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高三年级生物科辅导讲义（第讲）学生姓名：授课教师：授课时间：专题高频考点目标实验（原理、方法、结果）重难点基因工程常考点细胞工程实验（原理、方法、结果）1.观察DNA和RNA在细胞中的分布，在用甲基绿吡罗红染色剂进行染色前，需要用解离液对细胞进行解离2.脂肪能被苏丹III染液染成红色3.使用高倍显微镜可以观察到内质网和高尔基体4.在高倍显微镜下可观察到黑藻的叶绿体呈带状5.通过健那绿染色，可以通过高倍镜观察到生活状态的线粒体的形态与结构6.处于质壁分离状态的洋葱外表皮细胞，液泡颜色会加深7.使质壁分离状态的洋葱外表皮细胞复原，可直接打开盖玻片并滴加清水8.探究PH对酶活性的影响需要设置空白对照9.选用过氧化氢酶探究温度对酶活性的影响可取得较好的实验效果10.在提取绿叶中的色素时，加入二氧化硅的目的防止研磨中色素被破坏11.用纸层析法对绿叶中的色素进行分离，移动最快的是叶绿素b12.探究酵母菌细胞呼吸方式实验，用溴麝香草酚蓝水溶液主要是检测酵母菌培养液是否产生酒精13.龙胆紫溶液、醋酸洋红液和改良苯酚品红染液均可对染色体进行着色14.解离和压片的主要目的是杀死细胞以便观察15.显微镜下洋葱根尖分生区的特点是细胞呈长方形，排列疏松，大部分细胞处于分裂期16.NaOH在体积越小琼脂块中扩散的速度越快18.低温与秋水仙素均可通过抑制纺锤体的形成诱导细胞染色体数目加倍19.卡诺氏液主要作用是对根尖细胞进行解离20.调查某遗传病的发病率时，各小组根据自已调查的结果计算出发病率后，再取平均值21.预实验是非正式实验，对实验的要求可以适应放松22.探究不同浓度NAA溶液对插条生根的影响，需要设置有蒸馏水的空白对照23.用血球计数板计数酵母细胞，先将培养液滴于计数室，再盖上盖玻片，置于显微镜下计数24.调查土壤中小动物的丰富度常用取样器取样的方法进行25.设计人工生态缸需要考虑不同营养级生物的比例，还需要将生态缸置于阳光直射的地方26.利用DNA不溶于酒精的原理可将冷酒精加入溶有DNA的NaCl溶液中将DNA析出27.鉴定DNA所用的二苯胺要现配现用，否则会影响鉴定的效果28.分离微生物常用的培养基是液体培养基29.分离微生物最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法30.测定微生物数量常用的方法有活菌计数法和显微镜直接计数法31.选择纤维素分解菌的培养基中，纤维素是培养基中唯一的碳源32.酶的活力可以用单位时间内，单位体积中反应物减少的量或产物增加的量来表示33.植物、乳酸菌、霉菌均能产生果胶酶34.植物激素的浓度、使用先后顺序和比例，PH，温度，光照条件是影响组织培养的重要因素35.凝胶色谱法主要根据蛋白质相对分子质量的大小对蛋白质进行分离36.电泳利用分离样品中各种分子带电荷的性质、分子的大小、分子的形状的不同对样品进行分离37.PCR反应液中需要加入的是两种引物、4种脱氧核苷酸、模板DNA、耐热DNA连接酶PCR每次循环可以分为变性、复性和延伸三步，通过PCR可以对DNA进行大量扩增请填空完成以下概念图（涉及选修三）。1、现代生物技术2、基因工程3、植物组织培养4、植物体细胞杂交5、动物细胞培养6、生殖性克隆7、单克隆抗体的生产8、试管动物9、自然胚胎移植10、治疗性克隆11、生物技术的安全性和伦理问题12、生态工程的基本原理选修三部分(1)基因工程是高考命题的重点和热点，命题点主要涉及以下内容：①基因工程的原理和操作工具；②基因工程的操作流程；③基因工程与胚胎工程、植物组织培养内容的综合考查。(2)以最新的基因工程的研究成果为背景，结合生物工程的其他技术进行综合考查将是高考的命题趋势。1．1997年，科学家将动物体内能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据图完成下列问题：(1)此图表示的是采取________合成基因的方法获取__________基因的过程。(2)图中①DNA是以________为模板，________形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因。(3)图中②代表的是__________，在它的作用下将质粒(________DNA)切出________末端。(4)图中③代表________DNA，含________。(5)图中④表示________。⑤表示________DNA随大肠杆菌的繁殖而进行________。2．浙江大学农学院喻景权教授课题组最新研究发现，一种植物激素——油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。用油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因(如P450基因和红霉素抗性基因)表达和酶活性都得到提高，在这些基因“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒甚至无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了如下的实验操作，请回答：(1)获得油菜素内酯合成酶基因的方法有____________、____________。步骤①用PCR技术扩增基因时用到的耐高温的酶通常是指________________。(2)图中导入重组质粒的方法是________，在导入之前应用________处理受体细菌。(3)导入重组质粒2以后，往往还需要进行检测和筛选，可用________制成探针，检测是否导入了重组基因，在培养基中加入________可将含有目的基因的细胞筛选出来。(4)请指出喻景权教授课题组这一最新研究发现的生态学意义：____________________________________________________。3．近期《肝脏学》杂志发表了一篇文章称科学家经研究发现：乙肝病毒HBX蛋白间接调控宿主细胞内许多基因的转录，广泛影响宿主细胞的各种生命活动，包括调节细胞凋亡，抑制细胞DNA的修复，干扰细胞有丝分裂和细胞周期进程等，因此可利用该蛋白质治疗乙肝。下图表示利用乳腺反应器生产乙肝病毒HBX蛋白的流程示意图。(1)为了获取更高活性的HBX蛋白质，需要对蛋白质的结构进行设计改造，但必须通过改造基因来完成，而不直接改造蛋白质的原因是______________________________________________________________________________。(2)HBX基因与运载体构成基因表达载体所需的工具酶是__________________________________________。(3)图中⑤表示____________，⑥表示____________，在该步骤操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡，请分析外源基因插入导致胚胎死亡的原因是________________________________。(4)在早期胚胎培养时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供________气体以维持________。2(1)从近几年的高考命题情况看，考查点主要分布如下：①动物细胞培养与单克隆抗体的制备。②植物组织培养及其应用。③胚胎工程的操作流程及其应用。(2)细胞工程、胚胎工程与基因工程是现代生物科技的核心，在高考试题中多综合考查。4．细胞工程和胚胎工程都涉及细胞融合技术，下图表示细胞融合过程，请据图回答(1)要培育“白菜—甘蓝”杂种植株，在诱导融合前，需用________________去除白菜和甘蓝细胞的细胞壁，目的是_________________________________________________。(2)在单克隆抗体制备过程中，甲、乙两细胞分别是________和________，从融合细胞中挑选所需的杂交瘤细胞需经过________次筛选。(3)在胚胎工程中，从良种母牛采集的卵母细胞需要进行体外培育，其目的是________，从良种公牛采集的精子需________后才能进行受精作用。(4)在显微镜下判断卵子是否完成受精作用的标志是________________________________________________________________________________________________。5．美国研究人员宣布，他们利用人体皮肤细胞诱导培育出多能干细胞(iPS)，并成功分化出多种类型的视网膜细胞，这就意味着将来视网膜受损的患者可以利用自身皮肤细胞进行移植。请回答：(1)iPS细胞能分化出不同类型的视网膜细胞的根本原因是_____________________。(2)使用培养基培养胚胎干细胞时，通常加入________等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足O2的环境中，还要补充适量的CO2气体，CO2的作用是_______________________________________。(3)囊胚时，胚胎细胞开始出现分化，有些细胞较小，将来只能发育成胎膜和胎盘，这类细胞称为________。如果想通过代孕小鼠产生视网膜组织，应将iPS细胞注射到小鼠囊胚的________部位，以伴随其发育成某种组织。(4)在体外培养胚胎干细胞能否获得动物器官。________。为什么？________________________________。6．下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程，请据图回答下列问题：(1)在培育绿色荧光小鼠过程中，基因表达载体的构建是核心。一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、启动子、终止子和________等部分。(2)过程②常用的方法是________，过程③利用的生物技术是____________________________。(3)为迅速增加绿色荧光小鼠的数量，可采用试管动物技术，首先要做的是体外受精和早期胚胎培养，哺乳动物的体外受精主要包括________、________和受精等过程。(4)为提高胚胎的利用率，可采用________技术，应选择发育良好、形态正常的________或囊胚进行分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将________进行均等分割。答案选修三1.蛋白质工程组织细胞细胞核移植单克隆抗体受精移植2．目的基因基因文库PCR基因表达载体启动子标记基因限制性核酸DNA连接质粒农杆菌转化受体细胞显微注射感受检测鉴定DNA分子杂交抗原-抗体杂交3．脱分化愈伤再分化4．聚乙二醇（PEG）纤维素果胶植物组织培养5．原代传代胶原蛋白胰蛋白接触抑制6．细胞核移植胚胎移植7．抗原淋巴（浆）细胞融合灭活病毒杂交瘤单克隆8．体外受精早期胚胎培养胚胎移植9．同期发情超数排卵胚胎移植10．细胞核移植胚胎干细胞排斥反应12．生物多样性整体性系统整体性1答案：(1)人工原胰岛素目的(2)原胰岛素mRNA逆转录(3)特定的限制性核酸内切酶环状黏性(4)重组原胰岛素目的基因(5)目的基因导入受体细胞重组扩增2答案：(1)从cDNA文库中获取、从基因组文库中获取、人工合成目的基因或PCR合成(任选其中两项即可)耐热的DNA聚合酶(2)转化法氯化钙溶液(3)红霉素抗性基因红霉素(4)加速农药的分解，降低植物体内的农药含量，有利于保护环境和人体健康3答案：(1)改造基因易于操作且改造后能够遗传(2)限制性内切酶和DNA连接酶(3)体外培养和精子获能胚胎移植外源基因的插入导致胚胎正常发育所需的基因不能表达(4)CO2培养液中的pH4答案：(1)纤维素酶和果胶酶获得有活力的原生质体(2)经过免疫的B淋巴细胞骨髓瘤细胞两(3)使卵母细胞成熟(使卵母细胞获得受精能力)获能(4)在卵黄膜和透明带的间隙观察到两个极体5答案：(1)iPS细胞具有全能性(2)动物血清维持培养液的pH(3)滋养层细胞内细胞团(4)不能胚胎干细胞在体外培养条件下可以增殖而不发生分化6答案：(1)标记基因(2)显微注射技术动物细胞培养(或早期胚胎培养或受精卵培养)(3)卵母细胞的采集精子获能(4)胚胎分割桑椹胚内细胞团