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课时跟踪检测(三十八)微生物的培养与应用一、选择题1．(2013·东城区检测)下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A．微生物培养前，需对培养基进行消毒B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源2．(2013·广州模拟)消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列适用于消毒处理的是()①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀A．①②③⑧⑨B．④⑤⑥⑦⑩C．①②⑤⑥⑧D．以上全部3．下列有关刚果红染色法的叙述，不．正确的是()A．刚果红可以在倒平板时加入B．刚果红可以在菌落形成后加入C．在倒平板时加入刚果红不需要灭菌D．在菌落形成后加入刚果红不需要灭菌4．下列关于大肠杆菌的培养的叙述不．正确的是()A．在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件B．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒C．若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度合适D．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃5．(2013·深圳调研)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A．利用平板划线法对细菌进行计数B．用以石油为唯一碳源的培养基筛选C．采用稀释涂布平板法分离菌种D．称取和稀释土壤样品时应在火焰旁6．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数7．(2013·赤峰质检)下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是()成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊红美蓝青霉素琼脂蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1万单位适量1000mLA.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因B．此培养基是天然鉴别培养基C．此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准D．此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中8．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A．图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B．如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C．若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一碳源D．使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落二、非选择题9．(2012·浙江自选)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：配制培养基―→灭菌、倒平板―→X―→培养―→观察请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有________，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。(2)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。(3)在培养时，需将培养皿倒置并放在________中。若不倒置培养，将导致________。(4)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的________分解为NH3和14CO2。10．(2013·如皋中学质检)某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方如下：牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂蒸馏水5.0g10.0g5.0g20.0g定容至1000mL其中提供氮源的是________________；提供碳源的主要物质是____________。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂后要不停地________，防止________。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入________中灭菌，压力100kPa，温度________，时间________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应________。(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯________________(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环______________后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入______________℃冰箱中保藏。11．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。(2)要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________________________________________________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长A＋B能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是______________________。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。答案课时跟踪检测(三十八)1．选A微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，因为不同的微生物在土壤中的含量不同；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源。2．选A消毒指用比较温和的方法杀死物体表面或内部的部分微生物。题中的皮肤、饮用水、牛奶、果汁、酱油适用于消毒的方法处理，而注射器、培养皿、接种环、培养基、手术刀等必须进行灭菌处理。3．选C常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。若在倒平板时加入，刚果红要进行灭菌，以防杂菌侵入影响菌落的形成。4．选B培养过程中，除营养条件要满足需要外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件是否适宜；灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以，应对培养基和培养皿进行灭菌而不是消毒；使用稀释涂布平板法时要保证样品稀释比例合适，这样才会有更科学的数据；有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。5．选A分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能对细菌进行计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行，所以应在火焰旁进行。6．选D在细菌计数时，为保证结果准确，一般选择菌落数目在30～300的平板进行计数。7．选D此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基。抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上，而不是拟核上；此培养基只能用来检测自来水中是否含有抗性的大肠杆菌，而不能检测其含量是否符合饮用水标准。8．选C若④为对照实验，则④中培养基应含除苯酚外的其他碳源，⑤中以苯酚作为唯一碳源。9．解析：(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(3)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(4)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。答案：(1)脲酶红(2)接种涂布单(3)恒温培养箱无法形成单菌落(4)尿素10．解析：凡能提供所需氮元素的物质为氮源，牛肉膏、蛋白胨均含氮元素。在配制培养基时营养要协调，按所培养微生物对各种成分的需求确定；在加入琼脂后，要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。玻璃器皿的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15～30min。酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却再蘸取菌种，否则会烫死菌种，造成实验失败。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨牛肉膏(2)比例用玻璃棒搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂(3)高压蒸汽灭菌锅121℃15～30min废弃(4)适量水(5)外冷却411．解析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理性质方面来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养皿中培养基属于选择培养基。该除草剂为含氮有机化合物，降解该除草剂的细菌可以除草剂为氮源。故该培养基中除加入除草剂外，不再含有其他氮源，以选择出能降解该除草剂的细菌。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明圈是由于该除草剂被某些细菌降解。(5)突变株A的生长依赖于营养物质甲，突变株B的生长依赖于营养物质乙。不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株A为突变株B提供了营养物质乙，突变株B为突变株A提供了营养物质甲。答案：(1)稀释(2)在无氮固体培养基中添加了该除草剂(3)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源(4)氮气该除草剂(5)突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可