓度升高并沉积于血管壁，促进动脉粥样硬化的发生,表现在心脏则引起冠心病。由于LDL中胆固醇含量升高与冠心病发病率呈正相关，所以LDL中的胆固醇称为坏胆固醇。26肝外绝大多数组织分解代谢胆固醇的能力有限。需将胆固醇运回肝脏,以防在其中过多聚积。LiverLDL-RSR-BILCATFCCEN-HDLM-HDLLDLVLDLIDLCellN-HDLLCATLCATM-HDL2.HDL逆向转运代谢27高密度脂蛋白运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子所以HDL中的胆固醇称为好胆固醇。28脂蛋白代谢示意图29三、脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症（三）脂蛋白代谢紊乱与动脉粥样硬化30高脂蛋白血症是指血浆中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一种或几种浓度过高的现象。高脂蛋白血症原发性高脂蛋白血症：是遗传缺陷所致，如家族性高胆固醇血症。继发性高脂蛋白血症：指某些原发病在病理演变过程中造成脂蛋白代谢紊乱，而继发出现高脂蛋白血症。如糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退症等。31高脂蛋白血症WHO分型及特征32黑线峰：正常图形蓝色峰：实际图形脂蛋白电泳图谱33混浊（TG增高）下层浊（VLDL增高）Ⅴ型下层清（VLDL正常）Ⅰ型均匀混浊（VLDL↑）TC正常Ⅳ型上层奶油样（CM↑）TC增高Ⅱa型TC正常正常人清亮（TG正常）TC↑Ⅱb，Ⅲ型空腹血清测TC4℃过夜测TC血清外观分析（血清冷置试验）34二、甘油三酯三、游离脂肪酸一、总胆固醇七、载脂蛋白A-I六、脂蛋白(a)十、ApoA-I/ApoB、TC／HDL-C、TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值四、高密度脂蛋白胆固醇五、低密度脂蛋白胆固醇十一、卵磷脂胆固醇转移酶测定八、载脂蛋白B九、载脂蛋白E十二、脂蛋白脂肪酶第二节脂代谢紊乱的生化检验项目与检测方法35血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定•血脂测定项目TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。•检测项目的合理选择临床常规血脂测定：TC、TG、HDL-C及LDL-C这四项，有条件的实验室可测定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。特殊检查项目：如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT测定等，多用于科研或临床特殊病例研究。36样本收集与贮存注意事项1、一般要求空腹12小时以上2、采血前必须保持安静坐位至少5min（最好20min以上）；除卧床不起者外，采血时必须取坐位。3、止血带使用时间必须＜1min，抽血时必须松开止血带，因静脉阻滞5min，可使TC升高10%--15%。4、样本采集后应尽快进行检测，放置时间不得大于3min，24h内不能完成测定，可密封置于2--8℃保存一周。37一、总胆固醇（TC）【参考范围】合适：5.18mmol/L，边缘升高：5.18-6.19mmo/L升高6.22mmol/L【检测方法】临床常规方法推荐为酶法（COD-PAP法），卫生部推荐的参考方法是HPLC法。胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。38TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。【临床意义】血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合症、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸及重症糖尿病等。血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。39二、甘油三脂（TG）临床上所测的甘油三酯是血浆中各脂蛋白所含甘油三酯的总和，甘油三脂受饮食和时相的影响较大，同一个体多次测定时，也可能有较大变异，因此TG生物学变异最大。【检测方法】临床常规方法推荐为酶法，卫生部推荐的参考方法是同位素稀释气相色谱串联质谱法（ID-GC/MS）【参考范围】在1.7mmol/L（150mg/dl）以下为合适范围；1.7～2.25mmol/L（150～199mg/dl）为边缘升高；2.26mmol/L（200mg/dl）以上为升高。40【临床意义】411、生理性改变：高脂饮食、肥胖、运动不足等2、病理性改变：轻至中度升高2.26-5.63mmol/l患冠心病危险性增加重度升高≥5.63mmol/l可伴发急性胰腺炎3、低TG血症：＜0.56mmol/l三、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）常以测定HDL-C含量代表HDL水平。HDL是血清中颗粒最小密度最大的一组脂蛋白，被视为人体内具有抗动脉粥样硬化的脂蛋白，同时与冠心病呈负相关，因而HDL-C被称为好的胆固醇。【检测方法】临床常规方法为匀相法。其原理是利用多聚体和聚阴离子在表面活性剂的作用下，对低密度、极低密度脂蛋白选择性遮蔽的原理，从而达到仅血清高密度脂蛋白中的胆固醇参与显色反应的方法。42男性：1.16--1.42mmol/L女性：1.29--1.55mmol/L合适范围为：1.55mmol/L（60mg/dl）-1.04mmol/L（40mg/dl）升高：＞1.55mmol/L（60mg/dl）降低：＜1.04mmol/L（40mg/dl）【参考范围】43【临床意义】HDL-C被证实是AS和心血管疾病的保护因子，一般认为随着HDL-C水平降低，缺血性心血管病发病危险增加，HDL-C＜1.04mmol/L的人群与HDL-C≥1.55mmol/L的人群相比，缺血性心血管病危险增加50%。影响血浆（清）HDL-C水平的因素很多，主要有：①年龄和性别②种族③饮食④肥胖⑤饮酒与吸烟⑥运动⑦药物⑧疾病44HDL亚类HDL包括多个亚类α-HDL（HDL2a、HDL2b、HDL3a、HDL3b、HDL3c）和β-HDL（前β1-HDL、前β2-HDL、前β3-HDL）。HDL的两个主要功能抗炎抗氧化和抗AS，都可能通过某些亚类特别是H