生物化学与分子生物学

478华南理工大学2007年攻读硕士学位研究生入学考试试卷（试卷上做答无效，请在答题纸上做答，试后本卷必须与答题纸一同交回）科目名称：生物化学与分子生物学适用专业：微生物学生物化学与分子生物学共6页第1页一．选择题（从备选答案中选出一个正确的答案，把答案代码填在答题纸上，每小题1.5分，共30分）1反转录酶除了有以RNA为模板生成RNA-DNA杂交分子的功能外，还有下列活性（）ADNA聚合酶和RNaseABDNA聚合酶和S1核酸酶CDNA聚合酶和RNaseHDS1核酸酶和RNaseH2羧肽酶含有的金属离子是（）A镁B锌C铜D铁5、在pH10时的谷氨酸溶液中，下列哪一种结构形式占优势？A羧基氨基都解离；B羧基氨基都不解离；C只α—羧基解离；D只γ—羧基解离；Eα—羧基γ—羧基都解离。18.A型DNA和B型DNA产生差别的原因是:A.A型DNA是双链，B型DNA是单链B.A型DNA是右旋，B型DNA是左旋C.A型DNA与B型DNA碱基组成不同D.两者的结晶状态不同磷酸甘油的来源有两个,一是甘油磷酸化,二是由磷酸二羟丙酮还原产生2008------17如果DNA沿3'→5'合成，那它则需以5'三磷酸或3'脱氧核苷三磷酸为末端的链作为前体。（Y）18.转录因子具有独立的DNA结合和转录激活结构域。（Y）第2页20.已知某一内切核酸酶在一环状DNA上有3个切点，因此，用此酶切割该环状DNA，可得到三个片断。（Y）21.根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从DNA文库筛选到相应的基因。（Y）3一个酶有多种底物，判断其底物专一性强弱应依据参数()AKcatBKmCKcat/KmD其它4胸腺嘧啶除了是DNA的主要组份外，它还经常出现在有些RNA分子中，它是:（）AsnRNABtRNACmRNAD5SrRNA5嘌吟霉素的作用是()A抑制DNA合成B抑制RNA合成C抑制蛋白质合成的延伸D抑制蛋白质合成的终止6DNA分子上被依赖于DNA的RNA聚合酶特异识别的顺式元件是（）A弱化子B操纵子C启动子D终止子7组蛋白的修饰可引起核小体的解离，这种修饰是（）A甲基化B腺苷化C磷酸化D糖基化8蛋白质形成三级结构的驱动力是：()A范德华力B疏水作用C氢键D离子键9利用羟基磷灰石分离提纯蛋白质是属于()A离子交换层析B吸附层析C亲和层析D分子筛层析。10下述哪种方法不适合用来测定核酸分子的大小及其分子量（）A电镜测量法B沉降分析法C粘度法D吸咐层析法。11今有A,B,C,D四种蛋白质，其分子体积由大到小的顺序是ABCD,在凝胶过滤柱层析过程中，最先洗脱出来的蛋白质一般应该是()AA,BB,CC,DD12生物体内甲基的直接供体是（）AS-腺苷蛋氨酸B半胱氨酸C蛋氨酸D牛磺酸13如果要测定一个小肽的氨基酸顺序，下列试剂中选择一个你认为最合适的（）第3页A茚三酮BCNBrC胰蛋白酶D异硫氰酸苯酯14有个天然肽的氨基酸顺序为：Pro-Ala-Phe-Arg-Ser，你要证实N端第二位Ala的存在，最好的试剂是（）AFDNBBPTTCC无水肼D羧肽酶15在天然蛋白质组成中常见的一个氨基酸，它的侧链在pH7.2和pH13都带电荷，这个氨基酸是（）A谷氨酸B组氨酸C酪氨酸D精氨酸16某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（）A原点不动B向正极泳动C向负极泳动17在接近中性的pH的条件下，下列哪种基团既可以为H＋的受体，也可为H＋的供体（）AHis-咪唑基BLys-ε-氨基CArg-胍基DCys-巯基18测定蛋白质在DNA上的结合部位常用（）方法AWestern印迹BPCRC限制性图谱分析DDNaseI保护足印分析19人细胞DNA含2.9×109碱基对，其双螺旋的总长度约为（）A990mmB580mmC290mmD950mm20DNA拓扑异构酶I型（转轴酶）和II型（旋转酶）的主要差别在于（）AI型使DNA的一条链发生断裂和再连接，而II型使DNA的两条链同时发生断裂和再连接BI型使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，而II型使DNA的一条链发生断裂和再连接CI型和II型都是使DNA的一条链发生断裂和再连接，但前者催化反应不需ATP，后者需要ATP提供能量DI型和II型都是使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，但前者催化反应不需ATP，后者需要ATP提供能量二、填空（共３０分，把答案填在答题纸上。）1将丙氨酸溶液400ml调节到pH8.0，然后向该溶液中加入过量的甲醛。当所得溶液第4页用碱反滴定至pH8.0时，消耗0.2ml/LNaOH溶液250ml，那么起始溶液中丙氨酸的含量为（）克（丙氨酸分子量：89.06）(2分)2将含有Asp(pI=2.98),Gly(pI=5.97),Thr(pI=6.53),Leu(pI=5.98)和Lys(pI=9.74)的pH3.0柠檬酸缓冲液，加到预先用同样缓冲液平衡过的Dowex-50阳离子交换树脂中，随后用该缓冲液洗脱此柱，并分部的收集洗出液，这5种氨基酸将按（）次序洗脱下来。（2.5分）3一个有效的自杀性抑制剂必须具备：（1）（），（2）（），（3）（）。（1.5分）4用AgNO3对在10ml含有1.0mg/ml蛋白质的纯酶溶液进行全抑制，需用0.342微摩尔AgNO3，该酶的最低分子量为（）。（2分）5当底物浓度等于0.25Km时，反应初速度与最大反应速度的比为（）（2分）6丙糖磷酸异构酶被认为是完善进化的酶，它的催化机制是Glu-165作为广义碱和His-95作为广义酸进行催化反应，它的动力学常数的特点是（）和（）。（2分）7在动物组织中蛋白激酶就其底物磷酸化的残基种类，可分为三类，它们是（），（）及（）蛋白激酶，而在微生物中还发现磷酸化（）残基的蛋白激酶。（2分）8DNA变性后，紫外光吸收能力（），沉降速度（增加），粘度（）。（2分）9一条单链（＋）DNA的碱基组成为：A21％，G29％，C29％，T21％，用DNA聚合酶复制出互补的（－）链，然后用得到的双链DNA作模板，由RNA聚合酶转录其中的（－），产物的碱基组成是（）。（2分）10β型DNA双螺旋的螺距为34Å，其中有（10）对碱基，每对碱基间的转角是（36）。（2分）11cccDNA是指（闭合共价环状DNA）。（2分）12用于基因克隆载体的质粒都具有（复制起点），（多克隆位点）和（选择性标记）三种必需条件。（1.5分）第5页13真核生物tRNA的加工、成熟过程包括：（切除5端附加序列），（切除3端附加序列），（片段拼接），（核苷修饰）和（3’末端加上CCA）。（2.5分）14大肠杆菌色氨酸操纵子的转录受（）和（）两种机制的控制，前者通过（）控制转录的起始，后者通过（）控制转录起始后是否进行下去。（2分）15Tm是DNA具有的一个重要特性，其定义为（）。（2分）三．是非题（每小题1.5分，共30分；把答案填写在答题纸上，正确的填“√”，错误的填“×”）1密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。（Y）.2在完整偶联线粒体中NADH氧化时生成ATP，反过来如果外加ATP，也能使线粒体内NAD+还原.（Y）2．所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子。X3细菌细胞壁中的肽聚糖是一类线性多聚糖链通过小肽的广泛交联而成的巨大分子，其中氨基酸组成既有L型也有D型.（Y）4肝和骨骼肌一般储存糖原，当动用糖原功能时，在磷酸存在下，经磷酸化酶的作用，首先形成葡萄糖-6-磷酸.（X）2.Z型DNA与B型DNA可以相互转变。Y:5溴乙锭（EB）与双链DNA和某些有双链螺旋区RNA特异结合后，产生很强的荧光，是由于EB能插入到核酸碱基对之间。（Y）6DNA复制时，岗崎片段的合成需要RNA引物。（Y）7一人工模板CAUGGGGGG...，在较高Mg2＋浓度情况下，无细胞翻译系统中可合成一多肽Met-Gly-Gly...。（Y）8DNA复制与DNA修复合成一样，都是由5'-3'方向进行的。（Y）9基因中核苷酸序列的变化不一定在基因产物，即蛋白质的氨基酸序列中反应出来。（Y）10从生物体内分离获得的蛋白质和让该蛋白质基因用遗传工程技术在细菌中表达的产物，它们的化学结构是完全相同的。（X）11类病毒是一类不含蛋白质的RNA病原体（Y）12用定位点突变方法得到缺失某一个氨基酸残基突变体，这个突变的酶蛋白不再具有催化活性，因此可以认为该缺失残基一定是酶结合底物的必需基团。（X）13有的tRNA反密码子由4个核苷酸残基组成，从而能校正某些mRNA插入突变而产生不良作用。（Y）第6页14凡有锌指结构的蛋白质均有与DNA结合的功能。（X）15DNA的复制方式有多种，通常是双向进行的，但滚动式复制却是单向的。（Y）16血红蛋白与肌红蛋白结构相似，均含有一条肽链的铁卟啉结合蛋白，所以功能上都有与氧结合的能力，血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。（X）17生物膜上的糖蛋白，其含糖部分是与肽链中的γ-羧基或ε-氨基以共价键形式相连，并往往埋没于磷脂双分子层中。（X）18免疫球蛋白由两条轻链和两条重链所组成，抗体与抗原的结合只涉及轻链，因为它有可变区域，重链的序列基本上都是恒定的，只起维持结构稳定的作用。（X）19用羧肽酶A水解一个肽，发现从量上看释放最快的是Leu，其次是Gly，据此可断定，此肽的C端序列是：Gly-Leu.（X）20人体需要的烟酰胺可以由色氨酸来合成，因此在营养上色氨酸可以替代烟酰胺。（Y）四．分析与计算（每小题5分，共15分）1．已知一个九肽的氨基酸顺序是：Ala-Pro-Lys-Arg-Val-Tyr-Glu-Pro-Gly，在实验室只有氨基酸分析仪，而没有氨基酸顺序测定仪的情况下，如何使用（1）羧肽酶A或B，（2）氨肽酶，（3）2，4-二硝基氟苯（FDNB），（4）胰蛋白酶，（5）胰凝乳蛋白酶，来验证上述肽段的氨基酸顺序？答案:用两种羧肽酶和氨肽酶作用此九肽，都不能释放出氨基酸，证明了第2位和第八位的残基均为脯氨酸；用FDNB可以测得该肽的N末端为Ala，用胰蛋白酶作用可得到Ala，Pro，Lys组成的三肽，这表明了第三位的残基为Lys；同时得到一段五肽和游离的Arg，这提示了Arg是第四位的残基。用胰凝乳蛋白酶作用后，可得到一段六肽和一段三肽，同时也确认了第六位残基是带芳香性侧链的Tyr。由六肽的氨基酸组成测得，确定其中含有Val，很自然的可认定这残基应是第五位的残基。用FDNB证明了酶解后所得三肽的N末端，即九肽的第七位残基，是Glu后，九肽的C末端也肯定是Gly。2．提纯醇脱氢酶，用55％饱和度的硫酸铵沉淀。沉淀溶解于水中，其蛋白质浓度为1.5g/L，500倍稀释后，取10微升酶溶液测定活性（总体积为3.0ml的pH9.2的缓冲液中，用过量的乙醇和NAD＋，测定在340nm光吸收变化），初速度为0.11OD单位/min。硫酸铵沉淀后上清液的蛋白质浓度为2.0g/L，1000倍稀释后也取10微升溶液按上述方法测活，初速度为0.08OD单位/min。计算二个组分的比活性。（ε340（NADH-NAD＋）＝6.2×103/mol.L）。请你对该提纯步骤做出评价。上述的试验是否有不足之处？如果有，请指出。（酶的活力=初速度×测活力时的体积比/ε340）3．已知一蛋白质有-Trp-Met-Asp-Trp-Gly-序列。为了合成一个12核苷酸长度的探针，用于检测该蛋白质的基因，由上述序列推测：第7页（1）该蛋白质的mRNA序列（2）该蛋白质的负链DNA序列（3）该蛋白质的正链DNA序列（4）12核苷酸长度的探针序列五．问答（共45分）1．真核生物基因转录调控因子有些什么重要的功能域？（5分）2．从高等生物基因组中克隆的完整基因为什么在大肠杆菌中不能正确表达？如果想让人的胰岛素基因在细菌中表达生产人胰岛素，你认为至少应当满足哪些条件？（5分）1.真核基因启动子不能被原核RNA聚合酶识别转录不能正确起始；真核基因组克隆的基因含有内含子，大肠杆菌没有转录后剪接系统。2.A.需有适当运载体将人胰岛素基因置