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《生物化学实验》教学方案湖南文理学院生命科学学院学院生化与分子生物学教研组实验一蛋白质的性质实验（1）—蛋白质和氨基酸的呈色反应授课题目：蛋白质的性质实验（1）——蛋白质和氨基酸的呈色反应（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求：1、了解蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。2、了解某些蛋白质和氨基酸的呈色反应原理。3、学习几种常见的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。教学内容提要及时间分配：1、实验原理讲解：12分钟双缩脲反应的原理茚三酮反应的原理黄色反应的原理坂口反应的原理考马斯亮蓝反应的原理2、实验试剂与器材2分钟3、实验步骤讲解：10分钟4、总结。2分钟教学重点及难点：1、双缩脲反应的原理。2、蛋白质、氨基酸与水合茚三酮的显色反应。教学方法：采用启发式教学，结合理论，对实验步骤进行分析并给于适当示范。教学手段（挂图、幻灯、多媒体…等）：采用板书等手段进行教学。使用的教材及参考资料：1、生物化学实验指导，自编讲义。2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年。思考题：1、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性时，可以对水解反应程度作出什么样的推论？2、茚三酮反应的阳性结果为何颜色？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质的存在？3、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？4、如何正确使用分光光度计？5、测定蛋白质含量还有哪些方法，测定原理有哪些不同？本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等）1、结合理论内容讲述实验内容，效果较好。2、强调实验基本操作规范，让学生养成良好的实验习惯，具有扎实的实验技能。实验二蛋白质的性质实验（2）—蛋白质等电点的测定和沉淀反应授课题目：蛋白质的性质实验（2）——蛋白质等电点的测定和沉淀反应（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求：1、了解蛋白质的两性解离性质。2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。教学内容提要及时间分配：1、实验原理讲解：10分钟蛋白质的两性解离性质蛋白质等电点的概念测蛋白质溶解度最低时的溶液pH值为其等电点稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素蛋白质沉淀反应的类型2、实验操作讲解：10分钟蛋白质的盐析重金属离子沉淀蛋白质某些有机酸沉淀蛋白质有机溶剂沉淀蛋白质乙醇引起的变性与沉淀3、总结。2分钟教学重点及难点：1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素。2、蛋白质变性与沉淀的关系。教学方法：采用启发式教学，结合理论，对实验步骤进行分析并给于适当示范。教学手段（挂图、幻灯、多媒体…等）：板书，PPT。使用的教材及参考资料：1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些？2、蛋白质变性与沉淀的关系。3、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化的原因。4、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么？本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等）1、结合理论内容讲述实验内容，效果较好。2、强调实验基本操作规范，培养学生对实验现象的观察和实验结果的思考。实验三牛乳中蛋白质的提取与鉴定授课题目：牛乳中蛋白质的提取与鉴定（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。教学内容提要及时间分配1、实验原理讲解：8分钟蛋白质在其等电点pH溶液中溶解度降底。根据这个原理，将牛乳的pH调整至4.8，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到纯的酪蛋白所得酪蛋白的定性鉴定2、实验条件及步骤讲解：7分钟酪蛋白的制备酪蛋白的性质鉴定乳清中可凝固性蛋白质的鉴定教学重点及难点：酪蛋白的制备。教学方法：1、结合理论实际，深入浅出。2、实验操作过程给于示教。教学手段（挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等）板书，PPT。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：1、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）1、实验内容结合理论内容进行讲述，效果较好。2、强调实验基本操作规范，让学生养成良好的实验习惯，具有扎实的实验技能。实验四氨基酸的分离鉴定——纸层析法授课题目：氨基酸的分离鉴定——纸层析法（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。教学内容提要及时间分配1、实验原理的说明10分钟纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法层析溶剂由有机溶剂和水组成物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。2、实验操作讲解：5分钟教学重点及难点1、扩展剂的制备。2、氨基酸样品的点样。教学方法理论与实际相结合，深入浅出，培养学生综合运用所学课程知识。实验过程中向学生提出问题，让学生在实验中观察思考，提高学生的分析问题，解决问题的能力。教学手段（挂图、幻灯、多媒体..等）板书，PPT，示教。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：1、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？2、层析缸中平衡溶剂的作用是什么？3、滤纸为什么要在层析缸中预先悬空密封饱和30min？4、展开时为什么要调节滤纸使溶剂前沿线平行于点样线？5、实验结果为什么有时会产生拖尾、相邻氨基酸分不开等异常现象？本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等）在实验中向学生提问题，可增强学生的好奇心，对于理解实验原理很有帮助。实验五酶的特性（设计型实验）授课题目：酶的特性（设计型实验）（6学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求1、加深对酶的性质的认识：本实验由温度对酶活力的影响；PH对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制；酶的专一性4组实验组成。2、学会设计并实施影响酶催化活性因素的实验方案。教学内容提要及时间分配1、实验原理讲解：10分钟酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同酶的活性受活化剂或抑制剂的影响酶具有高度的专一性，淀粉和蔗糖无还原性2、实验设计方案讲解：5分钟教学重点及难点1、影响酶催化活性的因素。2、实验方案设计及原理方法选择。教学方法：结合理论实际，深入浅出。实验操作过程给于示教。教学手段（挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等）多媒体，板书，画图，示教。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：1、实验方法设计及选择的原理和依据2、进行设计性实验的经验与体会3、什么是酶的最适温度及其应用意义？4、什么是酶反应的最适pH？对酶活性有什么影响？5、什么是酶的活化剂？6、什么是酶的抑制剂？与变性剂有何区别？本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等）1、学生实验结合理论内容进行自行设计，讲述实验设计方法，效果较好。2、学生自己设计实验方案，探讨影响酶催化活性的因素，培养学生分析和解决实际问题的能力，提高学生的主动性和创造性，得到能力的培养。实验六酵母核糖核酸的分离及组分鉴定授课题目：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定（3学时）授课对象：生科、农学专业授课教师：教学目标及基本要求：了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。教学内容提要及时间分配：1、实验原理讲解：10分钟酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。2、实验操作讲解：5分钟3、总结2分钟教学重点及难点：核酸组分鉴定的实验依据。教学方法：理论结合实践，深入浅出。实验操作过程给予示教。教学手段：板书，PPT，示教。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：1、如何得到高产量RNA的粗制品？2、现有三瓶未知溶液，已知它们分别为蛋白质、糖和RNA，采用什么试剂和方法鉴定？（自行设计简便的实验）本单元教学总结：对学生的实验预习、实验纪律、实验操作、实验报告、实验整理等环节进行督导，使学生养成良好的实验习惯，提高实验技能。实验七紫外分光光度法测定核酸的含量授课题目：紫外分光光度法测定核酸的含量（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求1、了解紫外分光光度计的基本原理和使用方法。2、学习用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。教学内容提要及时间分配1、实验原理讲解：10分钟核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波长处。一般在A260波长下，每mL含1ugRNA溶液的光吸收值为0.020。故测定未知浓度RNA或DNA溶液A260nm波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测定误差较大，故应设法预除去。2、实验操作讲解：5分钟紫外分光光度计的使用教学重点及难点1、核酸的制备2、紫外分光光度计的使用教学方法：理论结合实践，深入浅出。实验操作过程给予示教。教学手段（挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等）板书，PPT，示教。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题或作业：1、紫外分光光度计的使用方法和操作要点？2、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等）1、强调实验基本操作规范，让学生养成良好的实验习惯，具有扎实的实验技能。实验八维生素C的定量测定授课题目：维生素C的定量测定（3学时）授课对象：生科、农学、动科专业授课教师：教学目标及基本要求1、学习维生素C定量测定法的原理和方法。2、进一步熟悉、掌握微量商定法的基本操作技术。教学内容提要及时间分配1、实验原理讲解：8分钟测定维生素C（抗坏血酸）的化学方法，一般是根据它的还原性。本实验即利用维生素C的这一性质，使其与2,6-二氯酚靛酚作用。2,6-二氯酚靛酚钠盐的水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，当其被还原时，则脱色。2、实验操作讲解：5分钟教学重点及难点1、含维生素C的样品提取液的制备2、熟练掌握滴定操作教学方法理论结合实践，深入浅出。实验操作过程给予示教。教学手段（幻灯、多媒体等）板书，PPT，示教。使用的教材及参考资料1、生物化学实验指导，自编讲义2、基础生物化学实验，高等教育出版社，王秀奇主编，第二版，2003年思考题：试述本实验介绍的2,6-二氯酚靛酚滴定法的优缺点。本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）1、实验内容结合理论内容进行讲述，效果较好。2、强调实验基本操作规范，让学生养成良好的实验习惯，具有扎实的实验技能。实验九血糖的定量测定—GOD-PAP法授课题目：血糖的定量测定—GOD-PAP法（3学时）授课对象：生科、动科专业授课教师：教学目标及基本要求学习用GOD-PAP法测定血糖含量。教学内容提要及时间分配1、实验原理讲解：8分钟动物血液中的糖主要是葡萄糖，正常情况下，其含量较恒定。健康家兔的血糖水平为80-120mg/dL。GOD-P