百泰克生物

北京百泰克生物技术有限公司百泰克生物电话：[phone]邮编：[e-mail]货号名称价格EP1601SYBRGreenI(电泳染色用)100ul/支440元500ul/支1835元EP1602SYBRGreenI(荧光定量PCR用)500ul/支160SYBRGreenI核酸染料(电泳用)SYBRGreenI是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。SYBRGreenI与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBRGreenI染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。SYBRGreenI适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。SYBRGreenI与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBRGreenI与EB相比，诱变能力大大降低。SYBRGreenI核酸染料特点高灵敏：至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。操作简单：无须脱色或冲洗。适用范围广：可适用于多种电泳分析。使用方便：不影响其它修饰酶作用。经济：价格比银染便宜。电泳用SYBRGreenI使用方法SYBRGreenI预染方法1.该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳2.工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBRGreenⅠ稀释100倍，即为SYBRGreenⅠ工作液。SYBRGreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。3.制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。4.样品染色：向分析样品中加入SYBRGreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBRGreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBRGreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。5.DNAMarker染色：将5μLDNAMarker和5μLDNAMarker稀释液和1μLSYBRGreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBRGreenⅠ与DNA充分结合。6.上样、电泳：按常规操作。SYBRGreenI后染方法1.按照常规方法进行电泳。2.用PH7.0-8.5的缓冲液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀释SYBRGreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。3.将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。4.用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。SYBRGreenI使用注意事项1.在SYBRGreenⅠ预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBRGreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。2.在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBRGreenI可以全部从双链核酸上去掉。3.如果想对用SYBRGreenI染过的胶进行Southernblots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。4.在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBRGreenI呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。5.SYBRGreen对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。SYBRGreenI荧光定量PCRSYBRGreenI与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBRGreenI荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBRGreenI染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。原理如下图：使用浓度对荧光PCR结果的影响SYBRGreenI荧光定量PCR的试验成功有很多因素，但是SYBRGreenI的使用浓度是非常关键的因素，如果SYBRGreenI的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBRGreenI时应根据实际情况优化使用浓度。我们提供的为20×的浓缩液，使用时可稀释20—100倍，即使反应的终浓度为1×到0.2×之间。镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBRGreenI对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBRGreenI进行荧光PCR反应时，镁离子浓度要比无SYBRGreenI的普通PCR反应要高出0.5到3mM。