致病性微生物的实验诊断学基础

1致病性微生物的实验诊断学基础浙江省医学科学院何浙生2一、常见细菌性传染病的病原学及血清学诊断基础法定细菌性传染病种类：甲类传染病：鼠疫、霍乱；乙类传染病：细菌性痢疾、伤寒和副伤寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹伤寒；丙类传染病：肺结核、麻风病、感染性腹泻。3采样注意事项：时间性针对性防护与消毒无菌操作标记昆虫、动物标本4临床与尸解取材参考表病人取样解剖取样————————————————————————————待诊血尿便痰唾咽脑腺局肝脾肺肠淋骨脑病种液洗脊穿部巴髓液液液穿结刺——————————————————————————————————斑疹伤寒+++鼠疫+++++++++++++++霍乱+++炭疽++++++++++++++++布病+++++++++伤寒、副伤寒+++++++痢疾++肉毒毒素中毒+钩体病++++———————————————————————————————————注:++代表一定要取样，+代表亦应取样5样品保存：冷藏保存保存液保存6标本运送：严格包装，外表消毒，编号，登记，贴标签，严防容器破碎、滴漏，避免活标本逃逸等；附送检单，填明名称、数量、地点、时间等；专人护送，不要委托携带，尽快到达目的地；妥善保存，运送途中避免高温、日光、过度震动等。7非污染材料检验程序动物非污染样品保存一部分(以备再查)血清学检查镜检细菌培养查Ag查Ab染色及非染色免疫荧光镜检鉴定镜检分菌血清学检验G染色及其他染色免疫荧光G染色及其他染色免疫荧光镜检鉴定查抗原查抗体8被污染材料检验程序样品处理污染样品保存一部分(以备再查)上清或滤过液(病毒)沉淀物或滤阻物(经一定稀释)接种小鼠︹查肉毒毒素︺接种幼猫︹查葡萄球菌肠毒素︺乳鼠.鸡胚.组织培养︹病毒、立克次体等︺细菌培养查抗原CFT协同SAT反向HATHAIT等镜检动物细菌培养G染色及其它染色IFT查抗原查抗体分菌镜检鉴定9细菌病原学诊断检样处理一般样品处理：包括洗脱、提取、浓缩和抗杂菌等；节肢动物标本处理蚤类：制作标本时挤出前胃，涂片，分菌时可用单体也可用群体，研碎后接种培养。蜱：用消毒液浸洗后研磨，分菌。蝇：用选择性增菌液洗，培养洗液。蚊：对细菌性传染病意义不大，主要时对病毒性传染病意义较大10病原鉴定菌属的确定细菌种型的确定细菌染色细菌生化反应试验糖代谢试验有机酸、铵盐反应蛋白、氨基酸、含氮化合物呼吸酶类试验毒性酶类试验胆汁（胆盐）溶菌试验11血清学诊断基础知识（1）抗原、抗体和补体抗原:完全Ag、半Ag、构成Ag条件，医学上主要Ag类别、共同Ag与异嗜性Ag；抗体:基本结构、特点、功能、类别等；补体:概念、组成、功能12血清学诊断基础知识（2）抗原、抗体结合原理13血清学诊断基础知识（3）抗原、抗体反应特点特异性阶段性比例性可逆性14血清学诊断基础知识（4）抗原、抗体反应影响因素AgAb电解质温度pH15血清学诊断基本方法：玻片凝集试验试管凝集试验抗球蛋白凝集试验补体结合试验ELISA试验琼脂扩散试验免疫荧光试验16二、常见病毒性传染病的实验诊断学基础法定病毒性传染病种类：（甲类传染病）乙类传染病：病毒性肝炎、艾滋病、脊髓灰质炎、麻疹、流行性出血质热、狂犬病、流行性乙型脑炎。丙类传染病：流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹骊、急性出血性结膜炎。17临床诊断血清学诊断实验室诊断病毒学诊断分子病毒学诊断病毒性疾病的确诊临床诊断＋实验室诊断病毒病的诊断18采样标本血液脑脊液粪便咽分泌物（咽拭子）尿疱疹液结膜拭子痰、鼻分泌物尸检：脑、肝、肺、肾、心、胃、淋巴结等器官活检：病变器官19基本方法：鸡胚•病毒培养与分离动物细胞•细胞阳性的判断尿液中抗原阳性鸡胚绒毛尿囊膜的病变死亡动物发病与死亡培养液PH变化细胞干扰试验CPE•鉴定病毒加标准血清后的中和试验含抗原材料的抗原性检测•电子显微镜病毒检测病毒学检诊201、查抗体IgG——早期及恢复期；IgM——4周内；IgA——2～8周。基本方法：血凝抑制试验（例如流感、麻疹等）间接血凝抑制试验对流电泳琼脂扩散试验补体结合试验酶标抗体染色试验ELISA试验免疫萤光试验中和试验等血清学检诊21基本方法：血凝试验间接血凝试验血球吸附试验琼脂扩散试验对流电泳试验免疫萤光试验ELISA试验中和试验同位素查抗原22分子病毒学诊断方法基本方法：•蛋白印迹法•核酸杂交试验•聚合酶联扩增试验•病毒基因序列测定