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体验·双基考题(时间：10分钟)建体系练能力速效提升建网络练考题1．(2013·江苏)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次解析培养基灭菌应在分装到培养皿之前进行，A项错误。划线结束后，接种环上残留菌种，必须灼烧接种环，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，B项正确。从有机废水中分离的微生物是异养型生物，其培养不需要光照，C项错误。培养过程中应每隔12h或24h观察一次，D项错误。答案B2．(2013·安徽理综)下图为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图。下列叙述正确的是()A．根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目B．外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制C．重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接D．放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置解析本题涉及的主要知识点是基因工程和微生物培养与计数。由于长成的一个单菌落可能来自样品中的2个或更多个细胞，因此计数的结果一般比实际活菌数低，A项错误。外源DNA分子要想表达，必须位于重组质粒的启动子和终止子之间，而DNA分子的复制只要重组质粒有DNA复制原点就可以了，B项错误。重组质粒与探针能进行分子杂交是因为它们之间能进行碱基互补配对，C项错误。根据图示可知放射自显影结果可以显示含有能与探针杂交的特定DNA的细菌菌落位置，D项正确。答案D3．(2014·深圳调研)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A．利用平板划线法对细菌进行计数B．用以石油为唯一碳源的培养基筛选C．采用稀释涂布平板法分离菌种D．称取和稀释土壤样品时应在火焰旁解析分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能用于细菌的计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行，所以应在火焰旁进行。答案A4．(2013·四川理综)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。(1)图甲中，过程①需要的酶有________________________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需重复几次，目的是________________________________________________________________________。(2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是________；推测该同学接种时可能的操作失误是________。(3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________________________。(4)用凝胶色谱法分离α淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。解析(1)图甲中①为基因表达载体的构建，应用限制性核酸内切酶及DNA连接酶。筛选能利用淀粉的酵母菌，应使用以淀粉为唯一碳源的培养基。图中②、③过程需重复几次，目的是进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌。(2)据图乙分析，该同学的接种方法应是稀释涂布平板法；图乙培养基中菌落分布不均匀，可能是该同学涂布不均匀所致。(3)以淀粉为原料，在密闭条件下发酵时，因工程酵母菌利用淀粉能力强，进行酒精发酵产生的CO2较多，应先于普通酵母菌进行排气。(4)利用凝胶色谱法分离α淀粉酶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。因此，在色谱柱中移动速度越慢的蛋白质，相对分子质量越小。答案(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶淀粉进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)工程酵母工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快(4)小5．(2013·课标全国理综Ⅱ)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用________法或________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明____________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素________。解析(1)为了获得样本中致病菌单菌落，可用稀释涂布平板法或平板划线法将样本接种到固体培养基表面，再经选择、鉴别等步骤获得。(2)欲让菌落均匀生长，布满平板，应将单菌落稀释后再用稀释涂布平板法将菌种接种到培养基表面。(3)在长满菌落的平板上，含抗生素A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对抗生素C的敏感性弱于对抗生素A的敏感性。含D滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，如不考虑其他杂菌污染的情况，此菌落很可能是抗生素D的耐药菌。(4)根据以上结果，选用抗生素A效果最好。答案(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A精品题库1．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出()①大肠杆菌②霉菌③放线菌④固氮细菌A．④②③B．①②③C．①③④D．③④解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，霉菌能生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌，放线菌能生长。答案A2．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，下列叙述错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却到50℃，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时倒平板。平板冷却几分钟后还需倒置。答案A3．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素B．碳源物质也是该微生物的能源物质C．无机盐是该生物不可缺少的营养物质D．水是该微生物的营养要素之一解析CO2是无机碳源，不能作为该微生物的能源物质。答案B4．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，应先根据需要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。答案C5．检验培养基是否有杂菌污染的最有效方法是()A．将未接种的培养基放在实验桌培养B．将未接种的培养基放在窗台培养C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养解析检验培养基有没有被杂菌污染，可选取未接种的培养基与接种样品的培养基同时在恒温箱中培养。如果在培养过程中未接种的培养基没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染；若未接种的培养基有菌落生长，说明培养基被杂菌污染。答案C6．啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。在啤酒生产过程中，发酵是重要环节。生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后，结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这样特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意________和________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。步骤4：根据____________________筛选出突变菌。(2)酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不产生酒精，应采取的措施是____________________。(3)为研究发酵罐中酵母菌的生长状况，常要取样统计分析，并测定pH，判断取样先后顺序的主要依据是____________________________。(4)小麦脱粒以后还有大量的麦秆，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是____________________________。请提出解决该问题的方法(列举两种方法)。_____________________________________________________。(5)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物的作用是______________________，加入DNA聚合酶的作用是_____________________________________________________。解析制备选择培养基获得耐高糖和耐酸特性的酵母菌，应在培养基中加入高浓度蔗糖(葡萄糖)、调低pH，能在此培养基生长的酵母菌即为耐高糖和耐酸特性的菌种。酵母菌在氧气充足时大量繁殖，在无氧条件下产生酒精。酵母菌发酵产生二氧化碳使pH变小，pH越小说明取样时间越靠后。酵母菌不能产生纤维素酶和半纤维素酶，因此不能利用木质素、纤维素和半纤维素。PCR扩增反应中加入引物结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点；加入DNA聚合酶催化DNA子链的合成。答案(1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖)调低pH是否能在选择培养基上生长(2)隔绝空气(3)pH的大小，pH越小取样时间越靠后(4)缺乏相应分解酶系(或缺乏纤维素酶和半纤维素酶)在酵母菌中转入分解酶系的相关基因；利用酶或微生物分解麦秆；利用物理和化学方法分解麦秆；将酵母菌与其他能分解麦秆的微生物混合发酵(答对任意两项即可)(5)结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点催化DNA子链的合成7．现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离()成分KH2PO4MgSO4·7H2ONaClCaSO4·2H2OCaCO3