3种培养基植物组织培养实验方案

植物组织培养实验方案一、实验仪器：烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L）、PH试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台二、实验药品：大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7H2O、钼酸钠Na2MoO4.2H2O、硫酸铜CuSO4.5H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸ConcentratedH2SO4注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素ThiaminHClVB1、盐酸吡哆醇PyridoxinHClVB6、烟酸NicotinicacidVB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calciumpantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin葡萄糖、琼脂70%酒精，NaClO2%，0.1%生汞（HgCl2）三、实验材料：无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、根四、实验步骤1、培养基的配制以MS为基本培养基，附加不同浓度的IAA、NAA和6-BA、琼脂0.7%，蔗糖3%，PH5.8~6.0，于121℃下灭菌20min，放置备用2、外植体的取材与消毒采取直径0.8cm左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%HgCl2灭菌7min或者用2%NaClO浸泡30min，无菌水冲洗4~5次后备用。3、接种培养在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。4、培养条件每天光照10h，光照强度为2000lx，温度25℃±1℃5、继代培养待丛生芽生成后，将丛生芽切成单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上6、生根与移栽待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。五、实验结果与分析：NB培养基NBMediumNB培养基产品价格用途：用于植物组织培养配方：（mg/L）硝酸钾(KNO3)硫酸铵((NH4)2SO4)氯化钙(CaCl2·2H2O)磷酸二氢钾(KH2PO4)硫酸镁(MgSO4·7H2O)硼酸(H3BO3)硫酸锰(MnSO4·4H2O)硫酸锌(ZnSO4·7H2O)钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)硫酸铜(CuSO4·5H2O)氯化钴(CoCl2·6H2O)碘化钾(KI)乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)肌醇(Myo-inositol)盐酸硫胺素(ThiaminHCl/VB1)盐酸吡哆醇(PyridoxinHCl/VB6)烟酸(Nicotinicacid/VB5)283046316640018531020.250.0250.0250.7537.2527.851001011产品用法：称取本品4.237g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,116℃高压灭菌30min,备用。产品说明：用于植物愈伤组织培养。成分分子量使用浓度(mg/L)大量元素硝酸钾KNO3101.11200硝酸铵NH4NO380.04480硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O236.16470氯化钾KCl74.55150磷酸二氢钾KH2PO4136.09550硫酸镁MgSO4.7H2O246.47250微量元素硼酸H3BO361.830.5硫酸锰MnSO4.4H2O223.013.0硫酸锌ZnSO4.7H2O287.540.5钼酸钠Na2MoO4.2H2O241.950.025硫酸铜CuSO4.5H2O249.680.025氯化钴CoCl2.62237.930.025浓硫酸ConcentratedH2SO40.5μl铁盐乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA372.2537.3硫酸亚铁FeSO24.7H2O278.0327.8有机成分肌醇Myo-inositol100盐酸硫胺素ThiaminHClVB11.0盐酸吡哆醇PyridoxinHClVB6205.61.0烟酸NicotinicacidVB5或VPP123.111.0泛酸钙Calciumpantothenate1.0腺嘌呤Adenine1.0L-半胱氨酸L-cysteine1.0生物素D-biotin0.1蔗糖sucrose342.31g/L琼脂agarg/L注：蝴蝶兰组培用摘自：MicropropagationofPhaleanopsisandDoritaenopsisbyculturingshoottipsofflowerstalkbuds.Plantcellreport(1993)13:7-11【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的CC培养基配方以前用MS,N6基,现在做籼稻,需要用CC基,可是查了不少地方，都没有配方。请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处.PM偶。或者，EMAIL:[e-mail]非常感谢!以下为抄录1，CC无机大量：20×母液（g/L）KNO324.24NH4NO312.80KH2PO42.72MgSO4.7H2O4.94CaCl2.2H2O/CaCl211.16/8.82，CC无机微量I：100×母液（g/200ml）MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O0.233/0.169H3BO30.062ZnSO4.7H2O0.1153，CC无机微量II：1000×母液（mg/500ml）KI4.5Na2MoO4120CuSO4.5H2O12.5CoCl2.6H2O144，CC有机100×母液（g/100ml）VB10.17VB60.02烟酸0.12肌醇1.8甘氨酸0.045，CC铁盐100×母液（g/L）FeSO24.7H2O2.78Na2.EDTA3.73配制1LCC培养基，加麦芽糖20g甘露醇25gphytagel/Agar3g/8gVC60mg