203血清总胆红素

浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院1[所属专业]生化[项目名称]血清总胆红素测定[适用仪器]HITACHI系列自动生化分析仪[文件编号]203[版本]第五版[总页数]7页[批准实施日期]2009年06月09日[文件有效期]两年[复审日期]2010年06月09日[复审人]（签名）[文件编写]陈奉晖[文件审批者]（签名）[批准日期]2009年06月08日[文件发放部门/个人]1.医务科（保管者签名）2.院长办公室（保管者签名）3.医院档案室（保管者签名）4.检验科（保管者签名）5.专业实验室（保管者签名）浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院21检验申请单独检验项目申请：血清总胆红素（缩写TBIL）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集和接收2.1.1常规静脉采血约2ml，置于含分离胶黄色盖子真空采血管，颠倒混匀5次。2.1.2真空管外贴条形码作为唯一的标识符。2.1.3标本采集后及时运送至检验科。由专人负责标本的接收并记录标本的状态。对不合格标本予以拒收，并在“不合格标本拒收反馈记录单”上逐项填写，及时反馈给病区，若为门诊标本，则填写“重抽血复查通知”及时送到门诊服务台。2.1.4下列标本为不合格标本△标本量不足。△对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重混浊的标本。△无法读取标本信息（条形码不清晰、不完整或粘贴不规范等原因）。△标本类型与条形码上信息不符△标本容器上无条形码或标签△真空管用错△标本污染△未按标本采集要求采集与送检2.2标本处理及保存2.2.1标本采集后静置10-20分钟（室温），然后离心5-8分钟（离心力1000G）要求血清与血块被分离胶完全隔离，血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。2.2.2不能当天检测的标本置2~80C冰箱保存待检测，已完成测试的标本保持完整的识别号，置2~80C冰箱内保存7天后，按污物处理规范作废弃处理。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。3方法原理钒酸盐氧化法。血清中胆红素在一定条件下被钒酸盐氧化成胆绿素，胆红素的浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院3减少引起在波长450nm处吸光度的下降，通过测定反应前后吸光度值可求出总胆红素的浓度。4试剂及其他用品4.1试剂：钒酸盐氧化法测定总胆红素试剂盒，由日本和光纯药工业株式会社，货号997-22301。4.2试剂盒保存：保存于2~350C，不开盖情况下保存至标签的失效期。开盖后放于仪器的试剂仓库冰箱中至少稳定30天。4.3试剂盒准备：液态试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：氢氧化钠600mmol/L,酒石酸钾钠32mmol/L，硫酸铜12mmol/L，碘化钾30mmol/L。含有保护剂。5校准品与校准模式5.1校准品：由罗氏公司提供的校准液（Cat.No.17006401）,其总蛋白浓度可溯源至美国国家标准技术研究所（NIST）标准参考材料（SRM）470。5.2校准类型和校准点数目：线性模式，3个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间为Full，1d。但在：更换试剂批号或出现质控漂移时；仪器进行全面保养后；仪器的重要零件更换后；均需进行一次校准。5.4校准液重建方法：用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用有美国贝克曼公司提供的两个不同水平定值质控液。6.2质控液重建方法：用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。QC数据→12S不符合—————————————→在控，报告结果符合↓↑13S不符合→22S不符合→R4S不符合→41S不符合→10X—不符合符合↓符合↓符合↓符合↓符合↓6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及失控，拒发报告浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院4时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。6.6失控的处理：6.6.1发现失控应向科主任或专业主管(组长或负责人)报告,并协同一起分析控制图,确定误差类型,若符合13S,R4S,增大造成的失控,通常提示随机误差。如属于22S，41S，10X—规则的失控，往往提示系统误差问题。6.6.2造成系统误差的因素：包括使用不同批号的试剂、不同批号的校准品、校准品过期、加样器或加液器的核准或调试错误使样品或试剂体积变化、孵育箱或反应加热块的温度变化、检验人员的变动等。造成随机误差的因素：试剂瓶中有气泡、试剂没有充分混匀、电源电压不稳、检验人员操作不熟练以及重现性差等。6.6.3确认解决问题，做好记录，并填写失控整改记录。7适用仪器适用Hitachi系列各种型号的全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数（以Hitachi7170为例，其他Hitachi生化分析仪型号根据最少比色量修改标本量及试剂量，根据加样及比色时间修改AssayPoint，校准品浓度建议使用20g/L~100g/L三个及以上浓度，S1ABSLimit与校准品第一个浓度有关）AssayMethod[2pointEnd]ReactionTime[10min]AssayPoint[16－34]Wave(sub/main)[546/450]SampleVolume[8]R1Volume[200]R3Volume[50]Inc/Dec[Dec]CalibrationType[Linear]CalibrationPoint[2]SpanPoint[2]SDLimit[0.1]DuplicateLimit[300]Unit[umol/L]STD(3)[*]浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院510结果计算计算公式：总胆红素浓度（µmol/L）=样本吸光度标准吸光度×标准液总胆红素浓度（µmol/L）仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果11检验结果的报告及范围11.1结果报告11.1.1结果经审核确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、标本接收及报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与条形码相同的病人信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：1.7~1026µmol/L，超出此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，并经上级主管技师审核后报告。12操作性能12.1精密度：总CV0.8%~3.6%。12.2线性范围：1.7~1026µmol/L。12.3方法的有限性及干扰因素：甘油三酯达10.2mmol/L时影响小于6%，血红蛋白达250mg/L时影响小于10%。13参考范围及医学决定水平参考范围：3~22µmol/L。14临床意义14.1血清总胆红素和结合胆红素多用于黄疸的诊断和鉴别诊断。由于胆红素和肝脏功能密切相关，总胆红素是重要的常规肝功能指标。14.2各种原因引起的黄疸都有血清总胆红素的升高，如胆汁性肝硬化、胆道梗阻、阻塞性胆红素、肝细胞性胆红素，如肝炎、肝硬化、溶血性黄疸、新生儿胆红素或输血错误。14.3血清总胆红素可作为暴发型肝衰竭（FHF）和自身免疫性肝炎（AIH）预后死亡的独立危险因子，TBIL255µmol/L预测FHF预后死亡的敏感性为75%，特异性为46.8%。15结果审核以及分析与相关项目的联系浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院615.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与结合胆红素（DBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酸转移酶的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定16.1成人255µmol/L；新生儿307.8µmol/L为应引起临床重视的紧急值，可能有较严重的肝细胞坏死或暴发性肝衰竭的情况。16.2处理程序16.2.1检验人员立即报告审核者。16.2.2审核者首先根据审核程序，分析质控、定标、试剂的情况是否正常，当天其它已做标本本项目的总体情况有无异常，确认实验有关的基础是在正常状态中。16.2.3出现紧急值的标本有无异常，该标本其它项目有无异常，尤其是该患者其他肝功能的情况。16.2.4对该标本进行一次重复测定，确认紧急值是否重现。16.2.5报告技术质量主管及科主任，立即与临床联系，了解临床相关情况。16.2.6确认此紧急值是可报告的，由技术主管或科主任立即电话向主管临床医生报告，并作好电话报告记录，包括电话报告时间和对方接听人员的标识。16.2.7及时签发正式检验结果报告。17有关引用程序与文件17.1Hitachi7170A型、7600型自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果审核程序。17.4标本送检和接收程序。18参考文献18.1陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术规程.杭州：浙江大学出版社，2004.18.2日本和光纯药工业株式会社钒酸盐氧化法测定总胆红素试剂盒说明书。浙江丽水市中心医院项目操作规程（SOP）文件编号203温州医学院附属五院718.3陆永绥，张伟民主编，《临床检验自动化仪器分析标准操作规程》。杭州：浙江大学出版社，2006。