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1 第二講種苗餌料生物培養第一節天然餌料與餌料生物培育種苗是否完全成功，其中一個重要因素端看培育過程中是否充分補充或存在著優勢優良品系之植物性餌料生物？這可由已研究的報告中（Aaronson et al ., 1980; Brown and Farmer 1994; Cho et al., 1997; Hodgosn et al., 1991; Kochert 1978）得知不同品系之餌料微藻對於培育生物角色的重要性，並且印證其特性不僅易為動物性餌料生物、仔稚魚、蝦及貝類等消化吸收，最重要的是其營養組成中含高度不飽和脂肪酸 EPA 或 DHA 可以提高培育生物的存活率及營養價值。目前國內水產種苗生產上應用最普遍且最受重視的餌料生物有微藻（包括擬球藻、周氏扁藻、骨藻及等鞭金藻）；海水輪蟲（Brachionus plicatilis）；豐年蝦及橈腳類。本章節將介紹上述植物性、動物性餌料生物之分類地位、生物特性、繁殖方式、培養方法，希望藉此能對水產養殖之種苗生產技術有所助益。一、認識天然餌料與餌料生物（一）天然餌料在自然棲息環境下能作為捕食者的攝食對象。（二）餌料生物能作為餌料的生物。（三）天然餌料生物在自然界中成為水棲生物攝食對象的活生物。（四）使用餌料的目的 1. 餌料生物 2. 人工飼料 (1) 培養設備與人力。 (1) 取得容易。 (2) 育苖飼育管理簡單。 (2) 易污染水質管理困難。 (3) 營養豐富。 (3) 營養不足或易變化。2 (4) 懸浮性佳大小適當。 (4) 懸浮性不佳。二、餌料生物之條件（一）體型微小的初期餌料尺寸適合仔稚魚的口徑及消化道，最好是形狀單純易碎者。（二）大量濃度培養增殖速率快，具爆發增殖特性、生活史短。（三）粗放式養殖（四）容易採獲不受天氣及地點限制（易於管理）最好養殖地區附近即有很多（五）符合仔魚之攝餌習性—具浮游性和緩慢運動性 1. 浮游性，不會沉底，可避免上層水域之魚無法捕食。 2. 魚苗喜食會動之生物。 3. 具有緩慢運動性較易引起魚苗之注意，魚苗才能追逐得上而捕食之。（六）具備可食性高消化率和營養價值高 1. 消化吸收容易。 2. 豐年蝦殼若魚苖食之易阻塞腸道而死。 3. 營養價值高的餌料若長期單獨使用易使魚苗營養失調。三、餌料生物之種類（一）植物性餌料擬球藻、周氏扁藻、骨藻、東港等鞭金藻、綠球藻 1. 擬球藻（Nannochloropsis oculata）細胞為小球體無鞭毛無眼點。 2. 周氏扁藻（Tetraselmis chui）3 體扁橢圓至卵圓體具四根頂生等長鞭毛，眼點位於中央。 3. 骨藻（Skeletonema costatum）細胞為透鏡形或圓柱形。 4. 東港等鞭金藻（Isochrysis galbana TK1）細胞單一會動呈橢圓形，前端稍扁平，後端圓背腹微扁。無細胞壁因此形態會變化。具有二根鞭毛，幾乎相等長。（二）動物性餌料豐年蝦、輪蟲、橈腳類。第二節植物性餌料培養技術一、擬球藻（Nannochrolopis oculata）（一）分類地位金藻植物門（Chrysophyta）真眼點藻綱（Eustigmatophceae）真眼點藻目（Eustigmatales）單株藻科（Monodopsidaceae）（二）生物特性 1. 一般習稱海水綠球藻（Marine chlorella）。 2. 細胞呈小球體，直徑約2~5微米，沒有鞭毛及眼點。 3. 外觀與綠球藻很相似，故稱之為擬球藻。 4. 光合色素為葉綠素a及類葫蘿蔔素violaxanthin（菫菜黃質）及vaucheriaxanthin （無節藻黃素）。 5. 發生於溫帶水域。 6. 含有豐富的不飽和脂肪酸（EPA:20碳5烯酸）。 7. 為培養輪蟲或二次培養的餌料生物，也是海水魚幼苗、貝類的幼生及稚貝或圖21擬球藻4 8. 真參幼生之餌料。 9. 與Pavlova salina（鹽生巴夫藻）等餌料生物併用，效果良好。（三）繁殖方式行二分裂生殖（binary fission），產生兩個子細胞（綠球藻則產生四個）。（四）培養方法 1. 溫度 10~35℃之範圍內均能。 25~31℃之增殖率為最高。 37℃之水溫環境中2~4小時仍可存活。 2. 鹽度 5~77ppt 範圍內均能增殖20~35ppt 為增殖最好條件 3. 光照度擬球藻喜強光照，增殖率會隨光照強度而增加，光照度200 μ mol photon m 2 s 1 時增殖率達最高，光照度至500 μ mol photon m 2 s 1 時仍可保持最高增殖率。 4. pH值以pH7.5~9.0之間增殖最好。 5. 肥料硫酸銨 60~66g/噸尿素 25~30g/噸過磷酸鈣 25~30g/噸室內保種培養，亦可利用市售植物肥料花寶4、5號培養。（五）培養流程 1. 培養槽之清洗5 例如：1 噸水加 100~200ml 工業用漂白水（有效氯 10%左右）消毒培養槽、打氣管及打氣石。 2. 藻源接種培養槽中加入過濾海水 ↓ 加入10ppm有效氯漂白水 ↓（隔夜）再加入10ppm（10g/噸）硫代硫酸鈉 Na2S2O3（海波） ↓（充分打氣）接藻（藻種與海水比例為1/1~1/5）（六）注意事項 1. 海水來源，切記測量鹽度。保特瓶須用鋁箔紙或保鮮膜蓋住，防止鹽度升高。 2. 隨時注意藻水是否有沉澱物，通常是藻種變差之前兆。 3. 氣泡細密微小，且略呈白色，不易揮發，表示藻體已有死亡，且釋出蛋白質現象，務必儘速換水。 4. 各微藻接種後約 7~10 日，藻色變濃時，一定要分養或稀釋或重新清洗培養器皿（保特瓶）。（七）簡易保種 1. 繼代培養液相及洋菜固相保存，兩者保存法所使用之培養液均為經 0.45 微米濾膜過濾後之市售花寶4號及 5號培養基。固相保存法洋菜（agar）濃度為1％，保種條件溫度設定為15℃，光週期8L/16D，光照強度54 μ mol photon m 2 s 1 。 2. 室內藻源保存擬球藻種與花寶 4 號及 5 號配製之海水培養液混合比例為 1：1~1：5，培養容器以寶特瓶或水族缸（3x5尺）即可，將之置於靠窗處接受自然光照，並施予打氣培養。6 3. 矽膠粒保種 (1) 藻類細胞濃縮擬球藻先於室內進行批次培養（batch culture），然後將藻種移株至新鮮培養液進行增量培養，不斷移株後培養 4~7 天，不再換水打氣，接著將藻水以離心方式（或濾膜過濾）濃縮，並以血球計數器計數控制藻體細胞濃度約在5×10 7 ~10 8 個/ml。 (2) 保護劑之製備將藻水濃縮後之上層液取出調配保護劑（10%脫脂奶粉）之用。保護劑最終濃度為5 ﹪脫脂奶粉。 (3) 矽膠粒之準備耐熱瓶加入約1/3~1/4 silica gel。（耐熱瓶30ml，須具耐熱螺旋蓋；矽膠、網孔6~22 mesh且不具指示劑）經175~180 ℃℃乾滅菌3 小時，冷卻後備用。 (4) 保種條件將濃縮之藻類細胞液與保護劑（10%脫脂奶粉）混合後，在冰浴下，將混合液均勻分布在每一顆矽膠表面。蓋子稍微鬆開15℃自然烘乾10到14天，直至矽膠結晶完全分離。再移至設為10~15℃、光週期8L/16D、光照度54 μ mol photon m 2 s 1 的培養箱中培養。亦可置於4℃下保存。 4. 固定化保種 4﹪褐藻酸鈉（Sodium alginate, Sigma）與藻類濃縮液以1：1混合，滴入4℃的0.2M CaCl2 溶液中，形成透明含有藻類細胞之膠粒，再將藻細胞膠粒移至培養箱中保種培養，條件為10~15℃、光週期8L/16D、光照度54 μ mol photon m 2 s 1 下。二、周氏扁藻（Tetraselmis chui）（一）分類地位綠藻植物門（Chlorophyta）綠色鞭毛藻綱（Prasinophyceae）圖22周氏扁藻7 團藻目（Volvocales）衣藻科（Chlamydomonadaceae）（二）生物特性 1. 形態特徵與特性 (1) 體扁，橢圓至卵圓形。 (2) 由正面觀察，兩端圓，前端稍平。 (3) 側面觀察，後端有些彎曲，具有4根等長的鞭毛。 (4) 游動細胞有強烈的趨光性。 (5) 打氣停止後約1小時內，游動細胞會群集於水面，可做為培養狀況優劣之參考。 2. 不動細胞 (1) 呈長橢圓形。 (2) 行分裂生殖後，母殼與鞭毛會沉積於池底，故培養約 7~10 天，底部會有一層沉積物，即是不動細胞。 (3) 在培養達增殖停滯期（stationary phase）或藻色不再變濃時形成。 3. 囊胞之形成 (1) 囊胞呈圓形。 (2) 可做為種源保存。 (3) 當藻水pH 9.0以上，或藻水老化時，囊胞（cyst）行有性生殖。（三）繁殖方式 1. 二分裂生殖。 2. 有性生殖。（四）培養方法 1. 溫度 15~30℃範圍內均能正常增殖。 25℃增殖最佳。8 15℃最差。 2. 鹽度 10~40ppt 中均能正常增殖。 20~40ppt 間無顯著差異。 30ppt 左右增殖最好。 3. 光照度在光照10~200 μ mol m 2 s 1 時，增殖率會隨著照度增加而增加。 4.肥料硫酸銨 60g/噸尿素 26g/噸過磷酸鈣 25g/噸室內保種培養亦可利用市售植物肥料花寶4、5號培養。 5. 培養流程培養槽中加入過濾海水 ↓ 加入10ppm有效氯漂白水 ↓（隔夜）再加入10ppm（10g/噸）硫代硫酸鈉 Na2S2O3（海波） ↓（充分打氣）接藻（藻種與海水比例為1/2~1/5） ↓ 施肥（五）注意事項 1. 海水來源，切記測量鹽度。保特瓶須用鋁箔紙或保鮮膜蓋住，防止鹽度升高。 2. 隨時注意藻水是否有沉澱物，通常是藻種變差之前兆。 3. 氣泡細密微小，且略呈白色，不易揮發，表示藻體已有死亡，且釋出蛋白質現象，務9 必儘速換水。 4. 各微藻接種後約 7~10 日，藻色變濃時，一定要分養或稀釋或重新清洗培養器皿（保特瓶）。 5. 打氣適量，不可太強。 6. 有游動細胞、不動細胞（呈橢圓形）、休眠孢子（呈圓形），孢子藻水澄清倒掉後，底部可能仍有休眠孢子。可取適當（少量）投入新鮮營養鹽中那可重新復育。 7. 欲重新接種時，應先停止打氣1小時後，取活動性力強，具趨光性，浮游於上層之藻細胞（此時呈雲霧狀）。 8. 對氯更敏感，其安全濃度為0.5ppm，因此，使用漂白水滅菌時，須小心殘留氯含量。 9. 施肥後5~7天，取游動力佳的上浮細胞做為種源，並移植至新槽培養，其他則1~3次用完。 10.周氏扁藻分裂時，母細胞鞭毛及外殼會脫落沉積於池底，因此，培養時間過久會影響水質惡化，且不利藻種增殖。 11.採用一次收穫方式培養較佳。（六）簡易保種 1. 繼代培養液相及洋菜固相保存，兩者保存法所使用之培養液均為經0.45微米濾膜過濾後之市售花寶 4 號及 5 號培養基。固相保存法洋菜（agar）濃度為 1%，保種條件溫度設定為 15℃，光週期8L/16D，光照強度54 μ mol photon m 2 s 1 。 2. 室內藻源保存周氏扁藻藻種與花寶 4 號及 5 號配製之海水培養液混合比例為 1：1~1：5，培養容器以寶特瓶或水族缸（3x5尺）即可，將之置於靠窗處接受自然光照，並施予打氣培養。 3. 矽膠粒保種 (1) 藻類細胞濃縮—周氏扁藻先於室內進行批次培養（batch culture），然後將藻種移株至新鮮培養液進行增量培養，不斷移株後培養 4~7 天，不再換水打氣，接著將藻水以離心方式（或濾膜過濾）濃縮，並以血球計數器計數控制藻體細胞濃度約在5×10 7 ~10 8 個/ml。10 (2) 保護劑之製備—將藻水濃縮後之上層液取出調配保護劑（10%脫脂奶粉）之用。保護劑最終濃度為5%脫脂奶粉。 (3) 矽膠粒之準備—耐熱瓶加入約1/3~1/4 silica gel。（耐熱瓶30ml，須具耐熱螺旋蓋；矽膠、網孔6~22 mesh且不具指示劑）經175~180 ℃℃乾滅菌3小時，冷卻後備用。 (4) 保種條件－將濃縮之藻類細胞液與保護劑（10﹪脫脂