门太阳马生物工程有限公司

厦门太阳马生物工程有限公司XiamenSunmaBiotechnologyCo.,Ltd.电话：0592—39236783923688传真：0592—3923698邮编：361006电子邮件：[e-mail]网页：介绍基因转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNAinterference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控、基因功能、信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。梭华-SofastTM是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，梭华-SofastTM具有高效率转染所必备特征，梭华-SofastTM能与带阴离子的反义寡核苷酸形成稳定的复合物，形成的复合物通过内吞等作用进入细胞内，并释放出反义寡核苷酸，后者选择性抑制或调节基因表达。梭华-SofastTM的细胞毒性很低，这是它的另一个重要特点；而且与其它转染试剂相比，梭华-SofastTM很稳定，不被血清清除。以上优点使得基因转染的操作简便易行，重复性好。梭华-SofastTM已被成功应用于很多原代培养细胞和转化细胞株的基因转染。2.储存梭华-SofastTM(5.0mg/ml)在室温下运输，试剂到时请即存放于+4℃，在+4℃可存放一年以上。使用前请轻轻摇匀。3.转染操作规程(贴壁细胞的转染*)3.1细胞接种为了获得最好的转染效率，细胞密度应该50-80%，这因细胞株的不同而变化，对最常用的细胞株建议细胞密度60-70%。对于24孔板，最理想条件是在转染前18-24小时，每孔接种8×104～2.0×105个细胞。然而，在多数情况下，如果在细胞贴壁后(接种几小时后)即进行转染，也可以得到相近的结果。对细胞毒性不敏感的细胞株可在细胞接种后立即进行转染。表1列举了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。厦门太阳马生物工程有限公司XiamenSunmaBiotechnologyCo.,Ltd.电话：0592—39236783923688传真：0592—3923698邮编：361006电子邮件：[e-mail]网页：不同细胞培养装置的推荐细胞数量细胞培养装置每装置面积(mm2/孔或皿)细胞数量细胞培养液总体积μl/孔或皿96孔板501.5～5.0×104100μl48孔板1003.0×104～1.0×105200μl24孔板2008.0×104～2.0×105500μl12孔板4011.6～4.0×1051.0ml6孔板9623.0～8.0×1052.0ml35mm培养皿9623.0～8.0×1052.0ml60mm培养皿28271.0～2.5×1066.0ml100mm培养皿78542.5～6.4×10610.0ml3.2梭华-SofastTM/寡核苷酸复合物的制备(以24孔板转染为例)3.2.10.5µg寡核苷酸质粒稀释于30µl不含血清和抗菌素的DMEM中，轻轻混匀。注:optiMEM(Invitrogen)、PBS缓冲液或150mMNaCl也能用于稀释寡核苷酸和转染试剂。3.2.21-1.5µl梭华-SofastTM稀释于30µlDMEM中，轻轻混匀。3.2.330µl梭华-SofastTM稀释液滴加到寡核苷酸稀释液中，一边滴加一边混匀。注意:两种溶液的混合顺序对转染结果非常重要，切勿颠倒滴加顺序。3.3室温孵育15-20分钟。3.460µl梭华-SofastTM/寡核苷酸复合物加到每孔中并轻轻摇动使均匀混合。3.5放置37oCCO2孵育箱孵育24-48小时后，分析基因表达情况。*悬浮细胞转染在细胞种植1小时后，以同样方法加入梭华-SofastTM/寡核苷酸复合物，轻轻摇动使均匀混合，继续孵育24-48小时后，分析基因表达情况。表2．寡核苷酸数量与梭华-SofastTM用量配比厦门太阳马生物工程有限公司XiamenSunmaBiotechnologyCo.,Ltd.电话：0592—39236783923688传真：0592—3923698邮编：361006电子邮件：[e-mail]网页：–1.512-–323-–647-–9610-–1440-mer52-–3104-–6208-–104018-–204.问题与解决方法问题评论与建议转染效率低1.优化用于转染的寡核苷酸用量2.细胞生长状态欠佳—建议保证细胞密度和形态是最佳的。3.梭华-SofastTM/寡核苷酸比率未优化—优化梭华-SofastTM/寡核苷酸比率(重量比从16:1到4:1)。细胞毒性太大1.接种前，细胞的健康状况直接影响细胞毒性。2.基因转染时细胞密度不合适会引起细胞毒性。3.保持梭华-SofastTM/寡核苷酸比率的同时减少寡核苷酸的数量。4.对某些敏感的细胞株减少梭华-SofastTM/寡核苷酸复合物的培养时间。7.质量保证太阳马生物工程有限公司对梭华-SofastTM基因转染试剂的每批产品实行严格质量检验，并进行转染验证，以确保其产品质量，提供技术支持。如厦门太阳马生物工程有限公司XiamenSunmaBiotechnologyCo.,Ltd.电话：0592—39236783923688传真：0592—3923698邮编：361006电子邮件：[e-mail]网页：该试剂存在质量问题，而非操作不当造成，本公司将免费提供更换或退回货款。请用户使用前务必认真阅读本手册。国内用户订货，保证4天内可到货。中国厦门留学人员创业园创业大厦ChuangyeBuilding,XiamenPioneeringPark,Xiamen,China