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第四军医大学硕士学位论文氧化葡聚糖交联平阳霉素明胶微球的研制及其相关生物学特性的实验研究姓名：邱麟申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学（颌面外科）指导教师：封兴华20070501独独创创性性声声明明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：保保护护知知识识产产权权声声明明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文氧化葡聚糖交联平阳霉素明胶微球的研制及其生物学特性对比的实验研究硕士研究生：邱麟导师：封兴华教授第四军医大学口腔医院口腔颌面外科，西安710032中文摘要颌面部恶性肿瘤是目前国内外肿瘤治疗的难题。传统单一手术治疗因颌面部的解剖关系复杂、血供丰富，往往导致术中出血量大、术后患者功能障碍和面容畸形，增大了手术风险、降低了患者的生存质量。随着医学技术的发展，颌面部恶性肿瘤治疗已经进入综合序列治疗时期。根据不同病种和个体，通过多学科有序排列，即所谓“量体裁衣”式的治疗，可以收到比传统单一手术治疗更好的预后效果[1]。经导管动脉栓塞技术（Transcatheterarterialembolization，TCAE）与化疗相结合治疗方法的出现，为恶性肿瘤的序列治疗提供了全新的思路。栓塞化疗剂的性能和选择在介入栓塞治疗中起着关键性的作用。栓塞用载药微球的研制成为了目前栓塞剂研究的热点。明胶因其生物相容性好、可自我交联、化学性质稳定等特点成为微球制备中的常用基质材料。目前在制备明胶微球（Gelatinmicrospheres，GMS）中常用醛类交联剂，因其在微球中的残留不能彻底清除，会对组织产生一定的毒性作用，不利于临床的广泛应用。本课题首次通过选择一种生物相容性好的糖类交联剂来制备平阳霉素（Pingyangmeisu，PYM)GMS，可有效的避免醛类交联剂对组织的毒性效应，-2-第四军医大学硕士学位论文并优化了工艺，使GMS栓塞化疗变的更为安全可靠，从而使GMS的性能进一步完善，并向临床应用过渡。目的：选择一种新的生物相容性好的多醛葡聚糖即氧化葡聚糖（Polyaldehydedextran，PAD）交联剂来制备栓塞用PYM-GMS，并与以传统戊二醛（Glutaraldehyde，GA）交联剂制备的PYM-GMS进行比较。评估使用PAD交联剂制备栓塞用PYM-GMS的可行性。方法：使用葡聚糖制备出PAD，并以乳化冷凝法分别制备以PAD和GA作为交联剂的PYM-GMS。采用光镜、扫描电镜、激光粒度仪等方法分析微球形态学特征。应用高效液相色谱仪、MTT法等方法分析微球的生物学特性和生物相容性。结果：PAD组微球圆整度优于GA组；与GA组相比，PAD组的粒径分布范围较窄；包封率、载药率（94.6％、8.9％）均高于GA组（80.1％、5.5％），且释药缓慢。细胞学实验显示，PAD组细胞大多成梭形，细胞贴壁，充分伸展，有大量分裂细胞，状态良好；GA组有大量细胞脱落，细胞形态不规则，圆形细胞较多。说明PAD组的细胞毒性明显低于GA组。结论：PAD作为一种新的交联剂具有比GA更为突出的优点。PAD交联GMS在形态学、生物学特性和生物相容性方面均达到了栓塞用微球标准，用它制备的PYM-GMS将有可能成为一种有前途的可降解颗粒型栓塞剂广泛应用于临床。[关键词]：明胶；平阳霉素；氧化葡聚糖；微球；缓释；细胞毒性；颌面部肿瘤；动脉栓塞。-3-第四军医大学硕士学位论文ExperimentalStudiesonprepareanewkindofcrosslinkingagenttogelatin-PYM-microspheresandinvestigateitsrelatedbiologicalcharacteristicsPostgraduateQiuLinTutorFengXinghuaDepartmentofOralandMaxillofacialSurgeryofStomatologicalCollege，FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an7l0032AbstractTherapyofmaxillofacialregionmalignancyisanexistenttoughproblemofoncotherapy.Itisforalongtimethatthetherapyoftheheadandnecktumorsmainlydependsonthesurgeryoperations.Thebloodsupplyoforaiandmaxilliofcialpartisflourishandtheanatomicstuctureiscomplicated，sotheconventionalsurgeryhassomeproblemssuchashighrisk，heavytrauma，highrelapserate，etal.Besidesthefeaturesdeformationafteroperationsandmalfunctionhasbadlyaffectiononpatients’slifevalue.Themethodoftranscatheterarterialembolization(TCAE)combinechemotherapyoffersanewapproachfortherapyoftheoralandmaxillofacialmailgnanttumors.Choiceofembolicchemotherapeuticagentisacriticalroleoninterventionchemoemoblizationtherapy.Ithasbeenahotspotonembolicpraeparatum.Gelatineisabasematerialthatcommonlyusedinpreparemicroballoons.Glutaraldehydeusuallyusedascross-linkingagentwhichcouldnotbecleared-4-第四军医大学硕士学位论文thoroughlyingelatin-microballoonsandhastoxiceffectontissues,thatwouldconfineclinicalapplicationofgelatin-microballoons.Thestudyistochoosepolyaldehydedextranasanewkindofcrosslinkingagenttopreparegelatin-pingyangmyc(PYM)-microspheres,itcouldsignificantlyreducetoxiceffectontissuesbecauseusedglutaraldehydeascross-linkingagentandbeappliedsecurelyinterventionchemoemoblizationtherapy.Objective：Tochooseanewkindofcrosslinkingagenttopreparegelatin—Pingyangmyc(PYM)－microspheresfortheinterventionalchemoemoblizationtherapy.Method：.Thisstudyisdividedintotwoparts：first，wepreparedgelatin-PYM-microspherescross-linkwithpolyaldehydedextranandglutaraldehyderespectivelybyemulsifiedcold一condensationmethod；second，wecomparedmorphologyandbiologicalcharacteristicsoftwokindsofmicrospherebyrelatedempiricalmethod.Result：Theroundnessofpolyaldehydedextrangroupisbetterthanglutaraldehydegroupthoughopticalmicroscope;thedistributionrangeofparticlediameteroftwokindofmicrospherewerefitfortheuseofembolization,however,polyaldehydedextrangroupisnarrowerwhencomparedwithglutaraldehydegroup（p＜0.05）;thedrugcontentrateandtheencapsulationrateofpolyaldehydedextrangroupwas94.6％,8.9％respectivelywhichwashigherthanglutaraldehydegroup80.1％,5.5％（p＜0.05）;thecumulativereleaserateofPYMfromoxidized-dextrangroupin6hourswas71%,ithaslowerdrugreleasethanglutaraldehydegroup95%（p＜0.05）.MTTexperimentalresultsshowthatpolyaldehydedextrangrouphashighercellsurvivalratethanglutaraldehydegroup.Conclusion:Theseresultsimpliedthepolyaldehydedextranasanewkindof-5-第四军医大学硕士学位论文crosslinkingagenthasmoreexertedqualitythanglutaraldehyde，gelatin-PYM-microspherescross-linkwithpolyaldehydedextrancouldbecomeaperspectivegranularpatternembolismfortargetedtumortherapy.Keywords：gelatin;PYM;polyaldehydedextrangroup;microsphere;slow-release；cytotoxicity；maxillofacialregiontumor；arterialembolism-6-第四军医大学硕士学位论文前言颌面部恶性肿瘤因位置特殊，血供丰富，与周围组织解剖关系密切，如行手术切除则创伤大，易遗留面部畸形，严重影响患者的生存质量，是目前国内外肿瘤治疗的难题。上世纪80年代，经导管动脉栓塞术(Transcatheterarterialembolization,TCAE)与化疗相结合的治疗方法问世，为颌面部恶性肿瘤的综合序列治疗提供了新的思路。它可以减少或阻断肿瘤的供血，并缓慢的在局部释药，使局部达到高血药浓度并维持一定时间，从而达到疗效高、药物毒副作用小、手术微创的治疗目的。为此研究一种既能装载化疗药物又能起到栓塞作用的载药缓