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附件3：生物化学实验教学大纲生物化学实验教学大纲课程名称:生物化学实验适用专业及年级：海洋学院生物科学和技术专业二年级一、实验教学目标与基本要求全面加强学生对生物化学实验技术的的了解和掌握,要求学生通过本实验教学的学习,进一步加深和巩固理论知识的学习,较好地掌握各类生物化学实验操作和技能。二、编写原则和说明1．依据本科教学大纲的基本要求和山东省2005生物科学实验示范中心规定项目。结合我院实际情况二制定本实验大纲。大纲中有必做和选做两部分内容，其中必做实验有基础和提高性实验两部分，学时大约是74学时。是每一位学生必须完成的实验项目；选做实验包括提高和创新实验两部分，学时为72学时。是生物化学技术课程中学生独立进行实验、进行开放研究型教学所列题目，也供其他学生进行提高实验技能的选做题目。2．表中序号是按课程进度和实验技能训练进程安排的。3．类别栏中的不开放和开放是指实验室开放与否。不开放是完全在老师指导下、在规定时间内完成的项目；开放是在老指导下，学生在课余时间完成的项目。二、实验课程内容和学时分配序号题目学时实验目的要求性质类别所需主要仪器和试剂1实验准备及安全教育4进行使用分组,每组配备一套实验器皿。安全教育要求学生注意安全用电、防火知识的了解,易燃、易爆及有毒药品的安全使用,正确及安全的使用各类仪器设备。必做基础不开放2氨基酸的纸上层析41.学习氨基酸分析方法的一种。2.掌握层析技术及原理。必做基础不开放仪器：1.层析装置2.吹风机3.点样器4毛细管5层析滤纸等试剂：1.展层剂（正丁醇、醋酸、茚三酮）2.各种氨基酸3蛋白质的性质实验(一)41.了解蛋白质的一些颜色反应。2.学习几种常用鉴定蛋白质的方法。必做基础不开放仪器：1.水浴锅2.常规玻璃仪器试剂：1.蛋白质2.尿素3.氢氧化钠4.硫酸5.硝酸6.硫酸铜8茚三酮9.冰乙酸10.乙醇11.氨基酸12.考马斯亮兰13.乙醇14.磷酸等4蛋白质的性质实验(二)41.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。2.了解蛋白质变性与沉淀的关系。3.加强盐析的认识必做基础不开放仪器：1.水浴锅2.常规玻璃仪器3.温度计试剂：1.乙酸2.乙酸钠3.硫酸铵4.硝酸银5.三氯乙酸6.氯化钠7.盐酸8.碳酸钠9.甲基红10酪蛋白11.磺基水杨酸12.乙醇13硫酸铵14氯化钡153，5—二硝基水杨酸等5血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳4学习醋酸纤维素薄膜电泳的原理及操作技术。必做基础不开放仪器：1.电泳装置2.点样器3.吹风机4薄膜5滤纸6竹镊7玻璃板等试剂：1.巴比妥2.巴比妥钠3.氨基黑10B4.甲醇5.乙醇6.冰乙酸7.血清8.纤维素薄膜等6酪蛋白的制备4学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。必做基础不开放仪器：1.离心机2.抽滤装置3.电炉4.酸度计5温度计6常规玻璃仪器试剂：1.牛乳2.乙醇3.乙醚4.醋酸缓冲液（乙酸和乙酸钠）5冰醋酸7甲醛滴定法测定氨基酸41.进一步了解两性物质的特点。2.学习用甲醛滴定法定量氨基酸的原理和方法。必做基础开放仪器：1.滴定装置2.常规玻璃仪器3移液器4吸管试剂：1.甲醛2.酚酞3.甘氨酸4.氢氧化钠5等8考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量4掌握考马斯亮蓝法定量蛋白质的原理和方法。必做基础开放仪器：1.分光光度计2.常规玻璃仪器3移液器试剂：1.考马斯亮蓝G-2502.牛血清蛋白3.磷酸4.乙醇5酒石酸钾钠6亚硫酸氢钠等9酵母核糖核酸的分离及组分鉴定81.了解核酸的组分。2.学习RNA的提取方法。3.掌握RNA组分鉴定的方法。必做提高开放仪器：1.离心机2.电子天平3.水浴锅4.常规玻璃仪器5.酸度计6抽滤装置试剂：1.酵母粉2.氨水3.三氯化铁4.苔黑酚5.钼酸铵6.维生素C7.硫酸8.氢氧化钠9.冰乙酸10.无水乙醚11.乙醇12乙醇13盐酸等10紫外吸收法测定核酸含量41.学习紫外吸收法测定核酸含量的原理和技术。2.了解紫外分光光度计的基本原理和使用方法。必做基础不开放仪器：1.紫外分光光度计2.离心机3.电光天平4.冰箱5.常规玻璃仪器试剂：1.RNA和DNA2.氨水3.高氯酸4.钼酸铵5三羟甲基氨基甲烷6.EDTA7苔黑粉8.二苯胺9高氯酸10三氯乙酸11蔗糖12氯化镁等11酶的特性41.加深对酶性质的认识。2.了解温度、PH值、激活剂及抑制剂对酶活性的影响。必做基础开放仪器：1.水浴锅2.电炉3.常规玻璃仪器4沸水浴试剂：1.蔗糖2.淀粉3.蔗糖酶4.硫酸铜5.柠檬酸6.柠檬酸钠7.碳酸钠8.碘9.碘化钾10.磷酸氢二钠11.硫酸钠12.氯化钠13硫酸钠等12米氏常数的测定4学习测定米氏常数的一种方法，即双倒数作图法。必做基础开放仪器：1分光光度计2.常规玻璃仪器3移液器试剂：1.胰蛋白酶2.牛血清蛋白3.酪蛋白4纤维素粉5纤维素酶6氢氧化钠7盐酸8甲醛等13碱性磷酸酶的提取及活性鉴定81.学习碱性磷酸酶提取及活性测定的原理和方法。2.了解酶提取、纯化的一般步骤。选做提高开放仪器：1.分光光度计2.离心机3.玻匀浆器4.水浴锅试剂：1.醋酸镁2.醋酸钠3.正丁醇4.丙酮5.三羟基甲基氨基甲烷6.结晶酚7.硫酸钠8.碘9.硫代硫酸钠10.二水合磷酸苯二钠11.4-氨基安替比林12.铁氢化钾13.硼酸14.无水碳酸钠15.碳酸氢钠16对硝基酚17吡啶18三氯氧化磷19氢氧化钡20乙醚21兔肝等14维生素C含量的测定61.学习定量测定维生素C的原理和方法。2.掌握滴定方法的基本操作技术。必做提高不开放仪器：1.滴定装置2.组织捣碎机3.常规玻璃仪器试剂：1.蔬菜2.维生素C3.草酸4.2，6-二酚靛酚5.碳酸氢钠6偏磷酸7盐酸8醋酸9冰醋酸等15血糖的定量测定61.掌握磷钼酸比色法测定血糖的原理和方法。2.了解学堂测定的意义。必做提高开放仪器：1.分光光度计2.微量吸血管3.电炉4.恒温水浴锅5.常规玻璃仪器试剂：1.草酸钾2.钨酸钠3.葡萄糖4.酒石酸5.钼酸6.苯甲酸7.硫酸8.碳酸钠9鸡或兔子等16糖原的提取和鉴定61.掌握糖原的提取和鉴定方法。2.了解糖原在代谢中的转化及生理意义。必做提高开放仪器：1.水浴锅2.离心机3.电炉4.匀浆机试剂：1.三氯乙酸2.碘化钾3.氯化钠4.柠檬酸钠5液体石蜡6氢氧化钙7偏磷酸8硫酸铜9硫酸10磷酸而氢钾11磷酸氢二钠12对羟基联苯13丙酮14无水乙醇15肝脏或肌肉等17脂肪酸的β-氧化41.掌握测定β-氧化作用的原理和方法。2.了解酮体的意义。必做基础开放仪器：1.滴定装置2.恒温水浴3.吸量管等试剂：1.正丁酸2.硫代硫酸钠3.磷酸氢二钠4.磷酸二氢钠5.三氯乙酸6.氯化钠7淀粉8盐酸9氢氧化钠10碘11碘化钾12新鲜肝脏等18血清转氨酶活力的测定81.学习转氨酶活力测定的原理和方法。2.了解转氨酶在代谢中的重要作用及其在临床诊断中的意义。选做提高开放仪器：1.分光光度计2.恒温水浴3.其它试剂：1.磷酸二氢钾2.磷酸氢二钾3.丙氨酸4.酮戊二酸5.氯仿6.2，4-二硝基苯肼7.丙酮酸钠8.氢氧化钠9.盐酸10.血清等19离子交换柱层析法分离氨基酸或核81.学习离子交换法分离氨基酸的基本原理和操作技术。2.进一步了解氨基酸的等电点的实践意义。选做提高开放仪器：1.离子交换装置2.微量进样器3.收集器4.分光光度计5.核酸蛋白检测仪6层析冰柜试剂：1.各种氨基酸2.磷酸缓冲液3.离子交换树脂（阴、阳）4.羧甲基苷酸纤维素5盐酸6柠檬酸7氢氧化钠8茚三酮9乙二醇单甲醚等20壳聚糖固定化蛋白质（或酶）的作用151.学习壳聚糖固定蛋白质的原理和技术。2.了解固定化酶的意义3.了解固定化酶在实践中是作用选做创新开放仪器：1.离心机2.磁力搅拌器3.紫外分光光度计4.核酸蛋白检测仪5.冰柜6.水浴锅7.透析袋试剂：1.壳聚糖2.戊二醛3.牛血清蛋白4.DEAE-纤维素5.SephadexG25、50、100、2006.DEAE-葡聚糖凝胶A25、A507木聚糖等21蛋白质的盘状电泳81．学习圆盘状电泳的原理和技术选做提高开放仪器：1电泳仪2圆盘电泳槽3微量加样器，等试剂：1聚丙烯酰胺2甲叉双丙烯酰胺3Tris4过硫酸胺5巴比妥6巴比妥钠7氨基黑10B，8四甲基乙二胺9核黄素10溴芬蓝等22凝胶过滤法测定蛋白质分子量101学习蛋白质分子量的测定方法和它测定的重要性选做提高开放仪器：1层析柱2恒压瓶3紫外分光光度计4部分收集器5蛋白检测仪6玻璃仪器7层析冰柜等药品：1葡聚糖凝胶G-2002蓝葡聚糖20003氯化钠4细胞色素C5卵清蛋白6牛血清蛋白7γ-球蛋白8胰蛋白酶等23不同品种的小麦萌发过程中淀粉酶活力的比较151．了解小麦萌发过程中淀粉酶活力变化的特点2．学习淀粉酶活力的测定方法选做创新开放仪器：分光光度计、离心机、水浴锅、移液枪、刻度试管、生化培养箱等药品：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾淀粉、3，5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、氯化钠等