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第1页，共13页1江苏农林职业技术学院毕业设计（论文）SNL/QR7.5.4-3菊花茎段快繁技术专业生物技术及应用学生姓名朱杰班级06生物技术及应用（2）班学号061401205指导教师宋刚完成日期2009-6-4江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第2页，共13页2成绩评议学号061401205姓名朱杰题目菊花茎段快繁技术指导教师建议成绩：评阅教师建议成绩：答辩小组建议成绩：院答辩委员会评阅意见及评定成绩：答辩委员会主任签字（盖章）：年月日附2：第3页，共13页3毕业设计（论文）任务书姓名朱杰学号061401205班级06生物技术及应用（2）班题目菊花茎段快繁技术设计(论文)主要内容1.初代培养：如何选择适当的培养基、如何添加适当比例的激素、及如何选择合适的外植体(茎段)、外植体生长情况（丛生芽）；2.继代/生根培养：如何选择适当的培养基、如何添加适当比例的激素、丛生芽生长情况（生根成苗）等；3.初代/继代/生根培养过程中，是否染菌、死亡、褐变等并如何处理及分析。重点研究问题1.培养基配方比例；2.培养时，初代、继代培养数据统计及其结果分析；3.染菌、褐变等处理分析主要技术指标植体处理达标、培养基灭菌彻底、确保无菌接种操作、合理的培养环境其它要说明的问题指导老师意见指导教师签字：年月日江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第4页，共13页4指导教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩优良中及格不及格指导教师签字年月日评阅教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩优良中及格不及格评阅教师签字年月日附4：第5页，共13页5答辩小组评议意见学号姓名题目答辩小组意见：1、对论文的评价2.建议成绩等级优良中及格不及格3.需要说明的问题答辩小组长签字年月日江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第6页，共13页6菊花茎段快繁技术摘要：以菊花茎段作为外植体，在初代丛生芽诱导培养基、继代培养基、生根培养基上先后诱导产生愈伤组织、丛生芽、根，最后完成植株再生。同时并对每个环节存在问题进行研究分析、整理，从而总结出适合菊花茎段快繁的最佳方法。关键词：菊花；外植体；快速繁殖；Abstract:Asachrysanthemumstemexplants,theearlygenerationofproblemsinthebudinductionmedium,subculturemedium,therootingmediumhasinducedcallus,multipleshootclumps,roots,andfinallythecompletionofplantregeneration.Atthesametimethereareproblemsthateachandeveryaspectoftheanalysis,sorting,andtosummarizefortherapidpropagationofchrysanthemumstemthebestway.Keywords:Chrysanthemum;Explant;RapidPropagation朱杰菊花茎段快繁技术第7页，共13页7目录1.材料与方法……………………………………………………………………………91.1材料及预培养………………………………………………………………………91.1.1材料………………………………………………………………………………91.1.2预培养……………………………………………………………………………91.2实验设计和处理方法………………………………………………………………91.2.1培养基的制作与装瓶灭菌………………………………………………………91.2.2接种室、器械及超净工作台灭菌………………………………………………91.2.3外植体的选择与灭菌……………………………………………………………101.2.4接种………………………………………………………………………………101.2.4初代（丛生芽诱导）培养………………………………………………………101.2.5继代培养…………………………………………………………………………101.2.6生根培养…………………………………………………………………………101.2.7试管苗的移栽……………………………………………………………………102.结果与分析……………………………………………………………………………112.1初代、继代培养结果处理…………………………………………………………112.2结论分析……………………………………………………………………………112.2.1继代培养扩大增殖方法…………………………………………………………112.2.2细菌、真菌污染及防治…………………………………………………………112.2.3褐变及其防治……………………………………………………………………122.2.4玻璃化及其防治…………………………………………………………………123.讨论…………………………………………………………………………………124.小结……………………………………………………………………………………13参考文献………………………………………………………………………………13致谢………………………………………………………………………………………13江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第8页，共13页8菊花（ChrysanthemummorifoliumRamat.）是菊科菊属的多年生宿根草本植物。株高20－200cm，通常30－90㎝。茎色嫩绿或褐色，除悬崖菊外多为直立分枝，基部半木质化。单叶互生，卵圆至长圆形，边缘有缺刻及锯齿。头状花序顶生或腋生，一朵或数朵簇生。舌状花为雌花，筒状花为两性花。舌状花分为下、匙管、畸四类，色彩丰富，有红、黄、白、墨、紫、绿、橙、粉、棕、雪青、淡绿等。筒状花发展成为具各种色彩的托桂瓣，花色有红、黄、白、紫、绿、粉红、复色、间色等色系。花序大小和形状各有不同，有单瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有长絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和实心；有挺直的和下垂的，式样繁多，品种复杂。在我国有着悠久的栽培历史[2]。菊花主要靠扦插繁殖,也可进行嫁接繁殖。但扦插和嫁接繁殖均需较多的母株材料,且受季节和外界环境条件的限制,繁殖速度较慢,对于一些名贵菊花品种和母株来源不足的品种,更不能及时满足生产和市场的需要。研究和利用组织培养方法来繁殖菊花，可以在短期内大量繁殖，使得工厂化育苗成为可能，且利于新品种选育、脱毒复壮、种质资源保存等。菊花利用植物组培技术，可以使用菊花的茎尖、茎段和侧芽作为主选外植体,在不同激素水平的培养基上诱导产生愈伤组织、丛生芽和根,完成植株再生。本文以在脱毒实验中成功移栽上盆且长势健壮的普通观赏菊花的带腋芽茎段为研究材料，从菊花丛生芽诱导、继代、生根培养着手研究，以期寻求低成本、高效、稳定的菊花茎段增殖方法，提高其商品化生产效率，满足菊花种苗商品化生产的要求[9]。1.材料与方法1.1材料及预培养1.1.1材料：供试材料为脱毒实验中成功移栽上盆且长势健壮的普通观赏菊花。1.1.2预培养：将供试盆栽菊花移至室内阳光充足处正常恒温培养5~7天。1.2实验设计和处理方法1.2.1培养基的制作与装瓶灭菌均以MS培养基为基本培养基，附加不同生长激素等配置而成。根据实际要求，培养基制作[7]见下表：表-1培养基制作配比培养基配比蔗糖琼脂pH丛生芽诱导MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8继代培养MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8生根培养1/2MS+NAA0.2mg/L3%0.7%5.8将已配好的培养基，趁热分装在培养瓶中（每瓶35~50ml），用专用透性膜封好后放入高压灭菌锅中灭菌、待用。朱杰菊花茎段快繁技术第9页第9页，共13页91.2.2接种室、器械及超净工作台灭菌[6]接种室的地面、墙壁要擦洗干净，接种前用甲醛或高锰酸钾稀溶液熏蒸，也可以采用紫外灯灭菌。所需器械先用70%酒精浸泡，待接种前在酒精灯下用火灼烧到变红，冷却待用。超净工作台启动前，先用70%酒精擦拭台面，再打开紫外灯照射20min,同时打开风机。接种前关闭紫外灯，打开日光灯。1.2.3外植体的选择与灭菌选用菊花的带腋芽茎段作为外植体。选取生长健壮的嫩茎先用洗衣粉水冲洗2次，再用自来水冲洗2次，以洗去表面泥土杂质为标准。然后移至超净工作台上,用75%酒精处理20～30秒,再用无菌水冲洗3～5次,转入0.1%升汞溶液浸泡8～10分钟,再用无菌水冲洗4～6次,用滤纸吸干水分，最后将材料放入无菌的锥形瓶中封口待用。1.2.4接种在超净工作台内，点燃酒精灯,并在酒精灯旁边工作,注意手和衣袖与酒精灯保持适当的距离,以免烧伤。在酒精灯上将操作用具烧红,待温度降至常温时进行操作。将选取用的外殖体材料切成0.5~1厘米左右带有腋芽的小段。用镊子夹取切好的外殖体材料,按极性方向直立迅速接种到锥形瓶的培养基中,深约2~3mm,注意培养瓶口始终在火焰下方,尽量使切口接触培养基。每个锥形瓶可接种3～4块外殖体。接种时锥形瓶应保持倾斜,接种后要迅速将瓶口在酒精灯上转动灼烧一遍进行消毒,然后迅速盖上专用透性膜封好。最后在瓶壁上上标签,注明接种材料的名称、编号和接种日期。1.2.4初代（丛生芽诱导）培养接种完成后即转入培养室，即进行初代（丛生芽诱导）培养。培养温度22~28℃，光强1000~4000Lux。外植体接种到培养基上７天左右，茎段开始变粗，基部逐渐增大，并在其切口周围出现少量嫩绿色、质地紧密的愈伤组织，同时茎尖也逐渐伸长，腋芽开始萌动展开。经过10~15天的培养后，腋芽伸长，并形成丛生芽，逐渐长成苗丛。1.2.5继代培养当丛生芽长至1厘米长时，在超净工作台上将芽从中的小芽切割开，分别转入相同的新鲜培养基上继代增值，每一个小芽又会以同样的繁殖系数产生芽从。培养温度22~25℃，光强2500~4000Lux。一般继代培养的次数越多，从接种到长出丛生芽所需的时间越短，但不短于7天，若不及时转接，芽苗会迅速长高。如此反复，在短时间内就可以繁殖出大量的无根苗。1.2.6生根培养[3]当丛生芽长成的小苗达2—3厘米时，在超净工作台上将其切下转入生根培养基中诱导生根。培养温度22~25℃，光强2500~4000Lux。大约7~10天左右的培养，小苗开始出现大量小根，最后有1~6条根可长的较长，芽苗也迅速长高。1.2.7试管苗的移栽芽苗生根后已在生根培养基上长至5cm左右，可将瓶塞打开，让其由无菌环境转至有菌且湿度较低的环境之中约3~5天后，便可进行移栽，移栽初期注意遮光。大规模的室外移栽需要在苗床上进行,包括整地、移栽、管理等环节。江苏农林职业技术学院毕业论文（设计）第10页，共13页102.结果与分析本文实验因时间限制，初步完成了菊花茎段从初代到继代的培养过程，并对生根培养进行了理论分析，同时对初代、继代培养的实验数据进行了完善的统计。2.1初代、继代培养结果处理：表-2初代培养记录表：次数接种量真菌污染细菌污染褐变玻璃化正常成活率160127623355%2601013812847%360910203965%460119313660%统计：240423919413657%表-3继代培养记录表：次数接种量真菌污染细菌污染褐变玻璃化正常成活率1992130304545%2841527004250%31171833036354%41082433304844%统计：408781236319849%成活率=正常/接种量×100％2.2结论分析：2.2.1初代、继代培养结果统计表-4初代、继代培养数据统计培养类型7天生长情况14天生长情况21天生长情况28天生长情况初代培养茎段变粗，切口出现少量嫩绿色愈伤组织腋芽开始萌动，部分已有丛生芽形成丛生芽大量形成，部分已长成苗从苗从长势良好，可以做继代培养继代培养