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第1页，共13页1江苏农林职业技术学院毕业设计（论文）SNL/QR7.5.4-3菊花嫩茎快繁技术的研究专业生物技术及应用学生姓名吴黎平班级生物技术及应用(2)班学号061401208指导教师黄小忠完成日期2009.6第2页，共13页2成绩评议学号姓名题目指导教师建议成绩：评阅教师建议成绩：答辩小组建议成绩：院答辩委员会评阅意见及评定成绩：答辩委员会主任签字（盖章）：年月日附2：第3页，共13页3毕业设计（论文）任务书姓名吴黎平学号061401208班级06生物技术及应用（2）题目菊花嫩茎快繁技术的研究设计(论文)主要内容配制培养基（包括：诱导培养基，继代培养基，生根培养基。）先配制诱导培养基→组培室消毒（超净工作台紫外消毒20min）→菊花嫩茎消毒处理→实验准备→实验操作(初代培养,继代培养,生根培养)→观察并记录数据和现象→实验中可能出现问题的处理→实验室培养的苗移栽到适用田。重点研究问题怎样避免或减少褐变的机率，怎么样降低污染率。激素在不同时期对其起到什么作用。光照，温度对其有什么影响。不同品种的菊花其生长环境有什么不同。培养因素对菊花组织的影响。6BA和NAA对菊花叶片分离再生的影响等.主要技术指标配置标准的母液，配置培养基，PH及培养基的浓度，灭菌锅的正确操作，超净工作台的操作及无菌操作。诱导培养的成活率，继代培养的成活率及最终长成小苗的比例。对其生长环境的掌握程度。其它要说明的问题茎老发生褐变，真菌污染，操作不当、讲话导致细菌污染。灭菌出错，培养基出现问题（包括灭菌时中途打开灭菌锅在里面加东西，操作失误等）。不同的菊花的生长条件不同等。指导老师意见指导教师签字：年月日第4页，共13页4指导教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩优良中及格不及格指导教师签字年月日评阅教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩优良中及格不及格评阅教师签字年月日吴黎平:菊花愈伤组织快繁技术的研究第5页，共13页答辩小组评议意见学号姓名题目答辩小组意见：1、对论文的评价2.建议成绩等级优良中及格不及格3.需要说明的问题答辩小组长签字年月日江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第6页，共14页菊花嫩茎快繁技术的研究06生物技术及应用（2）班吴黎平指导老师：黄小忠摘要：先实验前的准备工作，然后选取菊花，以带顶芽的嫩茎为外植体接种到诱导培养基中，放在培养室里培养并观察，一周后长出丛生芽，再没有污染的丛生芽在无菌超净工作台上用手术刀切成多块，再将丛生芽接到继代培养基中进行继代培养，当发现初步长出嫩根时，将无污染的带根的丛生芽接到生根培养基中，当生长成幼苗时将生根试管苗开盖练苗,移栽。及在培养过程中遇到的问题。关键词：菊花；组织培养；褐变；脱毒；外植体RapidPropagationofChrysanthemumtenderstemResearchAbstract:Testsbeforefirstthepreparatorywork,thentheselectionchrysanthemum,plantsthebodytakethebeltterminalbudtenderstemasoutsidetovaccinateintheinductionculturemedium,placesintheraiseroomtoraiseandtoobserve,afteraweekislonggrowsthicklythebud,thendoesnothavethepollutiontogrowthicklythebudtosliverthemulti-blocksontheasepsisultraonlyworktablewiththescalpel,thenwillgrowthicklythebudgraftingtocontinueinagenerationofculturemediumtocarryoncontinuesagenerationofraise,whendiscoveredwhenatthebeginningofthelengthofstridewillleavethetenderroot,willnothavethepollutionthebeltroottogrowthicklythebudgraftingtotakerootintheculturemedium,whenwillgrowtheseedlingwilltakerootthetesttubeseedlingtouncappracticestheseedling,willtransplant.Andquestionwhichmeetsintheraiseprocess.Keyword：Chrysanthemum;Tissueculture;Turningbrown;Escapesthepoison;Outsideplantsthebody吴黎平:菊花愈伤组织快繁技术的研究第7页，共13页目录1．材料和方法………………………………………………………………81．1材料与用具……………………………………………………………81．2培养条件………………………………………………………………91．3实验前的准备工作……………………………………………………91．3．1培养基配制…………………………………………………………91．3．2接种室的灭菌………………………………………………………91．3．3超净工作台及器械消毒……………………………………………91．3．4材料选取……………………………………………………………91．3．5材料灭菌……………………………………………………………91．4接种……………………………………………………………………101．5诱导侧芽生长……………………………………………………………101．6继代培养………………………………………………………………101．7诱导生根………………………………………………………………101．8移栽培养………………………………………………………………102结果与分析…………………………………………………………………102.1初代培养…………………………………………………102.2继代培养…………………………………………112．3生根诱导及移栽…………………………………………………………112．4细菌、真菌污染及防治………………………………………………………123.讨论………………………………………………………………………12参考文献……………………………………………………………………13致谢………………………………………………………14江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第8页，共14页菊花又称“菊”、“秋菊”、“黄花”,为菊科菊属的多年生宿根草本植物或半灌木,是原产于我国的十大传统名花和世界最主要的切花之一,主产于浙江、江苏,在四川、安徽、河南、山东等省也有栽培。杭菊、亳菊、贡菊、滁菊、祁菊、怀菊、济菊、黄菊为我国药用菊花的八大主流商品。菊花株高80～120cm左右,茎直立,基部木质化,上部多分枝,枝略具棱,是典型的温带短日照植物。在短日照下能提早开花,喜阳光忌荫蔽,较耐旱、忌涝;喜温暖湿润气候,但也能耐寒,严冬季节根茎能在地下越冬,花能经受微霜,但幼苗生长和分枝孕蕾期需较高的气温,最适生长温度为20℃左右。菊花的再生能力强,采用扦插法繁殖操作简便,易于成活,且没有季节限制,全年均可进行。菊花味甘、性寒,在明代李时珍的《本草纲目》中载有“利五脉,调四肢,治头目风热,脑骨疼痛,养目血,去翳膜,主肝气不足”的功效[1]，且具有很强的抗菌作用,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等有很强的抑杀作用，常用于治疗心胸烦热、疔疮、偏头痛、冠心病、乳腺炎、扁桃炎等疾病,可降低血液中的血脂和胆固醇,预防心脏病的发生,并能增强身体的免疫能力。其花中主要含有挥发油、龙脑、乙酸龙酯、矢车菊甙、绿原酸、维生素、黄酮类物质、微量元素硒等,具有清除人体中超氧离子自由基及抗衰老、增加机体免疫力的生理活性作用。现代研究表明,菊花花瓣中不仅含有多种营养物质,它还有食用、药用等多种价值,有抗病毒、抗炎、抗氧化、抗HIV和癌细胞的成分、舒血管、降血压、降血脂、抗肿瘤等多种药理作用。菊花的主要繁殖方法有扦插繁殖、分株繁殖、压条繁殖、嫁接繁殖等,这些方法均存在一定程度的缺点与不足,主要表现为繁殖速度不快、病虫害发生频率高、易受季节变化影响等等,尤其在北方地区冬季严寒,夏秋季为主要绿化季节,冬春季节为育苗季节,相对来说任务重,成本高。随着组培技术的发展,其快速、高效、保优等都将改变这种不足,因此推动菊花走向组培育苗的道路在北方地区有着广阔的前景。利用组织培养技术进行菊花的快速繁殖,则可有效解决上述问题与矛盾,已越来越成为菊花繁殖的重要方法与手段,在菊花种苗生产上加以推广应用。现在生产上多用扦插和嫁接繁殖,但该方法大面积绿化使用时成苗慢,根据植物细胞全能性,利用组织培养方法，在短时间内将体细胞培养出大量植株,在农业生产中有着非常大的推广潜力与意义。栽培技术在菊花科研中占据着重要的地位,已成为人们研究的重点；其中人们更侧重于成分提取与分析研究,人们已经意识到菊花的化学成分、色素研究对开发其有效成分有重大意义[2]。1.材料和方法1.1材料与用具植物材料：菊花嫩茎。器材与用具：超净工作台、解剖刀、长柄镊子、架台、无菌滤纸、酒精灯、火柴、标签、棉球、废液缸、垃圾袋、皮筋、精密pH试纸（5.4～7.0）、玻璃三角瓶（150ml）、吴黎平:菊花愈伤组织快繁技术的研究第9页，共13页封口膜、培养皿。药品与试剂：MS培养基母液、激素(生长素、细胞分裂素等)母液、有机物（琼脂、蔗糖）、无菌水、0.1%升汞、70%、75%酒精、0.1MNaOH。1.2培养条件适宜的温度范围为24～26℃，28℃培养时生长快但增殖倍数低,26℃时增殖倍数最高,但温度在27～29℃时,玻璃化现象较为严重。[3]为了减轻试管苗玻璃化现象我们在培养基中添加活性碳，而添加水解酪蛋白则使玻璃苗百分率增加。培养基pH值对玻璃苗发生也有影响，在pH5.8～7.0范围内，玻璃苗百分率以pH6.2时最高，pH7.0时最低；培养过程中注意通气以尽可能降低培养容器内的空气相对湿度和改善氧气供应状况，有助于克服玻璃化光周期:以12～16h/d为宜。在愈伤诱导期进行适量的暗培养,有促进愈伤形成的作用。光照强度。范围为1000～4000lx,较多选择1500～2000lx。4000～5000lx的光照使试管苗的分化增殖倍数提高,但对生根则相反。白色光一般能满足生长需要。1.3实验前的准备工作1.3.1培养基配制表-1培养基制作配比灭菌条件为0.11MPA，120min。在煮琼脂时要把握好时间，不宜过长以免糖分受热分解，导致灭菌好的培养基发黄。灭菌前要检查灭菌锅是否缺水，灭菌时要正确操作，灭菌一定要彻底，中途期间不要打开灭菌锅。1.3.2接种室的灭菌在实验的前一天,将接种室用高锰酸钾和甲醛熏蒸进行灭菌消毒。1.3.3超净工作台及器械消毒启动超净工作台,操作之前用70%的酒精擦台面。将操作用刀、镊子、剪子等用具在酒精灯下用火灼烧到变红,冷却待用。1.3.4材料选取选取在脱毒实验中成功移栽上盆而且长势健壮的植株作为实验材料,选取茎作为实验材料[8]。1.3.5材料灭菌选取生长健壮的嫩茎洗去表面泥土,在超净工作台,用75%酒精处理20～30秒,培养基配比蔗糖琼脂pH丛生芽诱导MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8继代培养MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8生根培养1/2MS+NAA0.2mg/L3%0.7%5.8江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第10页，共14页再用无菌水冲洗3～5次,转入0.1%升汞溶液浸泡8～10分钟,再用无菌水冲洗4～6次,用滤纸吸干水分。1.4.接种在无菌条件下将其切